全 文 ：1夕夕j 年第 4 期 植物检疫 P L A N T QU A A RN TIN V Eo N 9 lo 4
进 口花卉蛇鞭菊的组培快速繁殖
黄卫萍 郑文华
(皇岗动植物检疫局 深圳
林国丁
5 1 0 84 5 )
摘要 蛇鞭菊 Li ta ri s sP ica ta 是菊科 、 蛇鞭菊属的一种重要切花植 物 , 本试验成功地
用组培法快速繁殖蛇鞭菊 , 并对培养基物理性状进行研究 , 发现增殖培养中半固体培养与
固体培养的效果基本相同 , 而在生根培养 中固体培养优于半 固体培养 。
关键词 组培 快速繁殖 (半 )固体培养 增殖培养 生根培养 植物检疫
植物组织培养是本世纪初发展起来的
一项先进 的生物技术 , 历经近 一个世纪的
发展 , 其技术日益完善 , 应用范 围也越来
越广 。 在许多国家植物组织培养已被用来
为植物检疫服务 , 其 中一 个突出的表现即
采用试管苗形式在国际 间交流 〔 ’ 〕 。 本试
验从进 口蛇鞭菊普通种苗取材 , 成功地获
得其试管苗 ( 图 1 ) , 这将为蛇鞭菊的生产
和种质交换提供十分有用的材料 。
1 材料和方法
材 料 为 荷 兰 进 口 蛇 鞭 菊 iL at ir s
朋 i e a r a , 取旺盛生长植株的幼 茎 l一 Z c m ,
用 自来水冲洗干净 , 经 75 % 酒精漂洗 5 秒
钟 , 转人 3% 次氯 酸钠溶液消毒 5 分钟 ,
无菌水冲洗 3 次 , 切取茎尖接种在初代培
养基上 。
培养条件 : 1 . 初代及继代培养基 ( 称
培养基 A ) 为修改的 M s 培养基 〔 ” + K T
( 激 动 素 ) 0 . 3gm / +1 N A A ( 禁 乙 酸 )
0
.
3m g / l
,
p H S
.
8
。
2
. 生根培养基 (称培养
基 B ) 为 M S 培 养 基 + N A A Zm g / l ,
pH S
.
;8 培养 温度 24 一 28 ℃ , 光 照 强 度
1 5 0 0 l x
, 光照时间为 12 小时 / 天 。
培养基的消毒 : 培养基分装于培养瓶
后 加 盖 置 于 消 毒 锅 中 , 在 12 1℃
( l
.
l k g / e m Z) 下保持 2 0 分钟 。
增殖培养 ( 培养基 A ) 和 生根培养
一一2 14—
( 培养 基 B ) 都 采 用 固 体培养 ( g8 琼
脂 / l ) 和 半固体培养 ( 5 9 琼脂 / l ) , 即
A I 和 A : 及 B l 和 B Z , 其中 A l 、 B I 为固体
培养 , A Z、 B : 为半固体培养 , 以研究培养
基物理性状对增殖和生根培养的影响 。
所有试验重复 3 至 5 次 , 每个处理 10
瓶以上 。
2 结果和讨论
.2 1 生长与分化情况
茎尖接种于培养基 A 上 , 约 1周原侧
芽萌动 , 再过 5 天侧芽明显长大 , 以后侧
芽继续生长且侧芽数不断增多 , 此代历时
4 2 天 , 主要表现为原有侧 芽的萌发和生
长 , 也伴有侧芽分化 , 其分化倍数为 1一 2
倍 ; 于培养基 A 上继代后约 10 天 , 丛芽
增殖 0 . 5 倍 , 约 巧 天增殖 1 倍 , 1 个月增
殖 2一 3 倍 ; 分切丛芽接人培养基 B 上 ,
10一 15 天后生根率可达 10 0% 。
2
.
