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(2016-01-04 收稿 2016-02-14 修回)
通讯作者:邹瑞 Tel:(027)87705226 E-mail:313340694@ qq． com
气相色谱法测定蚕砂提取物中有机溶剂残留量
周伟 邹瑞 (湖北省食品药品监督检验研究院 武汉 430075)
摘 要 目的:建立测定蚕砂提取物中有机溶剂残留量的气相色谱法。方法:采用顶空进样气相色谱法，色谱柱:DB-5MS石
英毛细管色谱柱(30 m × 0． 25 mm ×0． 25 μm) ;载气:氮气;流速:0． 6 ml·min －1;进样口温度:200℃;检测器类型及温度:氢焰
离子化检测器(FID) ，250℃;柱升温程序:40℃保持 10 min，然后以 5 ℃·min －1的速度升至 200℃，保持 5 min;顶空条件:平衡
温度:95℃;平衡时间:30 min;传输管温度:110℃;进样环温度:125℃。结果:丙酮，2，3-二甲基戊烷，3-甲基己烷，正庚烷，2，
2-二甲基己烷，对二甲苯，间二甲苯，邻二甲苯，2，4，6-三甲基吡啶的线性范围分别为:101 ～ 3 034 μg·ml －1，100 ～ 2 995 μg·
ml －1，107 ～ 3 197 μg·ml －1，101 ～ 3 019 μg·ml －1，99 ～ 2 962 μg·ml －1，45 ～ 1 358 μg·ml －1，44 ～ 1 325 μg·ml －1，47 ～ 1 411
μg·ml －1和 104 ～ 3 130 μg·ml －1，r值均在0． 992以上，回收率符合要求，空白溶剂对样品的测定没有影响，8 批样品检验均符
合限度要求。结论:顶空进样气相色谱法测定蚕砂提取物中有机溶剂，方法简单，结果准确。
关键词 顶空进样气相色谱法;有机溶剂残留;蚕砂提取物
中图分类号:Ｒ927． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2016)06-1211-04
Determination of Ｒesidual Solvents in Faeces Bombycis Extract by GC
Zhou Wei，Zou Ｒui (Hubei Province Food and Drug Supervision and Inspection Institute，Wuhan 430075，China)
ABSTＲACT Objective:To establish a method for the determination of solvent residues in faeces bombycis extract by GC． Meth-
ods:A GC-headspace injection method was adopted to detect the residual organic solvents in the extract of faeces bombycis． A DB-
5MS (30 m × 0． 25 mm ×0． 25 μm)quartz capillary column was used as the chromatographic column;nitrogen was used as the carrier
gas at a flow rate of 0． 6 ml·min －1;the injector temperature was 200℃;the detector was a flame ionization detector (FID)with the
temperature of 250℃;the temperature program included two phases:the initial temperature was set at 40℃ for 10 min，and then risen
to 200℃ at a rate of 5℃·min －1 and maintained for 5 min;the equilibrium temperature of headspace was 95℃;the equilibrium time
was 30 min;the capillary temperature was 110℃;the injection ring temperature was 125℃ ． Ｒesults:The linear range of acetone，2，
3-dimethylpentane，3-methylhexane，heptane，2，2-dimethylhexane，p-xylene，m-xylene，O-xylene and 2，4，6-collidine was 101-3 034
