全 文 ：雪莲果中甲霜灵 、异菌脲和除虫脲
残留量的高效液相色谱测定方法
黎其万 1 , 刘宏程1 , 张玉荣2 , 王志飞3 , 黄相中3 , 唐利斌4
(1.农业部农产品质量监督检验测试中心(昆明), 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 , 昆明
650223;2.玉溪市农业科学院 , 玉溪 653100;3.云南民族大学化学与生物技术学院 , 昆明 650091;4.昆
明物理研究所 , 昆明 650223)
摘　要:采用高效液相色谱法测定雪莲果中甲霜灵 、异菌脲和除虫脲农药残留
量 。通过乙腈提取 , 固相萃取(SPE)净化 , Hypersil Gold(4.6 mm i.d.×250 mm ,
5μm)柱 , V(乙腈)∶V(20 mM NH4Ac)=70:30为流动相 , 柱温 30 ℃, 流速 1.0
mL min进行分离 , 进样 20 μL , 2487双波长紫外检测器进行检测。添加回收率
为 78.4%～ 92.1%;RSD分别为3.6%～ 6.3%;甲霜灵 , 异菌脲和除虫脲检出
限分别为 0.05 , 0.04 , 0.02μg mL。
关键词:雪莲果;甲霜灵;异菌脲;除虫脲;高效液相色谱
中图分类号:O657.7　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-0720(2007)12-083-04
　　雪莲果原产南美州安第斯山脉 , 是印第安人
的食品。其果型为块根 , 似红薯 , 脆 、甜 , 口感好 ,
富含人体所需的维生素和矿物质 , 具有降脂 、降
压 、控制胆固醇减肥作用 , 雪莲果所含糖为寡糖 ,
能调肠通胃 , 通便解秘 , 其可以像水果一样生吃
和榨果汁 , 也可以象萝卜等一样炖排骨 、煲汤 , 为
较好的天然保健食品 , 通过国外引种 , 在昆明市
安宁县已大面积种植 。
甲霜灵 , 英文名 Metalaxyl , 化学名 N-(2-甲氧
基乙酰基)-N-(二甲基苯基)-消旋-氨基丙酸甲酸 ,
在防治瓜果 、蔬菜的霜毒病 、疫病 ,有较好疗效 。
异菌脲 , 英文名 iprodione , 化学名:3-(3 ,5-二氯苯
基)-1-异丙基氨基甲酰基乙内酰脲 , 它广泛用于葡
萄 、果树 、花卉 、蔬菜 、谷物 、马铃薯及水果的贮
藏 , 防止灰霉 、叶点等多种病害。除虫脲 , 英文
名:diflubenzuron , 化学名:1-(4-氯苯基)-3-(2 ,6-二
氟苯甲酰基)脲 , 对鳞翅目幼虫有特效 , 对鞘翅
目 、双翅目多种害虫有很好效果 。因此 , 在蔬菜 、
水果和土壤中 , 容易产生残留。国家标准规定水
果中甲霜灵 、异菌脲和除虫脲最大残留量不得超
过 1.0 mg kg 。通过快速扫描和确认这些不同种类
农药残留对于调查潜在的食品安全是重要的 , 特
别是 GC MS能同时扫描 400多种农药残留量[ 1 , 2] 。
但是 , GC MS对于热不稳定和沸点较高农药则不
能检测 。这 3 种农药通常使用高效液相色谱方法
(HPLC)来测定 , 有黄瓜[ 3] 、栗子[ 4] 、植物[ 5] 、土壤
水[ 6] , 水果[ 7] 、桔子[ 8] 中除虫脲残留量的HPLC 测
定方法;草莓[ 9] 苹果[ 11] 、土壤[ 10] 中异菌脲残留量
的HPLC测定方法 , Sukul P 等[ 12] 综合论述了 2000
年以前的甲霜灵残留量的分析方法;使用HPLC 来
测定土壤[ 13] 、苹果[ 14] 、向日葵[ 15] 和尿液[ 16] 中甲霜
灵残留量的HPLC测定方法 。但是没有一个方法能
同时测定这些不同类型的农药残留量。混配农药 ,
在低毒农药中掺加禁用农药或者多种农药混合施
用 , 因此本文目的是研究一种简单 、快速的分析
方法能同时测定这些不同类型的农药。为监控雪
莲果的无公害生产提供技术支撑 。
—83—
第 26 卷第 12期
2007 年 12月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.26.No.122007-12
收稿日期:2006-11-18;修订日期:2007-01-25
基金项目:云南省农业科技攻关(2006NG01)项目资助
作者简介:黎其万(1964-), 男 , 研究员
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2007.0364
