全 文 ：水红花子对 2 /3肝切除 PH小鼠肝再生和骨髓细胞增殖的影响＊
杨军英 ,刘锋瑞
(河南师范大学生命科学学院 省部共建细胞分化调控重点实验室 ,新乡 　453007)
　　摘　要　目的:研究水红花子对部分肝切除小鼠骨髓细胞增殖的影响。 方法:参照文献方法制备小鼠 2/3肝切除模型。给
药 7d后处死动物 , 摘取肝脏 ,计算肝指数;分离小鼠骨髓细胞 , 流式细胞仪检测 DNA含量和细胞周期分布。结果:水红花子 3.6、 1.
8 g/kg使肝切除小鼠骨髓细胞 DNA含量降低 , 水红花子 3.6、1.8、0.9g/kg使模型鼠 G0/G1期细胞数量增加 , 而 G2/M和 S期细胞
减少 , 具有剂量依赖性。 PH后小鼠的体重增加缓慢 ,术后 7d时模型鼠的体重和残肝重量明显低于正常对照组。水红花子给药组
小鼠的体重和残肝重量明显低于正常对照组 ,但和模型组比较没有显著性差异。结论:水红花子抑制肝切除小鼠骨髓细胞的增殖。
　　关键词　水红花子;部分肝切除小鼠;骨髓细胞;DNA含量;细胞周期;肝指数
　　水红花子为蓼属(Polygonum)桃叶蓼组植物红蓼 Polygou-
numorientaleL.的干燥成熟果实 , 药理研究报道水红花子具有
抗肿瘤 、抑菌 、利尿作用 , 在肝硬化 [ 1] 、乙型肝炎 [ 2] 、原发性肝
癌 [ 3]等肝脏疾病的治疗中均有较好效果。肝脏具有强大的再
生能力 , 肝再生和肝脏疾病的发生 、发展 、修复密切相关。本实
验就水红花子对部分肝切除小鼠肝再生和骨髓细胞增殖的作
用进行研究。
1　材料与方法
1.1　试验药物　水红花子:河南省新乡市佐今明药业有限公
司。实验前制备成 l00%水煎液 , 4℃保存。
1.2　动物 　昆明种小鼠 , 雌雄各半 ,体重 18 ～ 22 g,河南师范
大学实验动物中心提供。在温度 21±2 ℃,相对湿度 60±10%
和光照时间 12 h/d(8:00-20:00)的条件下饲养。
1.3 　试剂 　淋巴细胞分离液:500上海试剂二厂;RPMI1640
培养液:Gebegol公司;小牛血清:湘雅医学院肿瘤研究所;碘化
丙锭(PI)、RNase、TritonX-100:Sigma公司。
1.4　 仪器 　流式细胞仪:Becton-Dickinson公司。
1.5　方法　按 Higgins等 [ 4]方法构建小鼠 2/3 肝切除模型
(partiallyhepatectomized, PH)。取小鼠 100只 , 随机取出雌雄各
10只作为正常对照组 , 其余 80只用乙醚麻醉后 , 75%酒精腹部
消毒 , 在无菌条件下从剑突下方约 1 ～ 2cm处沿腹中线向上开
腹至剑突 , 暴露肝脏 , 压迫小鼠肋骨两侧 , 把肝脏左叶和中叶
(约占全肝重的 68%)挤出腹腔外 , 沿蒂部结扎 , 从结扎处远端
切除肝叶 , 缝合切口。手术后随机分为 4组 ,分别为模型对照组
和水红花子 3.6、 1.8、0.9 g/kg组。自由饮水 、摄食。手术后 24
h开始 ig给药(正常和模型对照组给予等容量 NS), 剂量见表
1,共 7 d。末次给药前小鼠禁食 16 h, 称取体重。给药后 1 h,
脱颈处死小鼠 , 摘取肝脏 , 精密称重 , 计算肝指数。参照文献方
法 [ 5]无菌操作取小鼠双侧股骨制成单细胞悬液。用淋巴细胞
分离液分离出单个核细胞 , 用完全 1640培养液将细胞浓度调
至 105 /ml左右 , -20℃的 70%乙醇固定 ,含 RNase的 PI混合染
液染色 , 流式细胞仪检测。
2　结果
2.1　对小鼠肝再生的影响　PH后 , 小鼠体重明显降低 , 在手
术后 7d时没有恢复到正常水平。水红花子给药 7d后 , 各剂量
组的体重仍然低于正常对照组(p<0.01), 但和模型对照组没
有明显差异。小鼠 2/3 肝切除后尾状叶和蒂状叶增长相对缓
慢 ,略慢于整体再生肝生长速度。而右叶增长较快 , 与整体再生
肝的变化一致。给药后 7 d, 小鼠残肝重量明显低于正常对照
组的肝脏(正常肝脏), 和模型组对比没有显著性差异。而且水
红花子对肝指数的影响与性别有关 , 大剂量组雄鼠的肝指数明
显高于模型组 ,而给药组雌鼠的肝指数低于模型组 , 见表 1, 2。
　　表 1　水红花子对 PH小鼠 7d残肝重量的影响( x±s, n=20)
组 别 剂量 (g/kg) 体重 (g)　 残肝重量 (g)　
正常对照 27.12 ±2.08 1.65 ±0.25
