全 文 ：狼毒，大戟科植物月腺大戟 Euphorbia ebracte-
olata Hayata. 或狼毒大戟 Euphorbia fischeriana
Steud.的干燥根，始载于《神农本草经》，有毒，具有
逐水祛痰、散结杀虫的功效 [1]。 狼毒生品药性峻烈，
毒副性作用大，经醋炙后毒性降低，方可供临床上
内服[2]。 《中国药典》2010 年版“狼毒”项下载有饮片
生狼毒和醋狼毒；“生品”项下仅有性状、显微和薄
层鉴别、杂质、水分、总灰分、浸出物和酸不溶性灰
分等质控项目；“醋品”项下则无质控项目[3]。 文献多
采用测定月腺大戟中主要药效成分狼毒乙素和岩
大戟内酯 B等含量的方法来评价其质量的优劣[4-5]。
中药指纹图谱是采用一定的分析手段，得到能
够标示其化学特征的色谱图 [6-7]，其作为质量控制模
式可以综合反映药材中各主要成分及其相对含量，
能提供更加丰富的质量评价信息。 为了更全面控制
醋狼毒（月腺大戟）饮片质量，本研究采用 HPLC 法
建立了醋狼毒（月腺大戟）指纹图谱。 该方法可靠，
重复性好，操作简便。
1 仪器及试药
1.1 仪器
Agilent1100 四元泵全自动进样高效液相色谱
仪（Agilent 公司），含 DAD 检测器；AG285 电子天平
（瑞士 Mettler 公司）；KQ-3200E 型超声清洗器 （昆
山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药
狼毒乙素、 狼毒丙素对照品为本实验室自制，
经波谱学方法鉴定结构，并由色谱法确定其纯度分
别为99.0%和 98.7%。
狼毒药材来源见表 1， 经南京中医药大学中药
鉴定教研室刘训红教授鉴定为大戟科大戟属植物
月腺大戟的干燥根；样品 1~7 号的醋炙饮片为本实
验室按已考察过的炮制方法自制 （辅料醋用量为
40%， 闷润 1 h 至醋被吸收干净，160℃下炒制 10
min）； 样品 8~10 号为南京海昌中药饮片公司按本
实验室提供方法炮制的中试放大产品。
甲醇为分析纯；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯
净水； 醋为江苏镇江恒顺香醋 （总酸量≥4.5 g/100
mL）。
表 1 样品来源
样品号 批号 生产厂商 产地 收集时间
1 110307 亳州市华荣堂 安徽 2011 年 12 月
2 111208 亳州市中正 新疆 2011 年 12 月
3 111101 安徽福春堂 湖北 2011 年 12 月
4 110507 亳州市真源堂 河南 2011 年 12 月
5 110414 亳州市三义堂 山东 2011 年 12 月
6 110823 亳州市永刚 河南 2011 年 12 月
7 110613 亳州市四芝堂 山东 2011 年 12 月
8 120210 江苏海昌 安徽 2012 年 2 月
9 120210 江苏海昌 陕西 2012 年 2 月
10 120210 江苏海昌 浙江 2012 年 2 月
摘 要 采用 HPLC 法，色谱条件：Welchorm-C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），在检测波长
226 nm，柱温 25℃下，以乙腈（A%）-水（B%）为流动相，流速 1 mL·min-1梯度洗脱，初步建立了醋
狼毒（月腺大戟）HPLC指纹图谱，确定醋狼毒（月腺大戟）中有 24个共有峰。该方法准确、可靠、稳
定，可以用于醋狼毒（月腺大戟）饮片的质量控制。
关键词 月腺大戟；指纹图谱；醋炙
中图分类号 R927.1 文献标志码 A 文章编号 1673-7806（2014）01-053-03
醋狼毒（月腺大戟）HPLC指纹图谱 *
狄恒建 1，庄 果 2，李俊松 2**
1江苏省食品药品检验所，南京 210008；
2南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，南京 210029
基金项目 国家公益性行业专项基金项目（200807039）；
南 京 中 医 药 大 学 中 药 学 一 级 学 科 开 放 课 题
（2011ZYX2-011）
作者简介 狄恒建，男，副主任药师，主要从事中药检验及质量标准
研究 Tel: 025-86632807 E-mail: dihj1955@163.com
通讯作者 李俊松 Tel: 025-86798281
E-mail: lijunsong1964@163.com
收稿日期 2013-08-14 修回日期 2013-08-22
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Feb;22(1) 酒石酸伐伦克林的合成
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2 色谱条件
Welchorm-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。
流动相：乙腈（A%）-水（B%），梯度洗脱（0~10 min，
10% ~15%A；10 ~11 min，15% ~33% A；11 ~20 min，
