全 文 ：书第２９卷 第４期
２０１６年１２月
　　　　　　 仲恺农业工程学院学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈｏｎｇｋａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
　　 　　　　　 Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．４
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１６
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－５６６３．２０１６．０４．０００ １６４ＺＫ０５
　
收稿日期：２０１６－０５－１７
作者简介：程庆伟（１９９０－），男，河南洛阳人，在读硕士研究生．　通信作者：Ｅｍａｉｌ：ｙｏｕｈｕａｃｈｉｎａ＠１２６．ｃｏｍ
美丽崖豆藤细胞培养及其多糖质量分数分析
程庆伟，梁韩枝，熊友华
（仲恺农业工程学院 园艺园林学院，广东 广州 ５１０２２５）
摘要：采用不同激素诱导美丽崖豆藤 （ＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａＣｈａｍｐ．）无菌苗下胚轴、叶片和茎尖产生愈伤组织，对
适宜的愈伤组织进行了液体培养，并对培养物与美丽崖豆藤干燥根 （牛大力）切片的多糖质量分数进行了比较．
结果表明：美丽崖豆藤无菌苗下胚轴、叶片和茎尖在不同的培养基上均形成愈伤组织，无器官分化发生；下胚
轴在含１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ培养基上形成的乳白色、易碎愈伤组织在液体培养基ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０７５ｇ／Ｌ酵母
提取物＋０７５ｇ／Ｌ水解酪蛋白中增殖速度很快，能以悬浮细胞形式增殖９代，之后培养物中开始出现较大的愈
伤组织块；悬浮细胞及后期形成的愈伤组织团块多糖质量分数分别为２０１％和２０７％，高于牛大力切片多糖的
１０４％，且差异极显著 （Ｐ＜００１）．表明美丽崖豆藤细胞培养可作为提取美丽崖豆藤多糖的重要途径．
关键词：美丽崖豆藤 （ＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａＣｈａｍｐ．）；细胞培养；细胞团聚体；苯酚－硫酸法；多糖
中图分类号：　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１６７４－５６６３（２０１６）０４－００００－０４
ＣｅｌｃｕｌｔｕｒｅｏｆＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａＣｈａｍｐ．ａｎｄｉｔｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｃｏｎｔｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓ
ＣＨＥＮＧＱｉｎｇｗｅｉ，ＬＩＡＮＧＨａｎｚｈｉ，ＸＩＯＮＧＹｏｕｈｕａ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＬａｎｄｓｃａｐｅＡｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，ＺｈｏｎｇｋａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２２５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｘｃｉｓｅｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓｅｇｍｅｎｔｓ，ｌｅａｖｅｓａｎｄｓｈｏｏｔｔｉｐｓｆｒｏｍｓｔｅｒｉｌｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａ
ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｎｄｕｃｅｃａｌｕｓｉｎＭＳｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｒｅｓｕｌｔｉｎｇｃａｌ
ｌｕｓｗａｓｆｕｒｔｈｅｒｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎＭＳｌｉｑｕｉｄｍｅｄｉｕｍ．Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅｓａｎｄｒｏｏｔｓｏｆ
