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　　由表 1可见 ,三七茎叶黄酮可以改变 SMMC-7721细胞
的周期分布 , 即 G1期细胞百分率有所下降 , S期百分率增加 ,
这种作用呈剂量依赖性。这一结果显示 , 三七茎叶总黄酮可
动员 SMMC-7721由 G0/G1期进入 S期 ,使 S期细胞堆积
3　讨论
肝癌是常见的恶性肿瘤之一 , 全球每年 31.5万患者中 ,
我国约有 13.8万 ,占 43.7%。在我国 , 肝癌的死亡率居肿瘤
死亡率的第二位 , 传统临床治疗的疗效均不理想 [ 4 ～ 5] 。目前
普遍认为 , 肿瘤的发生可能与细胞增殖与死亡的速度平衡失
调有关。利用药物诱导肿瘤细胞凋亡很可能成为治疗肿瘤的
一条很有希望的途径 , 也是近年来生物医学和肿瘤学领域研
究的热点之一。
三七茎叶总黄酮对人肝癌 SMMC-7721细胞有一定的抑
制作用 , 并呈时间及剂量依赖性关系。流式细胞仪检测发现
SMMC-7721细胞的凋亡率不高 , 可见三七茎叶总黄酮呈剂
量依赖性地将细胞聚集在 S期 , 这可能与该细胞的再分化有
关 , 因为 DNA在 S期解旋 、复制 , 大量细胞堆积于 S期 , 使药
物作用于 DNA的位点增加 , 易于引起基因表型的改变 , 从而
影响细胞的代谢与功能 ,导致细胞重新分化 [ 6] , 这提示临床上
可进一步与细胞周期抗肿瘤药联合使用 , 更好地杀伤 S期细
胞 [ 7] , 如苦参碱 、20-(R)-人参皂甙和人参皂甙 Rg3。 同时
它们又能阻止 S期细胞进入 G2/M期 , 抑制细胞增殖。本结
果与 Khafif等 [ 8]报道姜黄素将人口腔鳞癌细胞阻断在 S/G2M
期相符 , 与薛妍等 [ 9]报道的姜黄素将人肝癌细胞 SMMC-
7721阻断在 S/G2M期相符 ,这与一般抗肿瘤药物多使细胞停
留在 G0/G1期不再分裂增殖的结果不一致 ,这可能是由于不
同药物对细胞周期作用的分子靶点不同 , 其具体机制尚有待
进一步研究。
参考文献:
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[ 9]薛妍 ,夏天 ,赵建斌 ,等.姜黄素对人肝癌细胞 SMMC-7721的抑
制作用 [ J].第四军医大学学报 , 2000, 21(5):84～ 86.
(收稿日期:2006-08-04。)
水提三七叶苷副产物多糖的分离及含量测定
王　扣 , 李莲芳 , 段　霁
(云南中医学院中药学院 , 云南 昆明 650200)
　　摘　要:目的:建立水提三七叶苷副产物多糖的提取 、分
离及含量测定方法。方法:水提三七茎叶总皂苷废弃液经纳
滤膜浓缩 5倍后 , 低温加热浓缩至密度为 1.25,乙醇多次沉淀
提取多糖 , 用 3, 5-二硝基水杨酸(DNS)比色法以 485nm为检
测波长测定多糖含量。结果:浓缩液中多糖得率 39.46%, 含
量为 15.44%, 方法的回收率为 100.67%, RSD=2.74%。结
论:从水提三七叶苷废弃液中提取多糖有较大开发利用价值;
DNS比色法测定多糖含量操作简单 , 重现性好 , 可作为三七中
多糖含量测定的常规方法。
关键词:三七茎叶;废弃液;多糖;3, 5 -二硝基水杨酸比
色法;含量测定
中图分类号:R285.5 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2006)06-0038-02
三七茎叶为五加科人参属植物三七 Panaxnotoginseng
(Burk.)F.H.Chen的地上部分 , 包括茎叶 、花 、果梗。主含人
参二醇型和人参三醇型皂苷类成分 , 尚含有黄酮 、氨基酸 、多
糖等多种活性成分 [ 1]。 导师王兴文教授采用中药水提技术 ,
结合大孔吸附 、脱色树脂提取分离三七茎叶总皂苷 ,并实现了
产业化 [ 2] 。然而大孔吸附树脂分离三七叶苷的过程中 , 大量
的多糖类物质作为杂质被除去。有研究表明:三七中多糖类
成分具有增强免疫功能 , 促进巨噬细胞和抗体分泌细胞的活
性等作用 [ 3] 。为综合利用三七资源 ,促进三七产业的发展 ,我
们从水提三七叶苷的废弃液中提取多糖 , 并对其含量进行
测定。
1　仪器 、材料及试剂
ST-UF200膜分离机(美国产 , 理论分子量 MW200), UV
-2450紫外可见分光光度仪(日本岛津), XS-125A电子天
平(瑞士产), 752N紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限
