全 文 ：2013年 10月第 30卷第 10期
Oct ． 2013,Vol．30 No．10
天 津 中 医 药
Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine
朱砂七总蒽醌对S180荷瘤
小鼠凋亡基因表达的影响*
赵 勤 1，2，卫 昊 1，胡 锐 1，吕 腾 1，孙芳云 2
（1.陕西中医学院，咸阳 712046；2.西藏民族学院，咸阳 712082）
·实验研究·
摘要：[目的]观察朱砂七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠凋亡基因 c－myc、Bcl－2和突变型 p53表达的影响。[方法]建立
S180荷瘤小鼠模型，分成 4组：模型对照组，阳性对照环磷酰胺组和朱砂七总蒽醌大、小剂量组，灌胃给药第 11天，
取各组小鼠的瘤组织，采用实时定量 PCR法检测各组小鼠肿瘤组织 c－myc、Bcl－2和突变型 p53基因的表达。[结果]
朱砂七总蒽醌 1．2 g/kg和 0．3 g/kg剂量组 c－myc、Bcl－2和突变型 p53mRNA表达量较模型组均显著降低，与模型组比
较有统计学意义（P＜0．01或 P＜0．05）。[结论]朱砂七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠的抑瘤作用可能是通过下调小鼠 S180瘤组
织 c－myc、Bcl－2和突变型 p53mRNA的表达而实现的。
关键词：朱砂七总蒽醌；S180瘤株；凋亡基因；c-myc；Bcl-2；p53
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1519（2013）10-06 9-0
*基金项目：陕西省教育厅专项科研计划项目（09JK414）。
作者简介：赵 勤（1970-），女，副教授，研究方向为中药抗肿
瘤研究。
朱砂七为蓼科植物，主要分布在陕西秦岭山
区，为太白七药之一，药用价值较高[1]。本课题组在
前期的研究中发现朱砂七总蒽醌（ZSQ）有抗肿瘤作
用，可以抑制小鼠 S180肉瘤和人白血病 HL-60细胞
的增殖及其诱导凋亡的作用[2-3]。但朱砂七总蒽醌是
通过什么途径诱导凋亡、有哪些凋亡基因参与尚不
清楚，本实验通过观察朱砂七总蒽醌对 S180小鼠肉
瘤凋亡相关基因 c-myc、Bcl-2和 p53表达的影响，
试图揭示朱砂七总蒽醌抑制 S180小鼠肉瘤的增殖及
凋亡的机制，为临床使用提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验药物 朱砂七总蒽醌（ZSQ，由本实验室
提取），用 1%羧甲基纤维素钠配成 10%混悬液。环
磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产。
1.1.2 实验动物与瘤株 昆明系小鼠，雌性，18~22 g，
由西安交通大学医学院实验动物中心提供，S180来
自陕西省中医药研究院定期传代瘤株。
1.1.3 主要试剂 Trizol试剂盒（美国 Invitrogen公
司）；逆转录试剂盒（美国 Invitrogen公司）；SYBR
qPCR mix 试剂盒（TOYOBO，日本）；100 bp DNA
Ladder（北京全式金生物技术有限公司）；PCR引物
由上海生工生物工程有限公司合成。
1.1.4 主要仪器 PCR Detection System（SLAN，
HONGSHI），Neofuge 15R型冷冻离心机（力康生物
医疗科技控股有限公司）DYY－6C 型电泳仪、WD－
9405A型脱色摇床（北京六一仪器厂），AX－Ⅱ暗匣
（广东粤华医疗器械厂有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 S180移植瘤小鼠模型的建立 无菌条件下从
接种 7 d生长良好的 S180小鼠腹腔抽取腹水，生理
盐水 1∶4稀释，制成细胞数为 2.5×107个/mL的 S180
瘤液，每只小鼠取 0.2 mL，接种在右侧腋窝皮下。24 h
后称质量，采用随机数字表法随机分为 4组：朱砂
七总蒽醌大、小剂量组（1.2 g/kg，0.3 g/kg）、环磷酰胺
阳性对照组（20 mg/kg）和模型对照组。除环磷酰胺
组外各组每日灌胃 1次，每次 0.02 mL/g，环磷酰胺
组腹腔注射，每 2 d注射 1次。连续给药 11 d后处
死全部小鼠，剥离瘤组织，滤纸吸干水分后迅速置
于液氮内冷冻，储存于-80 ℃冰箱备用。
1.2.2 实时荧光定量（Real-time PCR）法检测 S180荷
瘤小鼠瘤组织 c-myc、Bcl-2和突变型 p53mRNA表