模型对照 22.98 ±3.02## 1.06 ±0.15##
水红花子 3.6 24.56 ±2 .33# 1.16 ±0.26##
水红花子 1.8 24.11 ±2.65## 1.12 ±1.18
水红花子 0.9 23.81 ±1.84## 1.01 ±0.15##
　　与正常对照组比较 ##p<0.01(下同)
　　表 2　水红花子对 PH小鼠 7d后肝指数的影响( x±s)
组 别 剂量(g/kg)
肝指数
雌鼠(n=10) 雄鼠(n=10)
模型对照组 48.16 ±5.84 44.50 ±1.72
水红花子组 3.6 42.91 ±3.05＊ 53.86 ±2.56＊＊
水红花子组 1.8 44.85 ±6.61 44.99 ±6.08
水红花子组 0.9 41.70 ±4.98＊ 44.34 ±2.34
　　与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01(下同)
2.2 　对小鼠骨髓细胞相对 DNA含量的影响　PH后 , 小鼠骨
髓细胞 DNA含量降低。水红花子能明显降低 PH小鼠骨髓细
胞 DNA含量 ,见表 3。
　　表 3　水红花子对PH小鼠骨髓细胞相对 DNA含量的影响( x±s,
n=20)
组别 剂量(g/kg)
DNA含量
G1　　 G2　　
正常对照 45.99 ±4.68＊＊ 91.37 ±8.71＊＊
模型对照 37.35 ±2.70 74.76 ±5.13
水红花子 3.6 32.27 ±3.01＊ 64.53 ±6.02＊＊
水红花子 1.8 34.30 ±1.72＊ 68.68 ±3.40＊
水红花子 0.9 34.87 ±4.48 69.61 ±8.75
89中药药理与临床 2010;26(5)
＊ 基金项目:河南省自然科学研究计划项目(2008A180013);河南师范大学科研启动项目(0714);河南省科技攻关项目(082102310105);
　　河南省基础与前沿项目(082300453201)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2010.05.046
2.3　 水红花子对小鼠骨髓细胞周期的影响　PH后 , 小鼠骨髓
细胞周期发生了明显变化 , G0/G1期细胞减少 , G2/M期细胞增
加。给药 7d后 , G0/G1期细胞明显增多 , G2/M期和 S期细胞
减少 , 水红花子大剂量对 G0/G1期的作用明显强于中 、小剂量
组 , 见表 4, 图 1。
　　表 4　水红花子对 PH小鼠骨髓细胞周期的影响( x±s, n=20)
组别 剂量(g/kg) G0 /G1 %　 G2/M%　 S%　　 G2 /M+S%　
正常对照 73.05 ±4.62＊ 4.69±0.55＊＊ 22.27±4.15 26.96±4.62＊
模型对照 67.14 ±2.94 7.23±0.61 25.63±2.42 32.86±2.94
水红花子 3.6 81.25 ±6.19＊＊ 4.66±1.35＊＊ 19.73±3.55＊＊ 24.39±4.35＊＊
水红花子 1.8 75.94 ±3.06＊＊ 4.61±1.16＊＊ 19.45±2.90＊＊ 24.06±3.06＊＊
水红花子 0.9 75.61 ±4.35＊＊ 2.51±1.69＊＊ 16.23±4.58＊＊ 18.74±6.18＊＊
图 1　水红花子对 PH小鼠骨髓细胞周期的影响(A.正常对照组 , B.模型对照组 , C.水红花子组 0.9g/kg)
3　讨论
　　1933年 Higgins创建了部分肝叶切除动物模型:结扎切除
肝脏左叶 、中叶 , 切除肝量约占总肝量的 60 % ～ 70 %。 PH的
优点较多:手术过程中仅需在剑突下方纵切 1 ～ 2 cm, 手术创面
小不易发生感染 [ 6];肝脏分叶完全 ,各肝叶之间仅以血管 、胆管 、
结缔组织相连 , 连接面小 ,结扎切除后不易出现胆瘘 [ 7];同时不
会诱发肝衰 [ 8] , 接近正常生理状态下的肝再生。所以 2/3肝切
除至今仍是肝脏再生研究使用最广泛的模型 [ 9] 。本实验把大鼠
PH方法用于小鼠 ,以降低实验成本。
　　水红花子在肝脏疾病治疗方面的应用日益引起了人们的关
注。近年来研究证实 , 水红花子的抗氧化作用 [ 10, 11] 、对免疫性
肝损伤的保护作用 [ 12]等在保肝护肝方面发挥了重要作用。