公司), GOA型电热真空干燥箱(天津产), Sartorius普及型 pH
计(PB-10)(北京塞多利斯仪器系统有限公司),电热恒温水
浴锅(江苏省医疗器械厂)。
水提三七叶苷废弃液由云南红云生物生物工程技术有限
公司提供 , D-无水葡萄糖(购于中国药品生物制品检定所 ,
供含量测定用)。
苯酚 、氢氧化钠 、酒石酸钾钠 、亚硫酸钠 、无水乙醇 、丙酮 、
乙醚(均为分析纯), 水为去离子水。
2　方法与结果
2.1　粗多糖的提取　先将水提三七叶苷废弃液经纳滤
(Nanofiltration, NF)浓缩 5倍 , 去除 K+、Na+、Cl-等无机离子 ,
部分小分子有机物和大量的水分 , 再低温加热浓缩至密度为
1.25。从中取出 500g, 加入 4倍量 95%乙醇 , 搅拌均匀 , 静置
38 云 南 中 医 中 药 杂志　　　　　　　　　　2006年第 27卷第 6期
过夜 , 收集沉淀 , 再加 1500ml95%乙醇进行第 2次沉淀 , 抽
滤 , 沉淀物用无水乙醇 , 丙酮抽洗 ,低温减压干燥 ,后移至干燥
器中冷却。得土黄色多糖粉末 197.30g,得率为 39.46%。
本品难溶于乙醇 , 丙酮 , 乙醚等各类有机试剂 , 易溶于水
呈棕色溶液。 Molish反应阳性。
2.2　含量测定
2.2.1　3, 5-二硝基水杨酸(DNS)试剂的配制 [ 4 ～ 5] 　称取 3,
5-二硝基水杨酸 3.15g,溶于 131ml2mol/LNaOH溶液中 , 再
将其加入到 250ml含 91.0g酒石酸钾钠的热水溶液中 , 搅拌使
溶解 , 然后加入 2.5g苯酚和 2.5g亚硫酸钠 , 充分搅拌 , 溶解 ,
冷却后定容至 500ml,用棕色瓶中贮存 , 放置 1周后稳定。
2.2.2　葡萄糖标准溶液的配制　精密称取 D-无水葡萄糖
5.3mg于 10ml容量瓶中 ,加水溶解配成 530μg/ml的对照品溶
液。
2.2.3　样品溶液的配制　准确称取粗多糖 50mg一份置 25ml
容量瓶中 , 加水溶解 ,定容至刻度 , 摇匀 , 作还原糖供试液;另
称取 500mg粗多糖置 150ml锥形瓶中 ,用 15mlH
2
O溶解后加
入 10ml6mol/LHCl, 封口 , 于沸水浴中加热 60min, 取出冷却
至室温 , 用 6mol/LNaOH溶液调 pH值到 8.0, 抽滤至 100ml
容量瓶中 , 残渣用水冲洗 ,定容 ,摇匀。从中吸取 10ml稀释到
25ml,作总糖供试液。
2.2.4　标准曲线的绘制　精密吸取葡萄糖标准溶液 0.4,
0.8, 1.2, 1.6, 2.0ml置 25ml容量瓶中 , 分别加水使成 2.0ml,
各加 1.5mlDNS试剂 , 摇匀 , 于沸水浴中加热 5min, 取出后迅
速冷却 , 加水定容至刻度。用 752N紫外分光光度计于 485nm
处测定各溶液的吸收度 , 同时以 2.0ml去离子水做空白。回
归方程为:A=0.0243C+0.0025(r=0.9992)。结果表明 , 葡
萄糖溶液在 8.48 ～ 42.4μg/ml范围内与吸收度有良好的线性
关系。
2.2.5　精密度试验　精密吸取对照品溶液 1.0ml, 按标准曲
线制作方法测定吸光度 , 重复测定 6次 , 平均吸收度为
0.5188, RSD=0.15%(n=6)。
2.2.6　稳定性试验　精密称取粗多糖 51.0mg于 25ml容量
瓶中 , 溶解定容至刻度 ,显色后每隔 5min测定一次吸光度 , 共
测 7次 , RSD=1.06%。表明样品溶液在 30min内稳定。
2.2.7　重现性试验　精密称取粗多糖样品 6份 , 按 2.2.3项
下方法制备还原糖供试液 6份 , 显色 , 测定 , 结果吸光度的
RSD为 1.45%。
2.2.8　回收率试验　称取已知含量的粗多糖样品 , 分别精密
加入一定量的无水葡萄糖对照品 ,进行含量测定 , 结果见表 1。
表 1　回收率试验结果(n=6)
编号 取样量(mg)
样品中还原糖量
(mg)
加入葡萄糖量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
1 11.4 1.442 1.440 2.837 96.87
2 9.90 1.252 1.240 2.533 103.28
3 10.2 1.290 1.280 2.549 98.34
4 9.50 1.202 1.200 2.420 101.52
5 11.6 1.467 1.440 2.909 100.11
6 9.60 1.214 1.200 2.461 103.88
平均回收率 χ=100.67%　　　　RSD=2.74%