达量 将大约 100 mg瘤组织放入匀浆器，按照试剂
说明书提取肿瘤组织总 RNA、逆转录和扩增，总体
系为 20 μL，反应条件：95 ℃预变性 1 min；95 ℃变
性 15秒,58 ℃退火 15秒,72 ℃延伸 45秒,40个扩增
循环，72 ℃补循环 5 min。β-Actin为内参，各基因引
物均由上海生工生物工程有限公司合成，如下：c-myc
上游 :5-GGA AAC GAC GAG AAC AGT TG-3, 下
DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2013.10.11
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Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine
2013年 10月第 30卷第 10期
Oct． 2013 ,Vol ．30 No．10
表 1 朱砂七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠瘤组织中 c-myc
mRNA的表达（x±s，n＝3）
Tab.1 The effect of ZSQ on expression of c-myc mRNA in
tumor of S180-bearing mice(x±s,n=3)
组别
剂量
（g/kg）
c-myc mRNA
（2－ΔΔCT）
比值
（%）
模型对照组 - 0.887±0.102 100.00
环磷酰胺组 0.02 0.087±0.005** 9.80
朱砂七大剂量组 1.20 0.158±0.005** 17.80
朱砂七小剂量组 0.30 0.617±0.007** 69.56
注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。
表 2 朱砂七总蒽醌对小鼠瘤组织中 Bcl-2 mRNA的表达
（x±s，n＝3）
Tab.2 The effect of ZSQ on expression of Bcl-2 mRNA in
tumor of S180-bearing mice（x±s，n＝3）
组别
剂量
（g/kg）
Bcl-2 mRNA
（2-ΔΔCT）
比值
（%）
模型对照组 - 0.990±0.018 100.00
环磷酰胺组 0.02 0.288±0.010** 029.09
朱砂七大剂量组 1.20 0.315±0.005** 031.82
朱砂七小剂量组 0.30 0.816±0.159 082.42
注：与模型对照组比较，**P<0.01。
表 3 朱砂七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠瘤组织中突变型
p53 mRNA的表达（x±s，n＝3）
Tab.3 The effect of ZSQ on expression of mutation
p53 mRNA in tumor of S180-bearing mice（x±s，n＝3）
组别
剂量
（g/kg）
p53 mRNA
（2-ΔΔCT）
比值
（%）
模型对照组 - 1.018±0.107 100.00
环磷酰胺组 0.02 0.309±0.016** 30.35
朱砂七大剂量组 1.20 0.229±0.008** 22.50
朱砂七小剂量组 0.30 0.132±0.021** 12.97
注：与模型对照组比较，**P<0.01。
游:5-GCC AAG GTT GTG AGG TTA GG-3，产物长
度 172 bp；p53 上游 :5 -CGA CCT ATC CTT ACC
ATC ATC-3,下游:5-GGG TGA AAT ACT CTC CAT
CAA G-3，产物长度 244 bp；Bcl-2 上游 :5-TGA
CTT CTC TCG TCG CTA CCG-3, 下游: 5-CTA CCC
AGC CTC CGT TAT CCT-3，产物长度 284 bp；β-
Actin 上游: 5-CTG AGA GGG AAA TCG TGC GT-
3, 下游: 5-CCA CAG GAT TCC ATA CCC AAG A-
3,产物长度 208 bp。通过 PCR产物的熔解曲线观察
实时荧光定量 PCR反应产物的特异性。反应结束后
得出循环阈值（CT），用 2-ΔΔCT相对定量法分析结果，
2-ΔΔCT=目的基因的量，ΔΔCT=（CT目的基因-CT管家
基因）实验组-（CT目的基因-CT管家基因）对照组。
以模型组的 mRNA相对量为标准，各组目标基因的