μg·ml －1，100-2 995 μg·ml －1，107-3 197 μg·ml －1，101-3 019 μg·ml －1，99-2 962 μg·ml －1，45-1 358 μg·ml －1，44-1 325
μg·ml －1，47-1 411 μg·ml －1 and 104-3 130 μg·ml －1，respectively，and the average r was all above 0． 992． The recovery of the
method met the requirement，and the blank solvent showed no interference． Eight samples were all accordance with the requirements
after the examination． Conclusion:The headspace injection method for the determination of residual organic solvents in the extract of
faeces bombycis is simple and reliable．
KEY WOＲDS Gas chromatography-headspace injection method;Ｒesidual organic solvent; Faeces bombycis extract
蚕砂系传统中药，很多中医古籍，如《本草拾遗》、《内经 拾遗方论》等均载蚕砂治疗“冷血，瘀血”，“血虚不能养经络
1121
中国药师 2016 年第 19 卷第 6 期 China Pharmacist 2016，Vol． 19 No． 06
者”。中国药典和《中药大辞典》均记载:蚕砂性温，味甘辛，
入肝脾经，具有清热祛风，利湿化浊，活血通络，镇静安神等
功效。故能养血化瘀、补气健脾，是一味治疗贫血的良药。
经过多年研究，以现代科技手段，将蚕砂经浸提-溶解皂化-
抽提-酸析-洗涤-铁代络合-精制成铁叶绿酸钠，以此为原料
研制治疗缺铁性贫血的新药生血宁片［1，2］。蚕砂提取物为
蚕砂经丙酮，溶剂汽油等提取制得，汽油主要成分为烷烃类
化合物及部分芳香族化合物，为保证药品使用的安全性，本
文建立对蚕砂提取物中可能残留的有机溶剂的检测方法，报
道如下。
1 仪器与试药
Agilent 7890A气相色谱仪(FID 检测器) ;Agilent 7694E
型自动顶空进样器;Agilent 7890A-5975C GC /MS 气相色谱-
质谱联用仪;梅特勒-托利多 MS204S /Z 电子天平;正庚烷
(分析纯，天津市科密欧化学试剂开发中心，批号:
20140110) ;丙酮(分析纯，天津市博迪化工有限公司，批号:
2014 /11 /02) ;2，3-二甲基戊烷对照品(＞ 99． 5%，D-86199
Augsburg，Germany，批号:130209) ;2，2-二甲基己烷对照品
(东京化成工业株式会社，批号:13110528) ;2，4，6-三甲基吡
啶对照品(＞ 98%，梯希化成工业发展有限公司，批号:
20140201) ;邻二甲苯，间二甲苯，对二甲苯对照品(＞
99． 5%，化学纯，天津市光复精细化工，批号分别为
20140412、20131127、20140502) ;3-甲基己烷对照品(东京化
成工业株式会社，批号:14071839) ;色谱用水为 Millipore 制
备超纯水;蚕砂提取物样品为武汉联合药业有限责任公司提
供 (批 号 为 20130301、20130302、20130303、20130203、
20131001、20131101、20131102、20131201)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适应性
色谱柱:DB-5MS石英毛细管色谱柱(30 m × 0． 25 mm ×
0． 25 μm) ;载气:氮气;流速:0． 6 ml·min －1;进样口温度:
200℃;检测器类型及温度:氢焰离子化检测器(FID) ，
250℃;柱升温程序:40℃保持 10 min，然后以 5 ℃·min －1的
速度升至 200℃，保持 5 min;顶空条件:平衡温度:95℃;平
衡时间:30 min;传输管温度:110℃;进样环温度:125℃;进
样量 1 ml。
在上述色谱条件下，分别对丙酮，2，3-二甲基戊烷，3-甲
基己烷，正庚烷，2，2-二甲基己烷，邻二甲苯，对二甲苯，间二
甲苯，2，4，6-三甲基吡啶等 9 种对照品溶液以及混合对照品
溶液依次进样测定，色谱图见图 1。9 种溶剂理论塔板数均
高于 10 000，除对二甲苯和间二甲苯分离度不佳外，其余 7
种溶剂的分离度均高于1． 5。
2． 2 溶液的配制
2． 2． 1 对照品储备液 分别称取丙酮252． 8 mg，2，3-二甲
基戊烷249． 6 mg，3-甲基己烷266． 4 mg，正庚烷251． 6 mg，2，