1　实验部分
1.1　仪器及试剂
Waters Alliance 2695 高效液相色谱仪 , 配置四
元泵溶剂淋洗系统 , 自动进样系统 , 2487双波长
紫外检测器 , N2 吹仪 (Organomation Associates
Jnc.), 固相萃取装置(SUPELCO)及 LC-NH2 小柱
(500 mg 3 mL)(ANPEL), Sartorius 纯水器(Germa-
ny), 高速匀浆机(Heidolph Diax 900)。甲霜灵 , 异
菌脲和除虫脲 100μg mL (农业部环境保护科研监
测所), 甲醇和乙腈(Fisher , HPLC 级), 乙腈(分析
纯), 使用前重蒸 , NaCl(分析纯)。
1.2　色谱条件
色谱柱 Hypersil Gold (4.6 i.d.×250 mm , 5
μm), 流动相:V(乙腈)∶V(20 mM NH4AC)=70∶30
为流动相 , 柱温 30 ℃, 流速 1.0 mL min , 检测波
长为 225 nm和 260 nm , 进样 20μL。
1.3　标准曲线
用流动相配制 0.2 , 1.0 , 2.0 , 5.0 , 10 μg mL
的甲霜灵 、异菌脲和除虫脲标准溶液 , 取 20 μL进
样 , 测定峰面积 , 以峰面积对质量浓度作曲线 。
1.4　样品溶液制备及测定
准确称取 25 g绞碎样品于 250 mL 锥型瓶中 ,
加 50 mL乙腈 , 在高速匀浆机上匀浆 2 min , 将匀
浆好的样品过滤到 100 mL 的具塞量筒(量筒内预
先放 4 g NaCl), 收集滤液后盖上塞子 , 激烈振荡 1
min , 静置 10 min , 待乙腈和水完全分离。准确吸
取 10mL有机层于 50 mL烧杯置 80 ℃蒸汽上用N2
吹至近干 , 用2 mL V(甲醇)∶V(二氯甲烷)=2∶98
溶解样品 , 铝箔盖住杯口 , 用橡皮筋拴紧 , 静置30
min 。取 SPE-NH2 小柱 , 先用 5 mL V(甲醇)∶V(二
氯甲烷)=2∶98 冲洗柱子 , 上样 , 控制流速在 2
mL min , 收集洗脱液于 10 mL离心管中 2 mL V(甲
醇)∶V(二氯甲烷)=2∶98再洗两次柱子 , 真空抽
干 , N2 吹仪上吹干 , 用流动相准确定容 2.0 mL ,
经 0.2μm有机相滤膜过滤 , 取 20 μL 进样 , 测定
峰面积 , 按外标法定量 。
2　结果与讨论
2.1　检测波长的选择
取10 μg mL 浓度的单标标准品 , 在 200 ～ 800
nm波长扫描。从结果可知 , 最大吸收波长甲霜灵
为 220 nm , 除虫脲为 220 nm , 异菌脲为 257 nm。因
此 , 选用 225 nm 和 260 nm 双波长进行测定。如
图 1 , 在225 nm下 , 异菌脲出峰前后基线波动大 ,
260 nm 刚好可以弥补此缺陷 。
图 1　甲霜灵 、异菌脲和除虫脲双波长色谱图
Fig.1　The chromatograms of the standard solution of metalaxyl , diflubenzuron and iprodine at two wavelengths
(a)225 nm;(b)260 nm
2.2　色谱分离条件
以 V(甲醇)∶V(水)=70∶30为流动相 , 流速
1.0 mL min , 峰型较宽 , 异菌脲和除虫脲不能完全
分离;在乙腈-水体系相同条件下 , 对异菌脲影响
大 , 异菌脲出峰时间提前 , 异菌脲和除虫脲有很
大分离度 , 但峰型拖尾。通过在水中加入乙酸胺
(0.02 mol L)后 , 抑制氮原子与硅胶中硅羟基的结
合 , 峰型得到改善 。
2.3　SPE的净化
NH2 成品柱对糖 、蛋白有强吸附效果 , 还有弱
阴离子交换作用 , 通过选择不同洗脱剂对样品有
不同的净化效果 , 如用二氯甲烷作为淋洗剂 , 则
异菌脲回收率偏低 , 需要增加洗脱剂的极性 , 我
们使用甲醇来调节洗脱剂的极性 , 通过实验不同
比率的二氯甲烷 甲醇 , 找到最佳洗脱剂为 V(二
氯甲烷)∶V(甲醇)=98∶2。
2.4　影响回收率因素
在氮吹过程中 , 氮气流速的控制很关键 , 流
速太低 , 将引起液体表面温度过高 , 导致异菌脲
将发生分解;流速太高 , 液体飞溅 , 控制氮气流速
—84—
第 26卷第 12 期