mRNA相对量与之相比，求得比值。PCR产物琼脂
糖电泳后凝胶成像系统中观察拍照记录。
1.2.3 统计学处理 采用 SPSS18.0统计软件分析,
计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示,组间比较采
用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PCR产物的溶解曲线 实时定量 PCR产物的
溶解曲线显示，c-myc、Bcl-2和 p53产物均为单峰，
无引物二聚体或非特异性产物存在。
2.2 朱砂七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠 c-mycmRNA的表
达 朱砂七总蒽醌大、小剂量组和环磷酰胺组 c-myc
mRNA的相对表达量均降低，与模型组比较，差异有
显著统计学意义（P＜0．01 或 P＜0．05），结果见表 1，
图 1。
2.3 朱砂七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠 bcl-2mRNA 的
表达 朱砂七总蒽醌大、小剂量组和环磷酰胺组
Bcl-2 mRNA的相对表达量均降低，与模型组比较，
差异有统计学意义（P＜0．05），结果见表 2，图 1。
2.4 朱砂七总蒽醌对 S180 荷瘤小鼠突变型 p53
mRNA的表达 朱砂七总蒽醌大、小剂量组和环磷
酰胺组突变型 p53mRNA 的相对表达量均降低，与
模型组比较，差异有统计学意义（P＜0．01），结果见表 3，
图 1。
600 bp
500 bp
400 bp
300 bp
200 bp
100 bp
β-actin
208 bp
600 bp
500 bp
400 bp
300 bp
200 bp
100 bp
C-myc
172 bp
M 1 2 3 4M 1 2 3 4
600 bp
500 bp
400 bp
300 bp
200 bp
100 bp
600 bp
500 bp
400 bp
300 bp
200 bp
100 bp
M 1 2 3 4M 1 2 3 4
Bcl-2
284 bp
p53
244 bp
M：Marker；1：环磷酰胺组；2：0.3 g/kg朱砂七总蒽醌小剂量组；
3：1.2 g/kg朱砂七总蒽醌组；4模型对照组
图 1 RT-PCR检测各组小鼠瘤组织中 c-myc
mRNA的表达
Fig.1 The effect of ZSQ on expression of c-myc mRNA in
mice tumor tissue of each group by RT-PCR
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3 讨论
恶性肿瘤是一种常见病和多发病，也是当今造
成人类死亡最主要的一种疾病，病死率极高。近年
来,关于肿瘤发生机制的分子生物学研究表明,肿
瘤的发生与癌基因的激活及抑癌基因的失活和细
胞凋亡调控基因的失调密切相关，凋亡调控基因在
肿瘤的发生、发展及治疗中起着重要作用[4]。抗肿瘤
药物调控肿瘤凋亡基因成为抗肿瘤的途径之一。研
究中也揭示朱砂七总蒽醌能够诱导肿瘤细胞凋亡，
那么朱砂七总蒽醌诱导肿瘤细胞凋亡受哪些凋亡
基因的调控？笔者在本实验中研究了和凋亡关系密
切的 3种基因 c-myc、突变型 p53和 Bcl-2在朱砂
七总蒽醌药物治疗组中的表达，试图阐明其抗肿瘤
机制。
c-myc、Bcl-2和 p53这 3种凋亡相关基因中，
c-myc 基因是一个双向调控基因，Bcl-2 是凋亡抑
制基因，p53是凋亡促进基因。c-myc是一个重要的
细胞原癌基因，它掌握着细胞的生死大权，调控着
细胞的增殖和凋亡，在多种恶性肿瘤中，都有 c-myc
基因的过度表达[4]。p53是一种非常重要的抑癌基
因，有野生型和突变型两种，野生型能够修复损伤
的 DNA，如果修复失败就诱导细胞凋亡基因激活，
促进细胞凋亡，如下调 Bcl-2，上调 Bax等。突变型
p53的作用和野生型 p53正好相反, 具有促进细胞
生长和抗凋亡的作用，p53基因突变或缺失常导致
肿瘤的发生，人类近半数肿瘤都存在着 p53基因的
突变[5]。Bcl-2属原癌基因，是一种重要的抗凋亡基
因，Bcl-2通常被认为是细胞凋亡控制的最后通路
之一。它过度表达可抑制细胞凋亡，促进细胞过度
增殖而有利于肿瘤发生。Bcl-2可被野生型 p53基
因调控,下调、抑制表达,从而介导细胞凋亡[6]。
本实验结果显示：朱砂七总蒽醌大、小剂量组
c-myc、Bcl-2和突变型 p53mRNA的相对表达量均
降低，与模型组比较，差异有统计学意义，说明朱砂