2-二甲基己烷 246． 8 mg，对二甲苯 113． 2 mg，间二甲苯
110． 4 mg，邻二甲苯117． 6 mg，2，4，6-三甲基吡啶260． 8 mg，
置于 25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备
液。
A．对照品 B．供试品 1．丙酮 2． 2，3-二甲基戊烷
3． 3-甲基己烷 4．正庚烷 5． 2，2-二甲基己烷 6．对二甲苯
7．间二甲苯 8．邻二甲苯 9． 2，4，6-三甲基吡啶
图 1 GC色谱图
2． 2． 2 混合对照品溶液 精密量取2． 2． 1中的对照品储备
液 5 ml，置于 100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得混
合对照品溶液，对照品浓度分别为:丙酮0． 505 6 mg·ml －1，
2，3-二甲基戊烷0． 499 2 mg·ml －1，3-甲基己烷0． 532 8mg·
ml －1，正庚烷0． 503 2 mg·ml －1，2，2-二甲基己烷0． 493 6 mg
·ml －1，对二甲苯0． 226 4 mg·ml －1，间二甲苯0． 220 8 mg·
ml －1，邻二甲苯 0． 235 2 mg· ml －1，2，4，6-三甲基吡啶
0． 521 6 mg·ml －1。精密量取 5 ml，置顶空瓶中，密封，作为
对照品溶液。
2． 2． 3 供试品溶液 取样品约0． 5 g，精密称定，置顶空瓶
中，精密加水 5 ml，摇匀，密封，超声(功率 250 W，频率 40
kHz)处理 3 min，放冷，作为供试品溶液。
2． 3 气相色谱-质谱联用对残留溶剂结构的确证
2． 3． 1 质谱条件 色谱柱:DB-5MS 石英毛细管色谱柱(30
m × 0． 25 mm ×0． 25 μm) ;载气为高纯度氦气(He) ;流速0． 6
ml·min －1;顶空进样条件及程序升温同2． 1;EI 源 70 eV;四
极杆温度:150℃;离子源温度:230℃;脉冲分流比:10 ∶ 1;辅
助加热器温度:250℃;总分析时间:45 mim;溶剂延迟:
3． 5 min;质量数扫描范围 30 ～ 150(全扫描)。
2． 3． 2 样品中残留溶剂的定性分析结果 取供试品溶液，
按上述条件进行质谱检测，根据 GC-MS 所得的色谱保留时
间和质谱，应用 NIST库中标准谱图进行对照分析确认样品
中的溶剂峰，分别为丙酮，2，3-二甲基戊烷，3-甲基己烷，正
庚烷，2，2-二甲基己烷，间二甲苯，2，4，6-三甲基吡啶。MS质
谱图鉴定的结果与 GC保留一致，各色谱峰得到进一步的确
认，增加了确定各色谱峰归属的可靠性。溶剂峰的保留时间
和特征离子见表 1。
2． 4 空白溶剂试验
量取水 5 ml，按“2． 1”方法顶空进样，结果无干扰峰，表
明空白溶剂对测定无干扰。
2121
www． zgys． org 研究报告
表 1 溶剂的保留时间和特征离子
溶剂 保留时间(min) 特征离子(m/z)
丙酮 3． 89 43，58
2，3-二甲基戊烷 6． 12 56，71，85，100
3-甲基己烷 6． 30 57，71，85，100
正庚烷 7． 24 57，71，100
2，2-二甲基己烷 8． 07 57，99，114
对二甲苯 19． 62 51，65，77，91，106
间二甲苯 19． 77 51，65，77，91，106
邻二甲苯 21． 15 51，65，77，91，106
2，4，6-三甲基吡啶 26． 32 51，79，106，121
注:8 批样品中仅 1 批检出间二甲苯，对 /邻二甲苯信息为供试品
中加入一定量对照品所得。
2． 5 线性关系和检测限、定量限的考察
分别精密量取“2． 2． 1”中的 9 种对照品储备液0． 2，0． 5，
1，2，4，6 ml，置于 20 ml量瓶中，分别加水稀释至刻度，摇匀，
制得系列浓度的对照品溶液，分别精密量取 5 ml，置顶空瓶
中，密封，按2． 1方法测定。将各对照品溶液逐步稀释至一定
浓度进样，并以信噪比等于 3，信噪比等于 10 时分别计算各
溶剂的检测限和定量限，结果见表 2。
表 2 线性关系和检测限(S /N =3)、定量限(S /N =10)考察结果
溶剂 线性范围(μg·ml －1) 线性方程 r 检测限(μg·ml －1) 定量限(μg·ml －1)
丙酮 101 ～ 3034 Y = 0． 435X － 7． 472 0． 9992 0． 5 2． 1
2，3-二甲基戊烷 100 ～ 2995 Y = 0． 055 X － 12． 515 0． 9918 8． 4 30． 7
3-甲基己烷 107 ～ 3197 Y = 0． 034 X + 0． 451 0． 9936 8． 2 29． 9
正庚烷 101 ～ 3019 Y = 0． 0143 X + 1． 657 0． 9963 10． 5 43． 8
