全 文 ：河北农业技术师范学院学报 第 9卷第 3期 , 1 9 9 5 年 9 月
Jo u r n a l o f H e b e i A g r o t e e h n i e a l T e a e h e r s C o l le g e V o l
.
9 橄 3 S e p t e m b e r 1 9 9 5
狗尾草的同工酶分析
李桂兰 ’ 乔亚科 高书国 毕艳娟
〔河北农业技术帅范学院基础部 ’ 、农学系 , 昌黎 , 。 6 6 6 0 0)
摘 要
分析了冀东地区的狗尾草及变种大狗尾草的过氧化物酶 、 醋酶同工酶差异 ,
并与谷子 (冀谷 8 8) 同工酶进行 比较 。 结果表明 : 两种狗尾草过氧化物酶同工酶
有 三条带不同 , 醋酶同工酶有 4 条带有差异 。 同工酶分析表明大狗尾草与谷子 品
种亲缘关系更接近 些 。
关键词 : 狗尾草 同工酶
中图分类号 : Q 9 4 9 . 7 1 Q 9 4 6 . 5
狗尾草 ( S et “ ir o v ir idl’ 、 .L B e a vu ) 是常见 田 间杂草 , 具有极强的适应性 , 全球均有
分布 。 谷子 (S · ial il 似 .L eB a vu )是狗尾草属 的一个种 ,分类学上 , 由于两个种的亲缘关系
较近 L , ’ ,所以遗传育种专家试图通过远缘杂交等手段将狗尾草的优良基因转人谷子及其
有关农作物中 , 以改良农作物品种的抗逆性等有关性状 , 丰富遗传基础 〔3 〕。 目前有关狗尾
草 的研究较少 , 本试验对狗尾草的同工酶进行了比较分析 , 为远缘杂交工作提供理论依
据 。
1 材料和方法
1
.
1 试验材料
本试验中的谷子品种 (冀谷 8 8 8) 穗直立 , 引自河北省农林科学院谷子研究所 , 1 9 9 3 年
5 月 4 日播于本院试验田中 . 两种狗尾草即狗尾草和大狗尾草 (S · 、 。 . 9 19 。心ea ( F ar ” hc et
、 。
v) rF
a
cn h) 于 1 9 9 2 年采集于本院内 , 1 9 9 3 年分期播于同一 田中 , 1 9 9 3 年 8 月在谷子和
狗尾草抽雄开花期取上部叶片进行同工酶分析 。
1
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2 同工酶分析
1
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2
.
1 凝胶制备 凝胶制备所有试剂如下 :
① 号液 I N H C I 4 8m l + 三 经 甲基甲烷 ( T r i s ) 3 6 . 6 9 . 加 蒸 馏 水定容 至 l o o m l ,
PH S
.
9
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②号液 3 0 . 0 9 丙烯酞胺 ( A e r ) + 0 . 5 9 甲叉双丙稀酞胺 ( B i s ) , 加水至 l o o m l .
③号液 0 . 1 4 9 过硫酸钱溶于 10 m l 水中 ( 当天配制 ) 。
④号液 I N H C I 4 8m l+ T r i s 5 . 9 89 定容 1 0 0m l , p H 6 . 7 .
收稿 日期 : 1 9 9 5 0 5 2 3
修改稿收到 口期 : 1 9 9 5 0 7 3 1
河北农业技术师范学院学报 9卷
⑤号液 1 0 9A er 溶于 s o m l 蒸馏水中 , 加 2 . 5 9 B i s 定容至 10 0 m l .
⑥号液 4 . o m g 核黄素加水至 1 0 ml .
⑦号液 4 0 9 蔗糖定容至 1 0 m l .
⑧号液 0 . 1 9 嗅酚兰溶于 1 0 m l 蒸馏水中 。
⑨号液 电极缓冲液 , T ir s 69 + 甘氨酸 28 . 8 9 溶解后定容至 I 0 0 0 ln , p H .S 3 ,用前稀
释 1 0 倍 。
L号液 T r i s 一 H C I缓冲液 , 取 1 2 . ] g T r i s 定容至 l 0 0 0 m l , 用 H C I调至 p H S · O ·
分离胶制备 : 按①号液 : ②号 : 水 : ③号为 1 : 2 : l : 4 的 比例配制成混合液 , 每
l m l 混合液加 T M E D 0 . 6拌 l ,然后灌制分离胶 。
浓缩胶制备 : 按①号液 : ⑤号 : @ 号 : ⑦号为 1 , 2 , 1 : 4 的比例混合 , 每 l m l 混合
液加 T M E D I · 5拼 l·
1
.
2
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2 过氧化物酶同工酶染色液 联苯胺 2 9 + 冰乙酸 18m l+ 蒸馏水 72 ml 配成母液 ,
取母液 s n l l十蒸馏水 9 3m l+ 3% H ZO : Zm l 即染色液 。
1
.
2
.
3 酉旨酶染色液 0 . 5 9 醋酸一 a 一蔡醋 + 0 . 0 5 9 乙酸一p一蔡醋 + 0 . 1鲍 坚牢兰 B 盐先后溶
于 3 m l 丙酮中 , 用 0 . ] M p H 6 . 5 的磷酸缓冲液稀释至 15 o m l , 2 0 ℃下显色 3 0 m i n .