33% ~40%A；20 ~30 min，40% ~66% A；30 ~40 min，
66% ~68%A；40 ~42 min，68% ~70% A；42 ~45 min，
70%~80%；45~50 min，80%~90%A；50~60 min，90%
~90%A），平衡时间 5 min。 检测波长：226 nm；灵敏
度：1.0 AUFS；柱温：25℃；流速：l mL·min-1；进样量：
20 μL。
在上述色谱条件下，理论塔板数按狼毒乙素峰
计算不小于 3000。
3 溶液的制备
3.1 供试品溶液
取醋狼毒（月腺大戟）粉末（过 6 号筛）约 1 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇 25 mL，密塞，称
定重量， 超声处理 （功率 250 w， 频率 40 kHz）30
min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇
匀，滤过，精取续滤液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取
续滤液即得。
3.2 对照品溶液的制备
取狼毒乙素适量，精密称定，加甲醇制成每毫
升含 30 μg溶液，即得。
4 方法与结果
4.1 指纹图谱方法学考察
参考 《中药注射剂指纹图谱的技术研究 （暂
行）》， 考虑到各样品中均有狼毒乙素峰且含量较
高，其保留时间及峰形稳定，分离度良好，故以此峰
作为参照峰， 计算醋月腺大戟 HPLC指纹图谱中其
他色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD，考
察方法学。
4.1.1 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 20
μL，连续进样 6次，检测指纹图谱。
结果，各共有峰相对保留时间的 RSD 在 0.02％
～0.71％，相对峰面积 RSD 均小于 3％，6 次进样共有
图谱的相似度均大于为 0.96，精密度良好，符合指
纹图谱要求。
4.1.2 重复性试验 取同一批醋狼毒粉末 5 份，按
“3.1” 项下方法制备供试品溶液， 分别检测指纹图
谱。 结果，以狼毒乙素峰的保留时间和峰面积为参
照，各共有峰相对保留时间、相对峰面积的 RSD 均
小于 4％，5 次进样共有图谱的相似度均大于 0.99，
重复性良好，符合指纹图谱要求。
4.1.3 稳定性试验 取同一供试品溶液适量，分别
于 0、2、4、8、12、24 h检测指纹图谱。结果，各共有峰
相对峰面积及相对保留时间的 RSD＜3％，共有图谱
的相似度＞0.9，供试液在 24 h 内稳定，符合指纹图
谱要求。
4.2 醋狼毒（月腺大戟）指纹图谱共有模式的建立
及相似度比较
4.2.1 醋狼毒（月腺大戟）指纹图谱及特征峰的标
定 对 10 批不同醋狼毒（月腺大戟）样品按“3.1”项
下方法制备供试品溶液， 分别进行测定， 记录 60
min内的色谱图。
采用 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
（2004年 A版）》，对 10批醋月腺大戟的指纹图谱进
行考察，以保留时间约为 26.55 min 的 12 号色谱峰
（狼毒乙素）作为参照峰，确定了 23 个共有特征指
纹峰（见图 1），10批供试品的叠加图见图 2。
4.2.2 醋狼毒相似度比较 参考《中药注射剂指纹
图谱研究的技术要求（暂行）》，对 10 批醋狼毒指纹
图谱进行相关技术参数的计算，结果显示其共有峰
的相对保留时间的 RSD 均小于 0.9%， 相对峰面积
的 RSD 均小于 1.8%；通过《中药色谱指纹图谱相似
度评价系统》对醋狼毒（月腺大戟）10 批饮片指纹图
谱进行相似度评价， 发现大多数样品相似度良好，
平均相似度为 0.962，结果见表 2。
5 讨 论
5.1 采用不同溶剂（甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙
醇、水）、不同提取方法（回流提取和超声提取）及提
图 1 醋狼毒（月腺大戟）HPLC 指纹图谱
图 2 醋狼毒（月腺大戟）10 批供试品的共有模式图
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Feb;22(1) 醋狼毒（月腺大戟）HPLC 指纹图谱
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药 学
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取时间（20 min、30 min、60 min）对醋狼毒（月腺大
戟）供试液提取方法进行考察，并根据指纹图谱对
不同提取方法提取液进行分析，结果表明，用甲醇
作为溶剂超声提取 30 min 就能够将醋月腺大戟
中化学成分较完全提取出来， 且此方法提取 10 批
生品样品的相似度较好。
5.2 醋狼毒（月腺大戟）HPLC 指纹图谱可靠，建立
的方法学良好，反映了醋狼毒的整体特征，可用于
醋狼毒（月腺大戟）质量控制和质量标准的建立。
参考文献