2007 年 12 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.26.No.122007-12
为100 mL min。在氮吹仪上不能让液体完全吹干 ,
当液体还剩一至两滴时 , 马上从氮吹仪上取下 ,
用洗耳球吹干 , 加入 SPE 淋洗剂 , 否则异菌脲回
收率偏低 。萃取过程中 , 乙腈和水分层时 , 静置时
间至少要超过 20 min , 否则乙腈中带有少量水 , 在
氮吹过程中很难吹干 , 将影响 3种农药的回收率 ,
特别对异菌脲影响最大。
2.5　线性关系
甲霜灵 、异菌脲和除虫脲在 0.2 ～ 10 μg mL的
范围内线性关系良好 , 在此范围内定量准确。在
所选条件下 , 回归方程分别为 y =1.34e3ρ+
3.11e3(r=0.9992)(甲霜灵)y =5.59e3ρ-2.09e4
(r =0.9998)(异菌脲)y =4.11e3ρ-5.67e4(r =
0.9992)(除虫脲);甲霜灵 , 异菌脲和除虫脲的检
出限LOD(根据信燥比S N=3)为0.05 , 0.04 , 0.02
μg mL和方法的定量限 LOQ为 0.2μg mL。
2.6　准确度和精密度
取雪莲果 5份 , 分别加入甲霜灵 、异菌脲和除
虫脲混合溶液 2.5和 5 、10 μg mL各 1 mL , 进行回
收率实验 , 计算平均回收率和相对标准偏差 , 见
表 1。
表 1　甲霜灵 , 异菌脲和除虫脲的回收率和 RSD(n =5)
Tab.1　The recoveries and RSDs of metalaxyl , iprodione and diflubenzuron(n=5)
样品 添加量
w (mg kg)
甲霜灵
回收率 % RSD %
异菌脲
回收率 % RSD %
除虫脲
回收率 % RSD %
雪莲果 0.1 86.7 6.3 88.7 5.8 84.3 5.1
0.2 78.4 4.6 82.5 4.6 88.9 4.1
0.4 92.1 3.9 90.1 4.9 87.1 3.6
2.7　样品测定
用本法对市售雪莲果和无公害认证雪莲果 20
多个不同产地样品进行测定 , 其中两个样品检测
出甲霜灵 , 其质量分数为 0.28和 0.12 mg kg 。
异菌脲残留容易分解 , 注意在实验过程中 ,
温度和光照对异菌脲的影响。异菌脲标准品在低
温冷冻保存可放3个月 , 稀释液现用现配。该方法
能同时测定 3种不同种类农药残留量 , 有很高的
实用价值 。
参考文献
[ 1] 　Pang G F , Liu Y M , Fan Ch L et al.Anal Bioanal Chem ,
2006 , 384:1366
[ 2] 　Stan H J.J Chromatogr A , 2000 , 892:347
[ 3] 　黄永春 , 王继军 , 傅学起等.农业环境科学学报 ,
2004 , 23(3):615
[ 4] 　Nejmanova J , Cvacka J , Hrdy I et al.Pest Manag Sci ,
2006 , 62(3):274
[ 5] 　Balinova A.J Chromagr A , 1998 , 823(1-2):11
[ 6] 　Dommarco R, Santilio A , Fornarelli L et al.J Chromatogr
A , 1998 , 825(2):200
[ 7] 　Valenzuela A I , Lorenzini R , RedondoM J et al.J Chrom-
atogr A , 1999 , 839(1-2):101
[ 8] 　Valenzuela A I , Pico Y , Font G.J AOAC Int , 2001 , 84
(3):901
[ 9] 　Stensvand A , Christiansen A.J Agric Food Chem , 2000 ,
48(3):917
[ 10] 　Martinez G M , Martinez V J.J Chromatogr A , 1997 , 778
(1-2):139
[ 11] 　宋国春 , 于建垒 , 张君亭等.农药科学与管理 ,
2004 , 25(8):10
[ 12] 　Sukul P , Spiteller M.Rev Environ Contam Toxicol , 2000 ,