Ｍ．ｓｐｅｃｉｏｓａｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄｂｙｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｌｅｘ
ｐｌａｎｔｓ（ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ，ｌｅａｖｅｓａｎｄｓｈｏｏｔｔｉｐｓ）ｆｏｒｍｅｄｃａｌｕｓｗｉｔｈｏｕｔｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＭＳｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉ
ｎｉｎｇ１ｍｇ／Ｌ６－Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ（６－ＢＡ），１ｍｇ／ＬＴｈｉｄｉａｚａｕｒｏｎ（ＴＤＺ）ｏｒ１ｍｇ／Ｌ２，４－ｄｉｃｈｌｏｒｏ
ｐｈｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（２，４－Ｄ）；ＥｘｃｉｓｅｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓｅｇｍｅｎｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｏｎＭＳｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１ｍｇ／Ｌ
２，４－Ｄｐｒｏｄｕｃｅｄｃｒｅａｍｙａｎｄｆｒａｇｉｌｅｃａｌｕｓ，ｗｈｉｃｈｇｒｅｗｆａｓｔｗｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｒｅｄｉｎｔｏＭＳｌｉｑｕｉｄｍｅｄｉｕｍ
ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ０７５ｇ／Ｌｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ，０７５ｇ／Ｌａｃｉｄｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄｃａｓｅｉｎ，１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄａｎｄ３％
（ｗ／ｖ）ｓｏｕｒｃｅ．Ｔｈｉｓｃａｌｕｓｄｉｓｐｅｒｓｅｄｗｅｌａｎｄｋｅｐｔｆｏｒ９ｔｈｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ａｆｔｅｒ９ｔｈｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ，
ｓｏｍｅｌａｒｇｅｃｅｌａｇｇｒｅｇａｔｅｓｂｅｇａｎｔｏｆｏｒｍ．Ｗｅｌｄｉｓｐｅｒｓｅｄｃａｌｕｓａｎｄｌａｒｇｅｃａｌｕｓｃｌｕｍｐｓｃｏｎｔａｉｎｅｄ２０１％
ａｎｄ２０７％ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｍｏｒｅｔｈａｎｔｈａｔｉｎｒｏｏｔｓｏｆＭｓｐｅｃｉｏｓａ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ
ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｗａｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｗａｙｔｏｐｒｏｄｕｃｅＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａＣｈａｍｐ．；ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅ；ｃｅｌａｇｇｒｅｇａｔｅｓ；ｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ；ｐｏｌｙ
ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
　　美丽崖豆藤 （ＭｉｌｅｔｉａｓｐｅｃｉｏｓａＣｈａｍｐ．），又称
牛大力藤 （海南植物志）和山莲藕 （广西），为豆
科崖豆藤属藤本植物，产于福建、湖南、广东、海
南、广西、贵州和云南等地［１］，以根入药，俗称
“牛大力”．美丽崖豆藤是两广地区广泛采用的药
食两用植物，具有补虚润肺和强筋活络的功效，用
于治疗风湿性关节炎、腰肌劳损和体虚白带等
症［２］．现代研究表明，美丽崖豆藤根部含有苯丙
素类、三萜类化合物、植物甾醇以及多糖等物
质［３－４］．多糖是牛大力的重要活性物质，药理研究
表明，牛大力多糖具有抗氧化［５］、抗炎［６］、抗疲
