全 文 ：收稿日期:2014-12-25; 修订日期:2015-06-15
基金项目:国家公益性行业专项基金项目(No． 200807039);
南京中医药大学中药学一级学科开放课题(No． 2011ZYX2 －
011)
作者简介:王金华(1964-)，男(汉族)，江苏南京人，南京市高淳区中医院
副主任中药师，学士学位，主要从事中药调剂与制剂工作．
* 通讯作者简介:李俊松(1964-)，男(汉族)，江苏南京人，南京中医药大
学研究员，博士学位，主要从事中药炮制和制剂研究工作．
* 通讯作者简介:蔡宝昌(1952-)，男(汉族)，江苏南京人，南京中医药大
学教授，博士学位，主要从事中药炮制研究工作．
狼毒 (月腺大戟)药材高效液相色谱指纹图谱研究
王金华1，庄 果2，李俊松2* ，蔡宝昌2*
(1．南京市高淳区中医院 211300; 2．南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，江苏 南京 210029)
摘要:目的 建立狼毒(月腺大戟)药材的高效液相指纹图谱。方法 取月腺大戟生品粉末，用甲醇超声提取制备供试品
溶液。采用Welchorm － C18柱 (5 μm，4． 6 mm × 250 mm)，在检测波长 226 nm，柱温 25℃下，以乙腈(A%)－水(B%)为流
动相，流速 1ml·min －1梯度洗脱，建立不同批次饮片的指纹图谱。结果 初步建立了月腺大戟药材生品指纹图谱。以月
腺大戟乙素峰作为对照峰，各批狼毒(月腺大戟)药材中有 20 个共有峰，各峰分离度良好。结论 该方法具有良好的精密
度、重复性、稳定性，各共有峰间分离度高，可用于狼毒(月腺大戟)药材的真伪鉴别和质量综合评价。
关键词:月腺大戟; 指纹图谱; 高效液相色谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 09． 045
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)09-2173-02
狼毒，为大戟科植物狼毒大戟和月腺大戟的根，始载于《神
农本草经》，有毒，具有逐水祛痰，散结杀虫的功效［1］。月腺大戟
Euphorbia ebracteolata Hayata．作为狼毒的主要来源之一，主要含
有萜类、间苯三酚、黄酮、甾醇等成分［2，3］。现代药理研究表明其
有抗结核杆菌和抗肿瘤活性［2］，可用于治疗结核、癌症、银屑
病［4］等。狼毒生品药性峻烈，毒副作用大，表现出对皮肤及胃肠
道的刺激，如恶心呕吐、腹痛腹泻等［5］。《中国药典》2010 年版狼
毒仅有薄层鉴别项，并无含量测定项及相关质量标准［6］。文献
多采用测定月腺大戟中主要药效成分狼毒乙素和岩大戟内酯 B
等含量的方法来评价其质量的优劣［7，8］。中药指纹图谱是采用
一定的分析手段，得到能够标示其化学特征的色谱图［9，10］，其作
为质量控制模式可以综合反映药材中各主要成分及其相对含量，
能提供更加丰富的质量评价信息。为了更全面控制狼毒(月腺
大戟)药材质量，本研究收集了 10 批狼毒(月腺大戟)药材，采用
HPLC法建立了狼毒(月腺大戟)药材的指纹图谱。该方法准确，
重复性好，操作简便，为全面控制月腺大戟药材的质量进一步研
究，提供了依据。
1 仪器及试药
1． 1 仪器 Agilent1100 四元泵全自动进样高效液相色谱仪(Agi-
lent 公司)，DAD 检测器，AG285 电子天平(瑞士 METTLEＲ 公
司)，KQ －3200E型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 狼毒乙素、狼毒丙素对照品为本实验室自制，经波谱
学方法鉴定结构，并由色谱法确定其纯度为 99． 0%和 98． 7%;狼
毒药材来源见表 1，经本校中药鉴定教研室刘训红教授鉴定为大
戟科大戟属植物月腺大戟的干燥块根;甲醇为分析纯;乙腈为色
谱纯;水为娃哈哈纯净水。
表 1 样品来源
样品号 批号 生产厂商 产地 收集时间
1 110307 亳州市华荣堂 安徽 2011-12
2 111208 亳州市中正 新疆 2011-12
3 111101 安徽福春堂 湖北 2011-12
4 110507 亳州市真源堂 河南 2011-12
5 110414 亳州市三义堂 山东 2011-12
6 110823 亳州市永刚 河南 2011-12
7 110613 亳州市四芝堂 山东 2011-12
8 120210 江苏海昌 安徽 2012-02
9 120210 江苏海昌 陕西 2012-02
10 120210 江苏海昌 浙江 2012-02
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 采用 Welchorm － C18 色谱柱 (5 μm，4． 6 mm ×
250 mm);检测波长:226 nm 灵敏度:1． 0 AUFS 柱温:25℃;流动
相:乙腈(A%)－水(B%)，梯度洗脱(0 ～ 10min，10% ～ 15% A;
10 ～ 11min，15% ～ 33% A;11 ～ 20min，33% ～ 40% A;20 ～ 30min，