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术出版社，1994：131；1982：110.
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应用[J]． 中国中药杂志，2001，26（10）：653．
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术要求（暂行）[J]. 中成药，2000，22（10）：671.
表 2 10 批醋狼毒 （月腺大戟） 相似度计算结果
编号 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 对照指纹图谱
C1 1 0.940 0.951 0.944 0.951 0.934 0.940 0.884 0.960 0.969 0.975
C2 0.940 1 0.934 0.907 0.938 0.977 0.991 0.951 0.894 0.885 0.972
C3 0.951 0.934 1 0.968 0.974 0.928 0.938 0.912 0.917 0.910 0.965
C4 0.944 0.907 0.968 1 0.962 0.912 0.919 0.919 0.935 0.925 0.960
C5 0.951 0.938 0.974 0.962 1 0.938 0.940 0.912 0.924 0.919 0.971
C6 0.934 0.977 0.928 0.912 0.938 1 0.977 0.944 0.886 0.876 0.971
C7 0.940 0.991 0.938 0.919 0.940 0.977 1 0.956 0.902 0.891 0.975
C8 0.884 0.951 0.912 0.919 0.912 0.944 0.956 1 0.863 0.833 0.947
C9 0.960 0.894 0.917 0.935 0.924 0.886 0.902 0.863 1 0.983 0.944
C10 0.969 0.885 0.910 0.925 0.919 0.876 0.891 0.833 0.983 1 0.937
对照指纹图谱 0.975 0.972 0.965 0.960 0.971 0.971 0.975 0.947 0.944 0.937 1
HPLC Fingerprints of Vinegar-processed Euphorbiae ebracteolatae Radix*
DI Heng-jian, ZHUANG Guo, LI Jun-song**
1Jiangsu Institute For Food and Drug Control, 210008， Nanjing; 2Nanjing University of Traditional Chinese
Medicine, Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing, 210046, Nanjing
ABSTRACT Chromatographic fingerprints for the quality control of vinegar-processed Euphorbiae ebracte-
olatae Radix were established on a Welchorm-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column with mobile phase of
acetonitrile and water by gradient elution at the flow rate of 1 mL·min-1. The column temperature was at
25℃ and detection wavelength was set at 226 nm. There were 24 common peaks selected in the chro-
matograms, and all the common peeks were separated effectively. The precision, repeatability, and stability
of this method were satisfying and can be used to identify and evaluate the quality of vinegar-processed
Euphorbiae ebracteolatae Radix.
KEY WORDS Euphorbiae ebracteolatae Radix; Fingerprints; Vinegar-processed
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Feb;22(1) 醋狼毒（月腺大戟）HPLC 指纹图谱
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