2 培养基物理性状对增殖培养的影响
试验发现 , 在增殖培养中 A : 的培养
效果与 A ; 的基本相同 。 从理论上 分析 ,
一方面 A : 因琼脂 少水分多而导致通气较
A I 差 , 另一方面 A I 因为琼脂多水分少而
使得培养物与培养基的接触面积小 , 各种
养分与激素在琼脂中扩散较慢 , 且各 自扩
散速度 不同 , 使养分补充慢 , 成 分比例上
有变化 , 同 时培养物排出的一些代谢废
1夕夕歹年第 4期 植物检疫 L APN T QU A A RN T N I EV o 9 N lo . 4
物 , 聚集在吸收表面上 , 浓度高 , 抑制组
织 的代谢活性 〔” 。 故 A , 和 A : 是各具利
弊 , 但培养效果基本相同 。 考虑到琼脂约
占培养基成本 80 % , 因而采用 A : 培养基
可 以达到 以低成本获取高效益的目的 。
.2 3 培养基物理性状对生根培养的影响
试验发现 , 丛芽在 B , 上培养 巧 天后
生根率可达 10 0% , 且根系正 常 : 根色
白 、 粗壮 、 较短 , 无愈伤组织 , 根茎部连
接紧密 ; 在 B : 上丛芽培养 巧 天后 , 生根
率也可达 10 % , 但长势 较差 : 根色 紫
红 、 生长较细 、 松 , 有愈伤组织 , 根茎部
连接不紧密 , 后 期程度 加深 。 由此看来 ,
生根培养中 , 不能降低琼脂用量 , 而必须
采用固体培养基。
.2 4 本试验为生产蛇鞭菊试管苗提供了一
种经济简便的方法 , 但要将之用于大规模
的生产尚需进 一步做其他试验 。
参考文献
1 许宏冠 . 植物检疫 . 19 8 8 , 2 ( 3) : 2 20 一 2 2 .
2 谭文澄 , 戴策刚 . 观赏植物组织培养技术 . 北京 : 中
国林业出版社 , 19 9 1 , 59一 6 0
3 M u r a s h唱 e T a n d F S k o o g
.
P h y s io 1 P al n t
.
19 6 2
,
15
4 73一 4 7 9
从荷兰进 口的苹果苗木检测出褪绿叶斑
病毒和茎沟病毒
陶玲珠 秦双菊 梁静波
(首都机场动植物检疫局 北京 1 0 0 6 2 1)
王小凤 王文慧 黄 谊
(中国科学院微生物研究所 北京 10 0 0 8 0)
苹果褪绿 叶斑 病 毒 A p p le c h lo r o t ie
l e a f s p o t v i r u s
,
(A C L s V )和苹果茎沟 病毒
A p p le s t e m g r o o v i n g v i r u s
,
(A S G v )属于苹
果潜隐 病毒 , 它们在苹果种植地 区分布
广 , 感染率高 , 对生产造成严重危害的事
例 已有许多报道 〔 ’ 、 2 , 。 通过热处理去除
病毒获得健康苗木的工作在我国已蓬勃开
展 , 一些省市大量销售苹果无毒苗木 , 国
外的苹果苗木也大量流人我国 。 例如 19 9 2
年从荷兰进 口的无病毒苹果矮化砧及接穗
6 批 , 计 10 . 4 2 万株 , 19 9 3 年进 口 5 批 ,
计 28 . 6 万株 , 其数量之大超过历史记载 。
为认真贯彻执行 《动植物进出境检疫法 》 ,
我们在进 口 现场病 虫全面检疫的基础 上 ,
对进 口的无病毒种子或苗木进一步检测 。
1 9 9 3 年 4 月 , 我们在从荷兰进 口 的苹
果矮化砧苗木中随机取样 10 份 (分别属于
EM 7
,
M 2 6
,
M M 1 0 6 三个品系 ) , 将其栽
植于 温 室 中 , 萌发 出的嫩叶作 为检测材
料 , 用 间 接 E L IS A 法 检测 A C L S V 和
A s G v 〔 3
,
4〕 。 采集嫩叶按 l : 4 ( w / v )
加人缓冲液 ( P B S T , 含 2 % 聚乙烯毗咯烷
酮 , 0 . 2% 牛血清蛋 白 , 0 . 45 % 铜试剂 ) 研
磨 , 低速离心后取上清 , 用 0 . 05 M 碳酸盐
缓冲液 p H g . 6 稀释到 1 / 2 0 使用 。 以山定
子实生苗嫩叶作阴性对照 , 处理同上 。
具体操作如下 : 40 孔聚苯乙烯板 , 每
孔加样体积 2 0 0拜l。
( l) 以上述粗提液作为抗原包被 , 4℃
过夜 。 以 P B S T 洗板 3 次 。
(2) 包被 A C L S V 和 A S G V 兔抗血清
(中国科学院微生物研究所制 ) , 以 P B S T
稀释 l / 2 0 0 0 , 3 7 oC 保温 2 小时 。 以 P B S T
洗板 3 次 。
(3 ) 包被辣根过氧化物酶标记的鼠抗
兔 gI G ( 中国农业科学院生物中心制 ) , 以
一 理 1 5一