七总蒽醌对 S180荷瘤小鼠肿瘤细胞突变型 p53基因
表达下调，导致 Bcl-2基因的表达也下调，促进肿瘤
细胞的凋亡，抑制肿瘤的生长。有文献报道，c-myc
和 Bcl-2基因共同表达，可以使细胞永生增殖，本研
究结果显示 c-myc和 Bcl-2基因表达下调，说明二
者共同作用抑制了细胞永生增殖，促进了凋亡。因
此，提示朱砂七总蒽醌的抑瘤作用是通过下调凋亡
相关基因 c-myc、Bcl-2和突变型 p53mRNA的表达
而实现的。
朱砂七总蒽醌抑制肿瘤的增殖还受到哪些基
因调控以及蛋白水平是否和基因水平一致，还有待
于进一步研究。
参考文献：
[1] 刘西京，张恩户，郭惠玲,等.朱砂七研究概况[J].陕西中医学院学
报，2003，26(3)：62-63.
[2] 赵 勤，郭惠玲,郭 玲，等.朱砂七总蒽醌抗肿瘤的实验研究[J].
辽宁中医杂志,2008，35(8)：1222-1223.
[3] 赵 勤，郭 玲，胡 锐,等.朱砂七总蒽醌抑制 HL-60细胞增
殖和诱导凋亡的实验研究 [J]. 中药药理与临床，2012,28（5）：
66-68.
[4] 吴一飞,李灼日.原癌基因 c-myc与恶性肿瘤[J].医学临床研究,
2008, 25(9) :1698-1700.
[5] 汪进良,焦顺昌.p53基础研究及药物应用新进展[J].中国药物应
用与监测,2008, 5(2):38-40.
[6] 贾 晓. p53与抗肿瘤免疫[J].细胞与分子免疫学杂志,2008,24
(12):1214-1215.
（收稿日期：2013-05-20）
Effect of total anthraquinone from Zhushaqi on expression of apoptosis gene in S180-bearing mice
ZHAO Qin1，2, WEI Hao1, HU Rui1, LV Teng1，SUN Fang-yun2
（1.Shanxi College of TCM，Xianyang 712046, China；2. Tibet National College, Xianyang 712082, China）
Abstract: [Objective] To study the effect of total anthraquinone from Zhushaqi(ZSQ) on c-myc, Bcl-2 and p53 mRNA expression in S180
tumour-bearing mice. [Methods] The S180 mice model was established. The mice were divided into 4 groups: blank control, positive con-
trol with cyclophosphamide and ZSQ in high or low dose. Ten days after continuous treatment, all the mice were sacrificed and the tumor
tissue was collected. Real-time PCR was used to determine the effect of ZSQ on the expression of c-myc, Bcl-2 and p53 mRNA. [Re-
sults] ZSQ could significantly reduce the expression of c-myc, Bcl-2 and p53 mRNA expression in S180 tumor tissue. The average levels of
c-myc, Bcl-2 and p53 expression in low-dose and high-dose groups of ZSQ had significantly difference to that in control group (P<0.01 or
P<0.05). [Conclusion] Down-regulating the c-myc, Bcl-2 and p53 mRNA expression is probably one of the antitumor mechanisms of
ZSQ.
Key words：anthraquinone from Zhushaqi；S180 tumor； apoptosis gene；c-myc gene；Bcl-2 gene；p53 gene
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