40% ～66%A;30 ～ 40min，66% ～ 68% A;40 ～ 42min，68% ～ 70%
A;42 ～ 45min，70% ～80%;45 ～ 50min，80% ～ 90% A;50 ～ 60min，
90% ～90%A)梯度洗脱，平衡时间 5 min流速:l ml /min;进样量:
20 μl。在上述色谱条件下，理论塔板数按狼毒乙素峰计算不小
于 3000。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 供试品溶液［10］ 分别取狼毒(月腺大戟)药材约 1 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 25 mL，密塞，称定重量，超声
处理(功率 250 w，频率 40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇
补足减少的重量，摇匀，滤过，精取续滤液用微孔滤膜 (0． 45
μm)滤过，取续滤液即得。
2． 2． 2 对照品溶液的制备 分别精密称取狼毒乙素、狼毒丙素
3． 00、3． 90 mg，加甲醇溶解并定容至 50 mL量瓶中，摇匀，即得狼
毒乙素、狼毒丙素标准储备液。精密量取狼毒乙素、狼毒丙素储
备液各 5 mL至 10 mL量瓶中，用甲醇定容，即得狼毒乙素丙素对
照品混合溶液。
3 结果
3． 1 指纹图谱方法学考察 参考《中药注射剂指纹图谱研究的
技术研究(暂行)》，考虑到样品中有狼毒乙素峰且含量较高，其
保留时间及峰形稳定，分离度良好，故以此峰作为参照峰，计算月
腺大戟 HPLC指纹图谱中其他色谱峰的相对保留时间和相对峰
面积的 ＲSD，考察方法学。
3． 1． 1 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 20μL，连续进样 6
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 9 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 9 期
次，检测指纹图谱。结果，各共有峰相对保留时间的 ＲSD 在
0． 02% ～ 0． 71%之间，相对峰面积 ＲSD在 1． 58% ～ 2． 13%之间，
均小于 3%，6 次进样共有图谱的相似度分别为 0． 966，0． 992，
0． 989，0． 994，0． 994 和 0． 986，精密度良好，符合指纹图谱要
求［10］。
3． 1． 2 重复性试验 取同一批药材粉末 5 份，按“2． 1． 1”项下方
法制备供试品溶液，分别检测指纹图谱。结果，以狼毒乙素峰的
保留时间和峰面积为参照，各共有峰相对保留时间、相对峰面积
的 ＲSD在 1． 49% ～ 3． 15%之间，均小于 4%，5 次进样共有图谱
的相似度分别为 0． 997，0． 997，0． 999，0． 997，0． 999，重复性良好，
符合指纹图谱要求［11］。
3． 1． 3 稳定性试验 取同一供试品溶液适量，分别于 0，2，4，8，
12，24 h检测指纹图谱。结果，各共有峰相对峰面积及相对保留
时间的 ＲSD ＜ 3%，共有图谱的相似度 ＞ 0． 9，供试液在 24 h内稳
定，符合指纹图谱要求［11］。
3． 2 狼毒(月腺大戟)指纹图谱共有模式的建立及相似度比较
3． 2． 1 狼毒(月腺大戟)指纹图谱及特征峰的标定 对 10 批不
同狼毒(月腺大戟)按“2． 1． 1”项下方法制备供试品溶液，分别进
行测定，记录 60 min内的色谱图。采用“中药色谱指纹图谱相似
度评价系统 2004 年 A版”，对 10 批狼毒(月腺大戟)药材的指纹
图谱进行考察，以保留时间约为 26． 551 min 的 12 号色谱峰(狼
毒乙素)作为参照峰，确定了 20 个共有特征指纹峰(见图 1)，10
批供试品的叠加图详见图 2。
3． 2． 2 相似度比较 参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要
求 (暂行)》，对 10 批药材指纹图谱进行相关技术参数的计算，结
果显示其共有峰的相对保留时间的 ＲSD均小于 0． 5%，相对峰面
积的 ＲSD均小于 2． 3%;通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系
统》对狼毒(月腺大戟)10 批药材指纹图谱进行相似度评价，发现
大多数样品相似度良好，平均相似度为 0． 936。结果见表 2。
图 1 狼毒(月腺大戟)HPLC指纹图谱
图 2 狼毒(月腺大戟)10 批供试品的共有模式图
表 2 10 批狼毒(月腺大戟)药材的相似度计算结果
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指纹图谱
S1 1 0． 879 0． 727 0． 843 0． 812 0． 828 0． 883 0． 835 0． 879 0． 835 0． 867
S2 0． 879 1 0． 851 0． 912 0． 909 0． 932 0． 906 0． 845 1 0． 845 0． 951