劳［７］和免疫调节［６，８］等作用．
网络出版时间：2016-11-21 10:28:34
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1660.S.20161121.1028.010.html
美丽崖豆藤的组织培养与快速繁殖已有较多报
道［９－１３］，其愈伤组织的诱导非常容易，但分化较
难．同属植物香花崖豆藤 （Ｍ．ｄｉｅｌｓｉａｎａＨａｒｍｓｅｘ
Ｄｉｅｌｓ）也出现这种情况［１４］．作者对美丽崖豆藤的
愈伤进行液体培养，比较培养物与牛大力干燥根切
片的多糖质量分数，以期能够为利用生物技术手段
生产美丽崖豆藤多糖提供参考．
１　材料与方法
１１　材料与试剂
美丽崖豆藤种子取自广东省江门市．牛大力切
片，广州市华宇药业有限公司．
６－苄氨基腺嘌呤 （６－Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ，６－
ＢＡ），上海伊卡生物技术有限公司 （纯度 ～９９％）．
２，４－二氯苯氧乙酸 （２，４－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ，２，４－Ｄ）（纯度≥９８％）和噻苯隆 （Ｔｈｉｄｉａｚａ
ｕｒｏｎ，ＴＤＺ），Ｓｉｇｍａ公司．无水葡萄糖 （分析纯），
博奥生物科技有限公司．无水乙醇 （分析纯），国
药集团化学试剂有限公司．苯酚和硫酸 （分析
纯），广州化学试剂厂．
１２　愈伤组织的诱导
成熟的美丽崖豆藤种子经质量分数０１％的升
汞消毒１５ｍｉｎ，无菌水冲洗４次，接种于种子萌发
培养基 （ＭＳ＋０２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ）上萌发培养４５ｄ．
待长出高４～５ｃｍ左右含两片真叶的小苗，分别切
分叶片、茎尖和下胚轴转入 ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、
ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＴＤＺ和ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ等３种不
同培养基进行愈伤组织诱导培养，所有培养基均加
入３０ｇ／Ｌ蔗糖．试验条件保持在 ｐＨ５６～６０，
１２ｈ光照／ｄ，光照强度２５００～３０００ｌｘ．３０ｄ后统
计愈伤诱导率 （产生愈伤的外植体数／接种外植体
总数），观察记录愈伤组织的生长状态．
１３　愈伤组织液体培养
将下胚轴在 ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ固体培养基
上诱导出的传代３次的白色、松散愈伤组织转移到
液体培养基ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０７５ｇ／Ｌ酵母提
取物 （Ｙｅａｓｔｅｘｔｒｃａｔ，ＹＥ） ＋０７５ｇ／Ｌ水解酪蛋白
（Ｃａｓｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ，ａｃｉｄ，ＣＨ）中培养，初始接
种量约１０ｇ／３０ｍＬ，细胞培养初期每隔３至５ｄ
继代１次，继代时采用倾倒法，即培养物静止１０
ｍｉｎ，倒去上清液，加入新鲜培养基，摇匀，倒入
新的培养瓶中．第４代之后每隔２周转移１次．第
４次继代时一部分悬浮物用于悬浮体系的建立，即
将悬浮物过２０目筛，静置，去上清液，再加入新
鲜培养液培养，每２周继代１次．另一部分不经过
滤，继代时倒去部分上清液，加入新鲜培养液，摇
匀后分装到４～５个三角瓶中，再加入新鲜培养液
至２５ｍＬ左右．观察过筛法继代和倾倒法继代后培
养物的生长状况．
１４　多糖的检测
１４１　标准曲线的制备　标准曲线参考文献
［１４］方法制作．所得标准曲线：ｙ＝０００８７ｘ－
０００２１（式中ｙ表示吸光度值，ｘ表示多糖质量浓
度 （μｇ／ｍＬ）），Ｒ２ ＝０９９９９，吸光度范围位于
０１～０８．
１４２　美丽崖豆藤愈伤培养物供试溶液的制备与
多糖质量分数测定　将上述愈伤组织培养物经抽滤
至无水滴下，并用去离子水冲洗４次，收集最后一
次滤液，作为评估培养基中多糖 （蔗糖）对愈伤
组织培养物影响的对照．愈伤培养物于５０℃烘箱
中３ｄ，至质量恒定．将烘干的样品用研钵研成粉
末，精确称取样品０３００ｇ，加１００ｍＬ水，索氏提
取器１０５℃提取 ２ｈ，冷却后过滤，定容至 ２５０
ｍＬ，８０℃烘箱浓缩至２５ｍＬ，精密量取浓缩液２
ｍＬ于１５ｍＬ离心管中，加入８ｍＬ无水乙醇，冷藏
２ｈ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，再用体积分数８０％
的乙醇洗涤 ２次，离心，弃去上清液，沉淀加 ５
ｍＬ去离子水水浴加热溶解，冷却后取 ０６ｍＬ于
