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长春七花和果实挥发油的抗菌活性研究



全 文 :长春七 Libanotis Buethorimensis (Fish) DC.系伞形科岩风属植物,又名长虫七、岩风,分布于新疆、
甘肃和陕西等省区。根状茎入药,主治感冒、咳嗽、关节肿痛、跌打损伤、风湿筋骨痛等病症[1]。国内外对
长春七化学成分和药理活性进行深入研究,王长岱等[2-3]从长春七中分离出新化合物长春七素甲;张宇
洁等[4]利用细胞膜色谱模型筛选长春七中具有抑制 HeLa细胞增殖的活性成分;陈光娟等[5]发现长春七
根茎的中性油和酚酸性部分都具有很好的退热、止痛、消炎等多种动物实验活性;石娟等[6]采用醋酸致
小鼠扭体反应及小鼠热板法研究表明长春七 70%乙醇提取物和乙醚提取物有较好的镇痛作用;Bo
Liang等[7]对太白山野生长春七的花和果实挥发油利用 GC-MS联用技术进行成分分析。但是对于长
春七挥发油的抗菌、杀菌活性在国内外均没有报道,对长春七不同部位挥发油的抗菌、杀菌活性研
究,有利于寻求活性高的部位和成分,促进其药理活性的开发和利用。本文采用微量二倍连续梯度稀
释法,采用 8种菌株:大肠杆菌 ATCC25922株 (Escherichia coli ATCC25922)、伤寒沙门菌 50127株
(Salmonella typhi 50127)、鼠伤寒沙门菌 50013株(Salmonella typhimurium 50013)、肠炎沙门菌 50040株
(Salmonella enteritidis 50040)、福氏志贺菌 51065 株 (Shigella flexneri 51065)、金黄色葡萄球菌
ATCC25925株(Staphylococcus aureus ATCC25925)、白色假丝酵母菌 85021株(Candida albicans 85021)、
肺炎球菌 32201株(Streptococcus pneumoniae 32201)设计实验,比较相应的 MIC和 MBC值,测定挥发
油的抗菌、杀菌活性。
1 材料与方法
1.1 材料
长春七(花期全株)于 2005年 7月 25日采集于陕西太白山兔溜子岭,经陕西师范大学生命科学
学院田先华教授鉴定,为伞形科岩风属植物长春七。
1.2 方法
1.2.1 挥发油的提取
收稿日期:2008-08-15
基金项目:陕西省自然科学基金研究计划项目(2004B06)
作者简介:梁 波(1978-),男,陕西户县人,硕士,甘肃合作民族师范高等专科学校教务处讲师
长春七花和果实挥发油的抗菌活性研究
梁 波 1,李宝林 2
(1.合作民族师范高等专科学校教务处,甘肃合作 747000;
2.陕西师范大学化学与材料科学学院,陕西西安 710062)
摘 要:采用水蒸气蒸馏法提取长春七花和果实的挥发油,分别对其挥发油进行体外抗菌活
性实验,测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),比较相应的 MIC和 MBC值,确定挥
发油的抗菌活性。 实验结果显示两种挥发油对所选取的 8种菌株最小抑菌浓度和最小杀菌浓
度都比较高。 说明这两种挥发油的抗菌活性均很弱,其药理活性还有待于进一步的研究。
关键词:长春七;挥发油;最小抑菌浓度;最小杀菌浓度
中图分类号:S567.23 文献标识码:A 文章编号:1674-0033(2008)05-0047-03
第 22卷 第 5期
2008年 10月
商洛学院学报
Journal of Shangluo University
Vo1.22 No.5
Oct. 2008
DOI:10.13440/j.slxy.1674-0033.2008.05.010
取长春七新鲜的花和干燥的果实各 500g,粉碎,水蒸气蒸馏法提取挥发油,经食盐饱和,乙醚萃取
3次,合并有机相后用无水硫酸钠干燥,回收乙醚,分别得到具有特殊香味的黄色粘稠状液体 1.25g和
3.80g,收率为 0.25%(w/w)和 0.76%(w/w),密封储藏在-4℃的冰箱中备用。
1.2.2 长春七的花和果实挥发油抗菌、杀菌活性测定
1.2.2.1 试验菌株
菌株采用中国医学细菌保藏中心提供的标准菌株冻干品 8种,2004年 5月复苏,由西安交通大
学医学院免疫与病原生物学系代为保存。本试验采用 8种菌株为:大肠杆菌 ATCC25922株、伤寒沙门
菌 50127株、鼠伤寒沙门菌 50013株、肠炎沙门菌 50040株、福氏志贺菌 51065株、金黄色葡萄球菌
ATCC25925株、白色假丝酵母菌 85021株和肺炎球菌 32201株等。
1.2.2.2 菌液和培养基的配制
菌液的配制:将细菌接种于 MH(Mueller-Hinton Broth)肉汤,置普通培养箱 37°C、24h培养,比浊
法进行记数,用培养液调配成 106CFU·mL-1。
培养基:肉汤培养基以常规方法制备肉汤培养基,采用日本多价蛋白胨,肉膏量为 0.5%。
1.2.2.3 试验方法
MIC的测定:精确称取样品,将样品溶于含 5%Tween-80的肉汤,并进行二倍连续梯度稀释。将各
浓度的样品液分别加到 96孔培养板(0.15mL/孔),再依次加入浓度为 106CFU·mL-1的菌液 50μL/孔;同
时设立细菌对照组。置于湿盒内,在 4°C的冰箱内作用 8h,普通培养箱 37°C、24h培养,观察结果。无细
菌生长孔的最小药物浓度为最小抑菌浓度(MIC)[8]。
MBC的测定:依次将细菌未生长孔 (≥MIC) 的培养物用无菌生理盐水稀释 20倍,分别吸取
0.05mL点种于琼脂平板,置于普通培养箱 37°C、24h培养。无细菌生长接种区域所对应的最小药物浓
度为最小杀菌浓度(MBC)[8]。
长春七花和果实挥发油的体外抗菌、杀菌生理活性均采用本试验方法。
2 结果与讨论
长春七花和果实的挥发油体外抗菌、杀菌活性测定采用微量二倍连续梯度稀释法。抗菌、杀菌活
性测定的 MIC和 MBC值见表 1。从表中可以看出长春七花和果实的挥发油对大肠杆菌 ATCC25922
株、伤寒沙门菌 50127株、肠炎沙门菌 50040株、鼠伤寒沙门菌 50013株、福氏志贺菌 51065株、金黄
色葡萄球菌 ATCC25925株、白色假丝酵母菌 85021株、肺炎球菌 32201株等所选择的 8种菌株均有