1
.
2
.
4 样本制备及电泳 取植株上部叶片 1 . 鲍 在加人预冷的 T isr HCI 缓冲液的研钵
中研磨后 , 洗人离心管 , 离心 20 m i l l , 4 0 0 0 r /m i n , 取上清液于 4℃冰箱 中保存 。 电泳时用进
样器取 20 川 和 4 .01 1在两块胶板上对应点样 。 初期电流 Z o m A , 样本进人分离胶后稳流在
30 m A
, 电压 1 50 一 ZOO V , 4 ` C 冰箱 中电泳 51 左右 。
电泳完毕 ,经染色后 , 用水冲洗 , 拍照并绘制酶谱 ,
迁移率 ( I之f ) = 酶带迁移距离指示剂迁移距离
2 结果分析
2
.
1 两种狗尾草形态性状的差异
将两种狗尾草形态学性状列于表 1 , 结果表明 . 在形态上差异明显 , 大狗尾草有高大
的植株性状 , 主要表现在株高较高 、 叶片宽 、 穗子较长 ; 除了大狗尾草穗下节长度较狗尾草
短以外 , 其余性状数值均高于狗尾草 。
表 1 狗尾草和高大狗尾草形态学性状比较 单位 : c m
旗叶 旗下叶 例三叶 例 四叶
种类 株高— — — —长 宽 长 宽 长 宽 长 宽 主茎 仲长川·片数 节问数 毯 长(个 ) (个 ) 招下节长度 分萦数(个 )大狗尾草 日 。 . 5 2() . 7 1 . 9 2 5
狗尾草 7 5 . 9 1几 7 ! · 4 2 1
3 2
.
2 2 7
.
3 1
.
9 2 9
.
6 1
.
7 】0 . 3 9 . 7 1 6 . 2 20 . 3 1 .7
2 1
.
8 1
.
4 1 8
.
2 1
.
3 8
.
0 8
.
0 7
.
9 2 4
.
6 1 2
.
2
.
2 醋酶同工酶
山图 1 可看出谷 护、 大狗尾 草 、 狗尾草只者具有共同的 三条酶带 E : . E 4 , E , , R ,: =
0
.
2 6
.
R f 、一 。 . 2 8 . R ,、 一 。 . 4 9 .这三条带属于高活性带 。 大狗尾草较狗尾草多 出 E : , E : , E 。 带
( R
f :
= 0
.
2 2
.
1之「: = 。 . 3 0 . 1之f , ;= 0 . 3 2 )却缺少 E : ( R f : = 0 . 3 6 ) . 冀谷 8 5 8 的 E : 带 ( R , , = 0 . 20 )
3g jl 李桂兰等 殉尾草的同 l 酶分析
与大狗尾草 E :带相近 。 三者酶谱表明 .大狗尾草与谷 一 r 的酪酶同工酶相似程度更高些 ,遗
传上亲缘关系更近些 。
2
.
3 过氧化物酶同工酶
过氧化物酶同工酶如图 2 听示 . 二者具有共同的 6 条酶带 · 即 1 · 2 · 3 · 1。 · 1 1 · 15 号带 。
大狗尾草与狗尾草比 . 前者其有 1 2 , l j 带 . 后者具有 13 带 . 二者在 3 条带 上有区别 . 其余
8 条带完全相 同 。 冀谷 8 8 听具有的特征带为 4 . 5 . 7 . 8 号四 条带 . 其余 8 条带与大狗尾草
相同 。 酶谱表明 , 两种狗尾草表现在过氧化物酶方而差异较小 · 大狗尾草与冀谷 8明 相同
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扫 八 .酶同工酶 .习 2 过氧化物酶同工酶
表 2 过氧化物酶同工酶迁移率 ( l之` )
阴带
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迁移率 ( R f ) 迁移率 ( {fI 》
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3 讨 论
本研究明确了狗尾草与大狗尾草一庄醋酶 、 过氧化物酶同工酶 _ :-l 的异同 . 反映出大狗尾
4 5 河北农业技术师范学院学报 9卷
草在同工酶方面酶带更多一些 , 形态学上的差异也反映了遗传基础上的不同 , 说明大狗尾
草这个变种 比原种狗尾草有了进一步的进化和变异 ,并看出大狗尾草与直立型的谷子 (冀
谷 8 8 8) 亲缘关系更接近 。
参 考 文 献
2
河北植物志编委员会编 . 河北植物志 .
山东农学院编 . 植物生理学实验指导 .
周俊彦 . 云南狗尾草 x 谷子 (四倍体 )F ,
第三卷 . 、 石家庄 :河北科学技术出版社 , 19 1 · 筋 8一 3 61
济南 : 山东科学技术出版社 , 1 9 8 0
组织培养植株再生 . 作物学报 , 198 8 , 1 4 ( 3 ) : 227 一 23 1
第一作者简介
李桂兰 : 32 岁 , 女 ,讲师。
I S O Z Y M E A N A L Y S IS O F S
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