１０ｍＬ具塞试管中，加水至１ｍＬ，再加入１ｍＬ质
量分数５％的苯酚，摇匀，加入５ｍＬ硫酸，沸水
浴中加热２０ｍｉｎ，冷却后测定吸光度，代入标准曲
线中计算多糖质量分数 （多糖质量／样品质量），
不同培养物状态取３个样品 （生物学重复）进行
检测，每个样品重复测定３次．
１４３　牛大力对照品的制备与多糖质量分数测定
　牛大力切片于５０℃烘箱中烘干３ｄ，用高速粉碎
机粉碎，过３号筛．然后按１４２方法制备溶液，
并测定多糖，重复３次．
１５　数据处理
试验数据采用 ＳＰＳＳ１７０软件进行统计处理，
结果用 “均值 ±标准差”表示，并采用 Ｄｕｎｃａｎｓ
新复极差法进行差异显著性分析．
２　结果
２１　愈伤组织的诱导
在３种培养基上，各种外植体均形成愈伤组
织，没有器官发生，下胚轴在诱导培养基 ＭＳ＋１
ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ上获得的愈伤组织量最多，生长速度
快，呈乳白色，易碎状态 （表１）．
２ 　　 仲恺农业工程学院学报 第２９卷　
表１　不同外植体在诱导培养基上培养３０ｄ（愈伤的诱导为３０ｄ）后愈伤组织的诱导状况
Ｔａｂｌｅ１　Ａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｐｌａｎｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｏｎｖａｒｉｏｕｓｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｆｏｒ３０ｄ
外植体
Ｔｙｐｅｓｏｆｅｘｐｌａｎｔｓ
接种数
Ｎｕｍｂｅｒｓｏｆｅｘｐｌａｎｔｓ
培养基
Ｍｅｄｉａ
愈伤组织诱导率
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｃａｌｕｓ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ／％
愈伤组织状态
Ｔｙｐｅｓｏｆｃａｌｕｓ
ｉｎｄｕｃｅｄ
叶片 Ｌｅａｖｅｓ ３０ ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ ９０ 白色、致密 Ｗｈｉｔｅ，ｃｏｍｐａｃｔ＋１）
３０ ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＴＤＺ １００ 白色、致密 Ｗｈｉｔｅ，ｃｏｍｐａｃｔ＋
３０ ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ １００ 白色、松软 Ｗｈｉｔｅ，ｓｏｆｔ＋＋
茎尖 Ｓｈｏｏｔｔｉｐｓ ３０ ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ １００ 乳黄色、松软 Ｃｒｅａｍｙｙｅｌｏｗ，ｓｏｆｔ＋
３０ ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＴＤＺ １００ 黄绿色、致密 Ｙｅｌｏｗｉｓｈｇｒｅｅｎ，ｃｏｍｐａｃｔ＋
３０ ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ １００ 乳白色、松软 Ｃｒｅａｍｙ，ｓｏｆｔ＋
下胚轴 Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ ４０ ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ １００ 白色、致密 Ｗｈｉｔｅ，ｃｏｍｐａｃｔ＋＋＋
４０ ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＴＤＺ １００ 乳黄色、致密 Ｃｒｅａｍｙｙｅｌｏｗ，ｃｏｍｐａｃｔ＋＋＋
４０ ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ １００ 乳白色、易碎 Ｃｒｅａｍｙ，ｆｒａｇｉｌｅ＋＋＋＋＋
　１）＋表示愈伤组织量，数目越多表明愈伤组织量越多．Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆ“＋”ｓｔａｎｄｉｎｇｆｏｒｔｈｅｍａｓｓｏｆｐｒｏｄｕｃｅｄｃａｌｕｓ．
２２　愈伤组织液体培养
将下胚轴在诱导培养基 ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ
上继代培养３次的愈伤接种到液体培养基 ＭＳ＋１
ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０７５ｇ／Ｌ酵母提取物＋０７５ｇ／Ｌ水
解酪蛋白上培养，细胞增长迅速，并迅速分散，４
ｄ左右培养物出现褐化状况，属于正常现象，初期
