全 文 ：[中药指纹图谱]
三七叶的 HPLC指纹图谱的研究
王隶书 , 　程东岩 , 　董方言
(吉林省中医中药研究院 吉林 长春 130021)
收稿日期:2002-07-15
作者简介:王隶军(1966～ ),女 ,吉林省长春市人 ,副主任药师 ,研究方向:中药化学与中药新药开发。电话:0431-5934096.
关键词:三七叶;指纹图谱;高效液相色谱法
摘要:目的:用高效液相色谱法建立三七叶的指纹图谱分析方法。方法:采用Zorbax C18(4.6×250mm)色谱分析柱 , 甲醇
-4%磷酸水溶液(65∶35)为流动相 , 检测波长为 203nm , 以人参皂苷 Rb3 为参照物。结果:共有 12 个共有峰。 结论:方法
准确 、可靠 , 为更好地控制三七叶的内在质量提供了科学依据。
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2003)02-0088-02
Study on HPLC fingerprint of leaves of Panax Notoginseng
WANG Li-shu , 　CHENG Dong-yan , 　DONG Fang-yan
(Academy of Tradi tional Chinese Medicine and Materia Medica of Ji lin Province , Changchun 130021 , China)
Key words:Leave of Panax Notoginseng;fingerprint ;HPLC
Abstract:Objective:To establish the method of fingerprint analysis of leaves of Panax Notoginseng by HPLC。
Methods:Zorbax C18(4.6×250mm)column w as used , CH3OH-4%H3PO4 solution (65∶35)as mobile phase
and detection w avelength at 203nm , and ginsenosides Rb3 was used as reference compound.Results:Finger-
print consisted of 12 common peaks.Conclusion:This method is accurate , reliable and provides a scientific basis
for controlling the quality of leaves of Panax Notoginseng.
　　三七为五加科植物三七 Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.
chen.的干燥根 ,具有散瘀止血 , 消肿定痛 、补益气血等功效 ,
是传统的名贵中药材 , 主要产区为云南 、广西 , 药用资源有
限。三七叶是三七的干燥茎叶 ,含有与三七根类似的皂苷类
有效成分 , 并具有同样的功效 , 目前以三七叶为原料药材的
中成药正在逐渐增多 , 为更有效地控制其内在质量 , 从而保
证制剂质量的稳定 ,我们用 HPLC 法建立了三七叶药材指纹
图谱的分析方法。
1　仪器与试药
Waters 600E 高效液相色谱仪 , 2487 双波长紫外检测
器 ,所用试剂为分析纯 ,水为重蒸水。人参皂苷 Rb3 对照品
自制 ,以 HPLC归一化法测定纯度 98.6%。
三七叶为“中国文山三七产业园区”正常情况下种植的
产物 ,为五加科植物三七 Panaxnotoginseng(Burk)F.H.Chen
的干燥茎叶 ,产于云南文山州砚山县江那镇 , 生长期限为三
年。
2　实验方法与结果
2.1　色谱条件的确定
2.1.1　检测波长的确定
三七叶中所含的人参皂苷 Rb3 等皂苷类成分的光谱图
及文献研究报道可知 , 三七叶中的皂苷类成分只在 203nm
有吸收 , 故确定检测波长为 203nm。
2.1.2　流动相及柱温的确定
本实验的检测波长为 203nm , 为紫外末端吸收 , 曾采用
以乙腈-磷酸水溶液 、甲醇-磷酸水溶液梯度洗脱 , 结果基线
波动太大 , 且色谱峰形太差 ,峰个数也未增加。经采用等梯
度洗脱 , 基线及峰形较正常 ,曾采用多种流动相系统:(1)乙
腈—水(30∶70),(2)乙腈—0.05%磷酸水溶液(100∶400),
(3)甲醇—4%磷酸水溶液(65∶35)。结果表明 , 3 种流动相
中以第 3 种流动相系统为最佳 ,谱图上各个色谱峰(203nm)
的分离度较好 , 保留时间适中 ,因此选甲醇—4%磷酸水溶液
(65∶35)作为三七叶的 HPLC 指纹图谱检测的流动相。同时
对柱温也进行了考察 , 实验结果表明 ,柱温 40℃保留时间适
中 , 分离度较好。
2.1.3　色谱条件的确定
Zorbax C18(4.6mm×250mm)色谱分析柱;甲醇—4%磷
酸水溶液(65∶35)为流动相;检测波长为 203nm;柱温 40°C;
理论塔板数按人参皂苷 Rb3 峰计算应不低于 2000。
2.2　供试品溶液的制备