　　肝脏疾病的发生 、发展和修复过程中 , 都伴随着肝再生。 骨
髓细胞是机体造血系统的重要组成部分 , 由于造血细胞是一个
增殖活跃的细胞群 , 故对辐射 、药物 、毒素等很敏感。骨髓细胞
的增殖对疾病的恢复 、治疗非常重要。 DNA复制和细胞分裂是
细胞增殖的基本事件 。细胞 DNA含量的高低反映其增殖活性。
DNA含量增加 , 细胞增殖分裂旺盛 , 反之 , 细胞分裂增殖被抑
制。 PH手术损伤和水红花子均能引起小鼠骨髓细胞 DNA含量
降低 , 表明水红花子能够抑制小鼠骨髓细胞的增殖。对每种细
胞来说 , 细胞周期的时间范围是相对恒定的 , 每个阶段的细胞数
目也是基本稳定的。 但在毒物 、手术 、药物等刺激下 , 细胞周期
分布会发生变化。通常把 G2/M和 S期合在一起反映细胞的增
殖。实验表明 , PH手术损伤刺激骨髓细胞的增殖 , 使 G2/M和
S期细胞明显增加 ,但水红花子使细胞阻滞在 G0/G1期 , 从而
抑制骨髓细胞的分裂增殖。同时 ,我们通过实验发现 , PH后小
鼠体重明显降低 , 且增加缓慢 , 在手术后 7d时体重和残肝重量
明显低于正常对照组 ,但和模型组相比没有显著差异。 因此 , 在
临床实际应用中 , 水红花子的骨髓抑制作用和在疾病修复过程
中对肝脏再生的影响应该引起重视。是否通过药物配伍可以避
免骨髓抑制作用 ,需要进一步研究。
参考文献
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90 中药药理与临床 2010;26(5)
EffectsoffructusPolygoniorentalisoncelproliferationofbonemarrowcelsinpartialyhepatectomizedmice
YangJunying, LiuFengrui
(ColegeofLifeSciences, Co-constructionKeyLaboratoryforCelDifferentiationRegulation, HenanNormalUniversity, Xinxiang453007)
　　Objective:ToexploretheefectoffructusPolygoniorentalis(水红花子)onDNAcontentandcellcycleofbonemarrowcelsinpartial-
lyhepatectomized(PH)mice.Methods:HealthyandPHmicewhichweresubjecttoPHweredividedinto5groups:NSgroup, controlgroup
andfructusPolygoniorentalisgroups, respectively, thenweretreatedigwith0.9% NaCl, andfructusPolygoniorentalis3.6, 1.8, 0.9g/kg
daily, respectively.Sacrificemiceandremovetheliversforcalculatingindexofliver, bonemarrowcelswereisolatedanddetectedbyflow
cytometer(FCM)after7 daysadministration.Results:DNAcontentwasdecreasedbyfructusPolygoniorentalis(P<0.01), theproportionof
G0/G1 phasewereincreased, andG2/MandSphaseweredecreased(P<0.01).Bodyweight(BW)ofmiceaddedslowlyafterPH7 days,
andtheweightofresidualliverlowerthanthatofNSgroup.BWoffructuspolygoniorentalis0.9 g/kgobviouslydecreased, andindexofliver
offructusPolygoniorentalis3.6 g/kgmalemicehigherthanthatofcontrolgroup(p<0.05).Conclusion:FructusPolygoniorentaliscould
inhibittheproliferationofbonemarrowcelsinPHmice.