每３～５ｄ转接一次，可减轻细胞褐化，到第４次
即可得到大量的悬浮物．
过筛后的细胞生长很缓慢，到培养 １５ｄ时，
细胞稍有增殖．再继代２次后，培养物中开始出现
较大的球形颗粒，延长培养时间，生物量基本不增
加．由于细胞增殖缓慢，以及大的球形物质产生，
致使无法建立起均一稳定的悬浮系．
而不经过滤的继代方式，悬浮物中含有少量细
胞团块，其增殖速度很快，４～７ｄ就呈稠密状态
（图１），以相同的方式继续继代培养，可在较短时
间内获得大量培养物．但培养到第１０代左右，培
养物中也开始出现大的细胞块 （＞２ｍｍ），呈光
滑、硬质球状、半球状形态 （图２），到后期数量
标尺Ｓｃａｌｅｂａｒ＝２ｃｍ
图１　倾倒法继代７ｄ后的悬浮细胞
Ｆｉｇ１　Ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓｉｎ７ｄａｆｔｅｒｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈ
ｄｉｒｅｃｔｓｐｉｌｍｅｔｈｏｄ
增多，个体变大，切开后内部呈一小空腔 （图３）．
继续培养物质量增长变缓，预示快速增殖状态不能
继续保持．
标尺Ｓｃａｌｅｂａｒ＝２ｃｍ
图２　悬浮培养中出现的大的细胞团块
Ｆｉｇ２　Ｌａｒｇｅｃｅｌａｇｇｒｅｇａｔｅｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｐｒｏｃｅｓｓ
标尺Ｓｃａｌｅｂａｒ＝０５ｃｍ
图３　体视镜下细胞团块内部呈空腔状
Ｆｉｇ３　Ｃａｖｉｔｉｅｓｉｎｔｈｅｃｅｌａｇｇｒｅｇａｔｅｓｕｎｄｅｒａｓｔｅｒｅｏｓｃｏｐｅ
２３　美丽崖豆藤愈伤培养物中的多糖
不同阶段培养物 （图１、图２中的培养物悬浮
液及大细胞团块）中的多糖质量分数分别为
３　第４期 　　　　　程庆伟，等：美丽崖豆藤细胞培养及其多糖质量分数分析 　　　
２０１％和２０７％之间无显著差异，而牛大力切片
多糖质量分数为１０４％与２种愈伤培养物有极显
著差异 （图４），表明美丽崖豆藤愈伤培养物具有
远高于根部的多糖质量分数，且其质量分数具有稳
定性．
图柱上字母不同者表示极显著差异．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｌｅｔｅｒｓａｂｏｖｅｔｈｅｃｏｌ
ｕｍｎｓｍｅａｎｉｎｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜００１）
图４　不同状态培养物及牛大力切片多糖质量分数
Ｆｉｇ４　Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｋｉｎｄｓｏｆ
ｃｕｌｔｕｒｅｓａｎｄｒｏｏｔｓｌｉｃｅｓｏｆＭ．ｓｐｅｃｉｏｓａ
３　讨论
美丽崖豆藤无菌苗叶、茎尖和下胚轴在３种诱
导培养基上均形成愈伤组织，在仅加有６－ＢＡ的
培养基上也未见器官分化．有关美丽崖豆藤组织培
养的报道［９－１３］中，再生植株的获得几乎全为丛生
芽发生型，愈伤组织分化困难，体胚发生途径则尚
无报．美丽崖豆藤组织培养中器官的间接发生型及
体胚发生有待进一步研究．
郑元升［１５］从干燥美丽崖豆藤根切片测得多糖质
量分数为０９７％；而蔡红兵等［１６］采用苯酚－硫酸法
检测得美丽崖豆藤根中的多糖质量分数最高值为
０７３６％．与郑元升［１５］的结果较接近，表明可以采
用苯酚－硫酸法检测美丽崖豆藤中的多糖质量分数，
本试验用苯酚－硫酸法测得美丽崖豆藤愈伤组织液
体培养物中的多糖质量分数高达２％，远超其根部，
故可采用细胞培养的方法生产美丽崖豆藤多糖．
梁军等［１７］在研究印楝细胞悬浮悬浮培养时发
现，直接倾倒法比移液管接种法明显要好，最终生
物量也多．用倾倒法接种，一些较大的细胞团能够
进入新的培养体系；而用移液枪接种，稍大的细胞
团不能被吸入而转移进继代培养体系．本试验中也
发现，经细胞筛过滤后的细胞增殖速度很慢，而倾
倒法继代的培养物增殖速度很快．
本试验中通过细胞筛过滤得到的细胞增殖很
慢，导致无法建立起稳定的悬浮系，所以未进行细
胞生长动力学的研究．通过倾倒法继代细胞增殖速
度非常快，远超过一般的悬浮培养，缺点是无法准
确量化培养物的继代体积及增殖速率．本试验中对
该细胞培养物进行了周期性的继代培养观察，直至
培养物不再有明显的增殖为止．结果表明，当培养
物中开始出现较多光滑的球形、半球形细胞团聚体
时，预示细胞增殖的增殖速度降低，该现象可用来
指示培养物的培养和收获；同时不同继代次数和状
态的培养物多糖含量基本相同，没有严格的时间节
点限制．所以，在生产上，当未出现上述细胞团聚
体时，可将悬浮物继续扩大培养，而当出现上述团
聚体时，则要及时采收培养物．
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【责任编辑　简友光】
４ 　　 仲恺农业工程学院学报 第２９卷