2.2.9　样品的含量测定　分别吸取还原糖供试液与总糖供
试液各 1.0ml置 25ml容量瓶中 , 按 2.2.4项下方法测定单糖
与总糖含量 , 平行测定 3份。按以下公式计算样品中多糖
含量:
还原糖含量 =溶液中还原糖毫克数 ×稀释倍数 /样品毫
克数 ×100%
总糖含量 =水解后还原糖毫克数 ×稀释倍数 /样品毫克
数 ×0.9×100%
多糖含量 =总糖含量 -还原糖含量
结果还原糖和总糖的含量平均值为 10.42%和 25.86%,
故多糖含量为 15.44%。
3　讨论
目前 ,对于多糖的研究 , 人们多采用苯酚 -硫酸法测定含
量 ,但硫酸具有强的腐蚀性 , 且粗多糖中尚存还原糖的干
扰 [ 6] 。 DNS比色法近年来应用越来越广泛 , 其具有操作方便 ,
节约成本 ,结果准确可靠的优点。
文献中报道 DNS比色法的测定波长多在 520 ～ 550nm,但
本实验按照最普遍的 DNS试剂配制方法配制了 5份显色剂 ,
分别与葡萄糖标准溶液 , 还原供试液与总糖供试液显色后用
UV-2450紫外可见分光光度计于 200 ～ 800nm进行全程扫
描 ,发现均在(485 ±2)nm处有最大吸收 , 故确定检测波长
为 485nm。
多糖水解为单糖时 ,每断裂一个糖苷键需加入一分子水 ,
故在计算多糖含量时应乘以 0.9校正。
水解多糖时 ,考察了盐酸加入量 ,水解时间以及用氢氧化
钠中和时 pH值高低对水解结果的影响 , 确定最佳条件为加入
10mlHCl, 加热 60min,调 pH值到 8.0。实验中还发现 ,由于粗
多糖溶液颜色较深 ,用酚酞指示中和结果干扰较大 , 故不提倡
采用此方法。
从三七茎叶提苷母液中得到的多糖 , 若研制成不同剂型
的系列保健产品 ,可为企业创造额外的可观利润 ,使三七资源
得到充分利用 ,为企业增产增效 , 故有较大的开发利用价值和
应用前景。
参考文献:
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(收稿日期:2006-07-21。)
392006年第 27卷第 6期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂 志
YunnanJournalofTraditionalChineseMedicineandMaterialMedicine
Vol.27.No.6 (GeneralNo.162) December, 2006
MainContent
ClinicalObservationontheEfectoftheTreatmentof35 GonarthritisPatientswiththeCombinationofTraditionalChineseMedicineand
WesternMedicine
PENGMei-ling, WANGHui⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
InfluenceoftheTotalFlavonoidofStalkandLeavesofPanaxNotoginsengonSMMC-7721CelProliferation
ZHANGZhi-xin, HUANGBao-gui, ZHANGShi-xiu, etal⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
StudyontheSeparationandContentDeterminationofPolysaccharideofStemsandLeavesofPanaxNotoginsengafterWaterExtraction
WANGKou, LILian-fang, DUANJi⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
APrimaryStudyonthePharmacologyofLobeliaSequiniliLévl.etVantofNatioanlity
ZHANGXiao-nan, XUHong-hua, ZHAOYun-li⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
ClinicalObservationontheEfectoftheTreatmentof35 GonarthritisPatientswiththeCombinationofTraditionalChineseMedicineand