抑制作用,长春七花的挥发油对伤寒沙门菌 50127株、肠炎沙门菌 50040株、福氏志贺菌 51065株、白
菌株
花的挥发油/(mg/mL) 果实的挥发油/(mg/mL)
MIC MBC MIC MBC
大肠杆菌 ATCC25922株
伤寒沙门菌 50127株
肠炎沙门菌 50040株
鼠伤寒沙门菌 50013株
福氏志贺菌 51065株
金黄色葡萄球菌 ATCC25925株
白色假丝酵母菌 85021株
肺炎球菌 32201株
46.87
23.48
46.87
46.87
23.48
46.87
46.87
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NT
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46.87
NT
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NT
46.87
46.87
51.0
25.5
25.5
51.0
25.5
25.5
25.5
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25.5
51.0
51.0
25.5
25.5
25.5
51.0
注:NT: not tested(未检测出)
2008年 10月商洛学院学报48
表 1 长春七花和果实的挥发油抗菌抑菌活性试验
参考文献:
[1] 中国科学院西北植物研究所.秦岭植物志:1卷·种子植物:3册[M].北京:科学出版社,1981:408-412.
[2] 王长岱,郭建文,陈 驹,等.长春七化学成分的研究[J].植物学报,1983,25(2):153-156.
[3] 王长岱,陈 驹.长春七化学成分的研究再报[J].植物学报,1986,28(2):192-195.
[4] 张宇洁,贺浪冲.用细胞膜色谱模型筛选长春七抑制 HeLa细胞增殖的活性成分[J].中国药学杂志,2005,40(6):463-465.
[5] 陈光娟,沈亚琴,马树德.长春七中性油及酚酸性部分药理作用初步研究[J].陕西新医药,1985,14(12):46-49.
[6] 石 娟,王云霞,边 敏.长春七提取物镇痛作用的实验研究[J].中国现代应用药学杂志,2006,23(2):100-102.
[7] Bo Liang,Bao-Lin Li,Fu-Jun Ma,et al.Essential Oils Composition of Libanotis buchtormensis from Taibai Mountain in
China[J].Chemistry of Natural Compounds,2007,46(6):730-732.
[8] Xie X F,Cai X Q,Zhu S Y,et al.Chemical Composition and Antimicrobial Activity of Essential Oils of Chaenomeles
Speciosa from China[J].Food Chemistry,2007,100:1312-1315.
(责任编辑:张国春)
The Study of the Antimicrobial Activities
of Essential Oil in Flowers and Fruits of
Libanotis buchtormensis (Fish) DC.
LIANG Bo1, LI Bao-lin2
(1.Hezuo Minorities Teachers College, Hezuo,Gansu 747000;
2.School of Chemistry and Materials Science, Shaanxi Normal University, Xian, Shaanxi 710062)
Abstract:To study the antimicrobial activities of the essential oils in flowers and fruits from Libanotis
buchtormensis (Fish) DC,two essential oils in flowers and fruits from L. buchtormensis were extracted by
steam-stilling, and antimicrobial activities of the essential oils were evaluated against 8 microorganisms by
minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) methods. The
results showed that the MIC and MBC of 8 microorganisms were higher than expected. The essential oils
showed a weak antimicrobial activity to elected 8 microorganisms, and the other activities of two essential
oils should be researched in the future.Moreover,antimicrobial activities of the essential oil were evaluated
against 8 microorganisms by MIC and MBC methods.
Key words: Libanotis buchtormensis (Fish) DC; essential oil; the antimicrobial effect; MIC; MBC
第 5期 49梁 波,李宝林:长春七花和果实挥发油的抗菌活性研究
色假丝酵母菌 85021株、肺炎球菌 32201株等 5种菌株有灭活作用;从长春七花的挥发油的体外抑
菌、抗菌活性测定的 MIC和 MBC值可以发现,长春七果实的挥发油对所选取的 8种菌株有较弱的杀
菌活性。从长春七果实挥发油体外抑菌、抗菌活性实验的 MIC和 MBC值可以发现,长春七果实挥发油
具有较弱的抗菌和杀菌活性,其药理活性还有待于进一步的研究。