164:1
[ 13] 　Monkiedje A , Spiteller M , Bester K.Environ Sci Techn-
ol , 2003 , 37(4):707
[ 14] 　Su Y , Mitchell S H , Mac AntSaoir S.Food Addit Cont-
am , 2003 , 20(8):720
[ 15] 　Zadra C , Marucchini C , Zazzerini A.J Agric Food Chem ,
2002 , 50(19):5373
[ 16] 　Carlucci G , Pasquale D D , Ruggieri F et al.J Chroma-
togr B , 2005 , 828(1-2):108
—85—
第 26 卷第 12期
2007 年 12月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.26.No.122007-12
Determination of metalaxyl , iprodione and diflubenzuron residues in yacon by HPLC
LI Qi-wan＊1 , LIU Hong-cheng1 , ZHANG Yu-rong2 , WANG Zhi-fei3 , HUANG Xiang-zhong3 and TANG Li-bin4
(1.Supervision &Testing Center for Farm Product Quality , ministry of agriculture (Kunming), Yunnan academy of
agriculture science , Kunming 650223;2.Yuxi academy of agriculture science , Yuxi 653100;3.Yunnan national
university chemistry and biotechnology college , Kunming 650091;4.Kunming Institute of Physics , Kunming
650223), Fenxi Shiyanshi , 2007 , 26(12):83 ～ 86
Abstract:An analytical method for the multiresidue determination of metalaxyl , iprodione and diflubenzuron in yacon
by HPLC was developed.The sample was extracted by acetonitrile , purified by SPE , separated with a Hypersil Gold
column (4.6×250 mm , 5 μm)and acetonitrile 20 mmoL NH4Ac(70 30 , v v)as mobile phase at column tempera-
ture of 30 ℃ and flow rate of 1.0 mL min , and detected with two wavelength 2487 UV detector.The recoveries of
metalaxyl , iprodione and diflubenzuron are 78.4%～ 92.1%.The relative standard deviations(RSDs)are 3.6%～
6.3%.The detection limits of metalaxyl , iprodione and diflubenzuron are 0.05 , 0.04 and 0.02 μg mL , respective-
ly.The method can determine three pesticide residues simultaneously and rapidly.
Keywords:Yacon;Metalaxyl;Iprodione;Diflubenzuron;HPLC
—86—
第 26卷第 12 期
2007 年 12 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.26.No.122007-12