Keywords　 fructusPolygoniorentalis(水红花子);hepatectomizedmice;bonemarrowcells;DNAcontent;cellcycle;liveindex
大黄水煎液治疗慢性肾功能衰竭的实验研究＊
王　平 ,李春雨 ,沈晓飞 ,邱一行 ,王家葵 ,孟宪丽＊＊
(成都中医药大学 ,成都　611730)
　　摘　要　目的:观察大黄水煎液对慢性肾功能衰竭大鼠的影响 ,为其临床应用提供科学依据。方法:建立大鼠腺嘌呤慢性肾
功能衰竭模型 , 灌胃给予大黄水煎液进行干预治疗 , 检测相关生理 、生化学指标。结果:大黄水煎液可降低慢性肾功能衰竭大鼠血
清肌酐 、尿素氮水平 ,改善肾性贫血症状 ,纠正钙 、磷 、镁等电解质代谢紊乱 , 纠正酸中毒 , 改善机体蛋白质代谢的紊乱状态 , 对肾脏
代偿性增生有一定的保护作用。结论:大黄水煎液可改善肾功能 , 能延缓慢性肾功能衰竭病情的发展 ,对大鼠慢性肾功能衰竭有一
定的治疗作用。
　　关键词　大黄水煎液;慢性肾功能衰竭
　　慢性肾功能衰竭(CRF)是各种原因引起的肾脏疾病持续进
展的最终结局 , 是一种进行性的 、不可逆的临床综合征。其临床
症状复杂 , 死亡率高。透析和肾脏移植是治疗该病的重要手段。
但存在费用高 、肾源不足以及各种并发症的问题 , 因此 , CRF的
非透析疗法为国内外医学专家所重视。中药大黄及其复方制
剂在临床上已广泛应用于 CRF的治疗 [ 1] ,它对延缓慢性肾功能
衰竭病情的发展有确切的临床疗效 [ 2, 3] ,是治疗 CRF的最有效
药物之一。本研究复制了大鼠腺嘌呤慢性肾功能衰竭模型 ,为
进一步作用机理研究和临床应用提供科学依据。
1 　材料和方法
1.1　试验药物　大黄饮片 , 四川省中药饮片有限责任公司 ,批
号:080901, 经成都中医药大学卢先明教授鉴定为药用大黄
RheumoficinaleBail.的干燥根及根茎。大黄水煎液制备:大黄
饮片 500g,加水 5000ml,浸泡 30min, 煎煮 3次 , 合并 3次滤液 ,
减压浓缩至 500ml,即浓度为 1g/ml。本研究利用 HPLC法测定
了大黄水煎液中游离型蒽醌中的芦荟大黄素 、大黄酸 、大黄素 、
大黄酚和大黄素甲醚的含量 , 以期为药效学研究提供质量可控
的受试药物 ,测定结果芦荟大黄素 10.76、大黄酸 4.00、大黄素
1.38、大黄酚 1.93、大黄素甲醚 0.55、‰, 总含量 18.62%。尿毒
清颗粒(无糖型), 康臣药业有限责任公司 , 批号:20020715。
1.2　动物　SPF级 SD大鼠 ,雄性 ,体重 300±50g, 由四川省医
学科学院实验动物研究所提供 ,合格证号:SCXK(川)2004-15。
1.3　试剂　腺嘌呤 , 美国 Amresco公司生产 , 北京夏斯生物技
术有限公司分装 ,批号:3536B037;尿蛋白定量试剂盒:南京建成
生物技术有限公司 ,批号:20081102。
1.4　仪器　LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津分析仪器
公司);RocheModular-ISE900-P800型全自动生化分析仪 (德
国);日本光电 MEK-6318K全自动血球分析仪(日本)。
1.5　方法　　大鼠购回后适应性饲养 1周 ,选取尿蛋白定性检
查为阴性者 ,分为空白对照组 、模型对照组 、阳性对照组 、大黄
高 、中 、低剂量组 ,每组 16只。实验时间为 36天 , 前 21天造模 ,
各组大鼠每天空腹灌胃给予腺嘌呤蒸馏水混悬液 1次(临用前
现配制),腺嘌呤剂量为 250mg/kg或 200mg/kg, 逐渐诱发大鼠
CRF, 空白对照组大鼠灌胃给予等容积蒸馏水 , 给药容积为
91中药药理与临床 2010;26(5)
＊ 课题来源:国家中医药管理局中医药科学技术研究专项(NO.06-07JP38)　　　　＊＊通讯作者