WesternMedicine
PENGMei-ling, WANGHui
(YunnanXishuangbannaPeoplesHospital, Jinghong, Yunnan, 666100)
Abstract:Objective:ToobservetheclinicalefectivenessofthetreatmentofgonarthritispatientswiththecombinationoftraditionalChinesemedicine
andwesternmedicine.Methods:70gonarthritispatientsweredividedintoonetestgroupwith35patientsandonecontrolgroupwith35patientsatrandom
sample.Thetestgroupwastreatedwithintumesce-painkilingaerosoltogetherwithGuningacupuncturewhilethecontrolgroupwasonlytreatedwith
Guningacupuncture.Results:Therateofthetotalefectivenessofthetestgroupwas91.4%whiletherateofthecontrolgroupwas88.6%.thereshowed
nosignificancediferences(P>0.05), butthecomparisonbetweentheefectiverateofthetwogroupsshowedsignificancediferences(P<0.05).
Conclusion:ThecombinationoftraditionalChiesemedicineandmesternmedicinehasacertainefectonthetreatmentofgonarthrosispatients.
Keywords:gonarthritis;combinationoftraditionalChinesemedicineandwesternmedicine;intumesce-painkillingaerosol
InfluenceoftheTotalFlavonoidofStalkandLeavesofPanaxNotoginsengonSMMC-7721CelProliferation
ZHANGZhi-xin, HUANGBao-gui, ZHANGShi-xiu, SONGGuan-bin
(WenshanHigherTeacherTrainingSchool, Yunnan, 663000)
Abstract:Objective:ToobservetheinfluenceofthetotalflavonoidofstalkandleavesofpanaxnotoginsengonSMMC-7721 celproliferationand
withering.Methods:MTTmethodwasusedtoexamineandtesttheinhibitingefectofthetotalflavonoidofstalkandleavesofnotoginsengwithdiferent
densityonSMMC-7721celproliferationandaflowcytometrywasusedtoanalyzethecellwithering.Results:Thetotalflavonoidofstalkandleavesof
notoginsengwithdiferentdensityturnedtobe24h, 48h, 72hrespectively.Thetotalflavonoidofstalkandleavesofnotoginsengshowedtheinhibiting
efectontheSMMC-7721celproliferationofhumanlivercancercels, anditsdependenceontimeanddosage.Conclusion:Thetotalflavonoidofstalk
andleavesofpanaxnotoginsenghaschangedtheperiodicdistributionofSMMC-772, i.e.thefallofG1periodiccelpercetntageandtheriseofSperiodic
percentage, whichpresentsdosagedependence.