S3 0． 727 0． 851 1 0． 886 0． 936 0． 904 0． 855 0． 828 0． 851 0． 828 0． 907
S4 0． 843 0． 912 0． 886 1 0． 92 0． 921 0． 920 0． 887 0． 912 0． 887 0． 956
S5 0． 812 0． 909 0． 936 0． 920 1 0． 943 0． 927 0． 857 0． 909 0． 857 0． 949
S6 0． 828 0． 932 0． 904 0． 921 0． 943 1 0． 932 0． 882 0． 932 0． 882 0． 970
S7 0． 883 0． 906 0． 855 0． 920 0． 927 0． 932 1 0． 947 0． 906 0． 947 0． 964
S8 0． 835 0． 845 0． 828 0． 887 0． 857 0． 882 0． 947 1 0． 845 1 0． 922
S9 0． 879 1 0． 851 0． 912 0． 909 0． 932 0． 906 0． 845 1 0． 845 0． 951
S10 0． 835 0． 845 0． 828 0． 887 0． 857 0． 882 0． 947 1 0． 845 1 0． 922
对照指纹图谱 0． 867 0． 951 0． 907 0． 956 0． 949 0． 97 0． 964 0． 922 0． 951 0． 922 1
4 讨论
采用不同溶剂(甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、水)、不同提
取方法(回流提取和超声提取)及提取时间(20 min、30 min、60
min)对狼毒(月腺大戟)药材供试液提取方法进行考察［12］，并根
据指纹图谱对不同提取方法提取液进行分析，结果表明，用甲醇
作为溶剂超声提取 30 min就能够将月腺大戟药材中化学成分较
完全提取出来且此方法提取 10 批药材样品的相似度较好。
本实验对狼毒(月腺大戟)药材提取液指纹图谱的色谱条件
进行了优化。狼毒乙素为月腺大戟的主要有效成分，故作为参比
峰。采用紫外检测器，在分析时在不同波长、不同流速、不同柱温
下获取数据，经比较后表明在 226 nm 波长、25 ℃柱温、1 ml /min
的流速下，色谱图峰形最好，出峰数目最多，各色谱峰相互之间分
离度较好，故采用此条件下建立该药材的指纹图谱。
对采自安徽、新疆、湖北、河南、山东、陕西、浙江的 10 批狼毒
(月腺大戟)药材进行了指纹图谱分析，不同产地、批次狼毒(月
腺大戟)中主要成分的量略有差异，但指纹图谱中主要色谱峰的
整体图貌基本一致，经相似度计算，10 批样品指纹图谱相似度均
在 0． 936 以上，不同产地、批次的狼毒(月腺大戟)药材指纹图谱
无显著性差异。
研究狼毒(月腺大戟)药材的 HPLC指纹图谱，我们发现建立
的该指纹图谱稳定，建立的方法学可行，为评价和控制月腺大戟
药材的内在质量提供科学依据。
参考文献:
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与临床药理，2011，，22(3) :315．
收稿日期:2014-12-23; 修订日期:2015-04-20
基金项目:国家科技部国际科技合作项目(No． 2014DFA30580);国家中医药管理局科研专项课题(No． JDZX2012022) ;广西八桂学者专项;广西自然科
学基金(No． 2014GXNSFBA118196);广西壮族自治区科技厅研究与技术开发计划(No． 1355005 － 1 － 4);教育部新世纪优秀人才支撑计划
(NCET － 13 － 0745) ;医院青年科研基金(No． GZYQJ12014023)
作者简介:文 彬(1985-)，男(壮族)，广西南宁人，广西中医药大学讲师、医师，硕士学位，主要从事中西医结合传染病研究工作．
* 通讯作者简介:邓 鑫(1976-)，男(瑶族)，广西南宁人，广西中医药大学副教授，副主任医师，博士学位，主要从事中西医结合艾滋病的研究工作．
针刺壮医脐环穴配合莲花针拔罐逐瘀法治疗
艾滋病合并带状疱疹后遗神经痛疗效观察
文 彬1，李秀娟2，邓 鑫1* ，姜 枫1，刘振威1，李 璇1
(1．广西中医药大学附属瑞康医院 艾滋病研究中心，广西 南宁 530001;
2．广西中医药大学第一附属医院 壮医门诊，广西 南宁 530023)
摘要:目的 探讨针刺壮医脐环穴配合莲花针拔罐逐瘀法治疗艾滋病合并带状疱疹后遗神经痛的疗效观察。方法 按照
临床随机数字表法，将 50 例艾滋病合并带状疱疹后遗神经痛患者随机分为对照组和观察组，每组各 25 例，对照组给予止
痛，营养神经等对症治疗;观察组单纯给予针刺壮医脐环穴配合莲花针拔罐逐瘀法治疗，针刺脐环穴 1 次 /d，莲花针拔罐
法隔天 1 次。两组患者疗程均为 15 天。观察两组患者综合疗效，治疗前后视觉疼痛模拟评分(vsual analoguescale，
VAS)、McGill疼痛评分变化及 1 年内后遗神经痛复发率。结果 观察组愈显率明显优于对照组(92% VS 66%，P
＜ 0． 01)，两组总有效率差异无统计学意义(96% VS 88%，P ＞ 0． 05) ;观察组治疗后 McGill 疼痛评分、VAS 评分，后遗神