取三七叶粗粉约 1.25g ,精密称定 , 加水 100mL , 回流提
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中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
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取 1h ,滤过 , 滤液浓缩至近 30mL ,通过 D101型大孔吸附树脂
柱(内径 1.5cm , 高 20cm , 12g树脂), 以水 100mL 洗脱 , 弃去
水液 ,再用 70%乙醇 100mL 洗脱 ,收集洗脱液 , 蒸干 ,以甲醇
溶解并定量转移至 10mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 离
心 ,作为药材供试品溶液。
2.3　参照物的选择及参照物溶液的制备
精密称取人参皂苷 Rb3 对照品 , 加甲醇制成每毫升含
0.25mg 的溶液 ,作为参照物溶液。
2.4　测定法
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各 10μL , 同 2.1
项下色谱条件注入液相色谱仪 ,记录 90min的色谱图 ,即得。
供试品色谱中 ,以人参皂苷 Rb3 色谱峰(S 峰)的保留时间和
峰面积为 1 , 计算各指纹峰的相对保留时间和峰面积比值。
2.5　方法学考察
2.5.1　稳定性及精密度试验。
取三七叶样品 ,按“供试品溶液制备”项下方法制备供试
品溶液 ,分别在 0 , 2 , 4 , 6 , 8h 连续进样 5 次 , 检测指纹图 , 测
定各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。 结果表明 1 ～
11 号色谱峰的相对保留时间的 RSD(%)分别为 0.85%～
1.98%, 相对峰面积 RSD(%)为 0.75%～ 1.30%,符合指纹
图谱的要求 ,说明:①三七叶供试液常温下 8h之内能保持较
好的稳定性。 ②仪器等整个检测系统的精密度良好。
2.5.2　重现性实验
取三七叶样品 ,按“供试品溶液制备”项下方法制备 5 份
供试品溶液 ,分别进样 , 检测指纹峰 ,结果 1～ 11 号色谱峰的
相对保留时间的 RSD(%)分别为 1.25%～ 2.28%, 相对峰
面积的 RSD 为 1.22%～ 2.37%, 符合指纹图谱的要求 , 说
明本方法重现性好。
2.6　指纹图谱及技术参数
2.6.1　共有指纹峰的标定
按上述方法检测 10 批三七叶的指纹图谱 , 结果表明 , 由
参照物溶液的单独谱图及溶剂谱图可知 , 5min 之前的高峰
为溶剂峰 ,综合 10 批三七叶样品的色谱图 , 发现其中有 12
个色谱峰是 10 批三七叶所共有的 , 因此确定它们为共有指
纹峰 ,且共有峰总面积占总峰面积的 90%以上。根据 10 批
样品的平均值 ,以人参皂苷 Rb3 作为参照物标定共有指纹峰
相对保留时间如下:1(0.531 ～ 0.532), 2(0.582 ～ 0.584),
3(0.684 ～ 0.686), 4(0.761 ～ 0.763), 5(0.943 ～ 0.945),
S(1.00), 6(1.472 ～ 1.474), 7(2.323 ～ 2.325), 8(2.573 ～
2.575), 9(3.231 ～ 3.233), 10(3.415 ～ 3.417), 11(4.02 ～
4.04)。见图 2。
2.6.2　共有指纹峰面积的比值
依据指纹图谱研究的技术要求的有关规定 , 药材指纹峰
图 1　参照物(人参皂苷 Rb3)图谱
图 2　三七叶指纹图谱(S.人参皂苷 Rb3)
中占总峰面积 10%以上的共有指纹峰尚需标定其与参照物
峰面积的比值 , 根据 10 批三七叶的指纹图谱结果可知:4 峰
分离条件好时出未达基线分离的双峰 , 分离不好时出现一个
平头峰 ,故将其视为一组峰计算峰面积;结果确定需标定共
有指纹峰面积比值的色谱峰为 4 , 8 , 10 号峰。其峰面积与参
照物峰面积比值分别为:4(1.17 ～ 1.95), 8(0.81 ～ 1.35):
10(1.69～ 2.53)。
3　讨论
3.1　药材供试品的制备　经过实验发现 ,以甲醇 、乙醇为提
取溶剂时 , 指纹图谱峰数目明显少于以水作提取溶剂时的指
纹图谱峰数 , 故选择以水作提取溶媒。
分别将提取液以大孔树脂法及水饱和正丁醇进行处理
纯化 ,结果后者制得的供试液指纹图谱峰数明显少于前者 ,
为最大限度地保留供试品中的化学成分并保证分析测试的
顺利进行 , 故选择前法进行处理样品。
3.2　参照物的选择
由于三七叶主要活性成分为达玛烷型的四环三萜皂苷 ,
且以人参皂苷 Rb 组居多 , 故选择以人参皂苷 Rb3 作为参照
物进行测定。
参考文献:
[ 1] 　邵春杰 ,徐景达 ,姜锡昆,等.人参花蕾的化学成分研究[ J] .中
药通报 , 1984 , 9(4):28.
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