Keywords:notoginsengstalkandleaves;totalflavonoid;SMMC-7721cel;proliferation;withering
StudyontheSeparationandContentDeterminationofPolysaccharideofStemsandLeavesofPanaxNotoginsengafterWaterExtraction
WANGKou, LILian-fang, DUANJi
(YunnanCollegeofTraditionalChineseMedicine, Kunming, Yunnan, 650200)
Abstract:Objective:Toestablishafeasiblemethodforextracting, separatinganddeterminingpolysaccharidefromdiscardedliquorofstemsand
leavesofpanaxnotogensengaftersaponinshasbeenextracted.Methods:Thediscardedliquorofstemsandleavesofpanaxnotoginsengafterwater
extractionwascondensed5timesandhypothermalyheatedtothedensityof1.25throughnano-filtration, fromwhichthepolysaccharidewasobtainedfrom
alcoholprecipitation.3, 5-Dinitrosalicylic(DNS)colorimetrywasusedtodeterminethecontentofthepolysaccharideby485nmwavelength.Results:The
rateofyieldingthepolysaccharidefromthecondensedliquorwas39.46%, thecontentwas15.44%, therateofrecovery100.67% andRSDwas2.74%
(n=6).Conclusion:Theextractionofthepolysaccharidefromdiscardedliquorofstemsandleavesofpanaxnotogensenghasagreatvalueofdevelopment
andutilization.
Keywords:notogensengstemsandleaves;discardedliquor;polysaccharide;3, 5-Dinitrosalicylic(DNS)colorimetry;contentdetermination
APrimaryStudyonthePharmacologyofLobeliaSequiniliLévl.etVantofNatioanlity
ZHANGXiao-nan, XUHong-hua, ZHAOYun-li
(ChengduTraditionalChineseMedicineUniversity, Chengdu, Sichuan, 611730)
Abstract:Objective:Toobservetheefectsofpain-relieving, anti-inflammationandanti-bacteriaoflobeliasequinililévl.etvant, andconductan
acutevirulentexperimenttoprovideaexperimentalbasisforafurtherstudy.Methods:Themethodofaceticacidwrestlinganddimethylbenzenewasused
tocauseauricularinflammationrats.Atestofplatesteelringinhibitingbacteriawasconductedtoobservetheefectsofpain-relieving, anti-inflammation,
anti-bacteriaoflobeliasequinililévl.etvant.Thetestsmalratswereinfusedwithmaximaldosagetoobserveitsacutetoxicity.Results:Theratsinfused
for3dayswith2.5, 10.0g/kgof60% ofalcoholextractoflobeliasequinililévl.etvantshowedtheinhibitingeffectonthewrestlingpainoftherats
causedbytheaceticacid.Theratsinfusedfor3 dayswith10.0g/kgshowedtheinhibitingeffectontheauricularinflammationratscausedbythe
dimethylbenzene.ThelowestinhibitingbacteriadensityofTypeAStreptococcushemolyticus, typhoidbacillus, Staphylococcusepidermidiswas50mg/ml,
andthelowestdensityofBacilussubtiliswas200mg/ml.Conclusion:Lobeliasequinililévl.etvanthastheefectsofpain-relieving, anti-inflammation
andanti-bacteria.
Keywords:Lobeliasequinililévl.etvant;pain-relieving;anti-inflammation;bacteria-inhibiting;acutetoxicity