经痛复发率均明显低于对照组(P ＜ 0． 05)。结论 针刺壮医脐环穴配合莲花针拔罐逐瘀法治疗艾滋病合并带状疱疹后遗
神经痛，可以有效止痛，提高临床疗效，预防后遗神经痛复发率。
关键词:艾滋病; 带状疱疹后遗神经痛; 壮医脐环穴; 莲花针; 拔罐逐瘀法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 09． 046
中图分类号:Ｒ245． 3;Ｒ245． 9;Ｒ244． 3 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2015)09-2175-03
Acupuncturing Umbilical Ｒing Acupoints in Zhuang Medicine and Lotus needle Cupping
Stasis on AIDS Patients with Postherpetic neuralgia:a Clinical Observation
WEN Bin1，LI Xiu-juan2，DENG Xin1* ，JIANG Feng1，LIU Zhen-wei1，LI Xuan1
(1． AIDS Ｒesearch Center，Ｒuikang Hospital，Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning，
530011，China;2． First Affiliated Hospital to Guangxi Chinese Medicine University，Nanning，530023，China)
Abstract:Objective To observe the efficacy of acupuncture Umbilical Ｒing Acupoints in Zhuang Medicine combined with Lotus
needle Cupping Stasis on AIDS Patients with Postherpetic neuralgia． Methods According to clinical random number table，50 ca-
ses of AIDS Patients with postherpetic neuralgia were randomly divided into control group and observation group，25 cases in each
group，the control group was given pain，nerve nutrition and other symptomatic treatment;the observation group simply received
acupuncture Umbilical Ｒing Acupoints in Zhuang Medicine combined with Lotus needle Cupping Stasis therapy，acupuncture um-
bilical ring acupoints 1 times /d，Lotus needle Cupping Stasis the next day ，two groups of patients treated for 15 days． The two
groups were observed before and after treatment in patients with the comprehensive curative effect，visual analogue scale (VAS)，
McGill pain score changes and neuralgia relapse rate within 1 year． Ｒesults The observation group markedly effective rate was
significantly better than the control group (92% VS 66%，P ＜ 0． 01) ，there was no statistical difference in the total effective rate
between the two groups (96% VS 88%，P ＞ 0． 05) ;the observation group after treatment McGill pain score，VAS score，neural-
gia relapse rate was significantly lower than the control group (P ＜ 0． 05)． Conclusion Acupuncturing Umbilical Ｒing Acupoints
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 9 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 9 期