2，2-二甲基己烷 99 ～ 2962 Y = 0． 046 X － 0． 629 0． 9944 50． 3 158． 7
对二甲苯 45 ～ 1358 Y = 0． 331 X － 3． 517 0． 9997 9． 4 33． 5
间二甲苯 44 ～ 1325 Y = 0． 319 X － 2． 968 0． 9992 9． 3 32． 1
邻二甲苯 47 ～ 1411 Y = 0． 202 X － 1． 8061 0． 9993 9． 4 36． 1
2，4，6-三甲基吡啶 104 ～ 3130 Y = 0． 613 X － 4． 831 0． 9983 1． 5 5． 9
表 5 样品测定结果［%(g·g －1)，n =2］
批号 丙酮 2，3-二甲基戊烷 3-甲基己烷 正庚烷 2，2-二甲基己烷 邻二甲苯 间二甲苯 对二甲苯 2，4，6-三甲基吡啶
20130301 0． 012 0． 122 0． 253 0． 084 0． 055 － 未检出 － 0． 006
20130302 0． 014 0． 175 0． 338 0． 097 0． 060 － 未检出 － 0． 006
20130303 0． 009 0． 061 0． 124 0． 048 0． 029 － 未检出 － 0． 004
20130203 0． 013 0． 089 0． 155 0． 039 0． 027 － 未检出 － 0． 004
20131101 0． 024 0． 063 0． 148 0． 094 0． 062 － 未检出 － 0． 008
20131102 0． 027 0． 065 0． 225 0． 051 0． 051 － 未检出 － 0． 008
20131201 0． 026 0． 061 0． 244 0． 037 0． 044 － 0． 066 － 0． 006
20131001 0． 019 0． 078 0． 159 0． 082 0． 038 － 未检出 － 0． 007
注:“ －”为未检出。
2． 6 重复性试验
分别精密称取同一批号(20130302)的样品 6 份，按供试
品溶液制备方法制备，进行测定，结果见表 3。
表 3 重复性试验结果(n =6)
溶剂 平均含量(%) ＲSD(%)
丙酮 0． 015 3． 26
2，3-二甲基戊烷 0． 173 2． 45
3-甲基己烷 0． 340 2． 57
正庚烷 0． 093 3． 03
2，2-二甲基己烷 0． 061 3． 71
邻二甲苯 － －
间二甲苯 － －
对二甲苯 － －
2，4，6-三甲基吡啶 － 2． 68
注:“ －”为未检出。
2． 7 回收率试验
分别称取已知含量的供试品(批号 20130302)0． 5 g，共
6 份，精密称定，各精密加入含丙酮0． 513 mg·ml －1，2，3-二
甲基戊烷0． 487 mg·ml －1，3-甲基己烷0． 507 mg·ml －1，正庚
烷0． 485 mg·ml －1，2，2-二甲基己烷0． 484 mg·ml －1，二甲苯
0． 258 mg·ml －1，2，4，6-三甲基吡啶0． 498 mg·ml －1的混合
对照溶液 5 ml，置顶空瓶中，密封，测定并计算样品中上述溶
剂的回收率，结果见表 4。
表 4 回收率试验结果(n =6)
溶剂 平均回收率(%) ＲSD(%)
丙酮 98． 07 1． 64
2，3-二甲基戊烷 96． 08 2． 35
3-甲基己烷 96． 49 2． 26
正庚烷 96． 47 2． 50
2，2-二甲基己烷 96． 86 2． 69
邻二甲苯 95． 16 2． 41
间二甲苯 95． 27 2． 65
对二甲苯 96． 49 1． 93
2，4，6-三甲基吡啶 95． 81 3． 21
2． 8 样品测定
取样品 8 批，取样量0． 5 g，精密称定，按2． 2． 3供试品溶
液制备方法制备，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各 5
ml，进行测定，测定结果见表 5。参考 ICH 及中国药典 2015
年版四部对溶剂分类及限度的规定，二甲苯为第二类溶剂，
含量不得过0． 217%，其余 6 种为第三类溶剂，含量不得过
0． 5%［3，4］，8 批样品中残留溶剂均未超过规定限度。
3121
中国药师 2016 年第 19 卷第 6 期 China Pharmacist 2016，Vol． 19 No． 06
通讯作者:沈定文 Tel: (0715)8151258 E-mail:
櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊
sdw660124@ 163． com
3 讨论
3． 1 顶空平衡条件的选择 以 3-甲基己烷，2，4，6-三甲基
吡啶为参考，比较不同平衡时间和不同平衡温度条件下的峰
面积，结果平衡温度为 95℃，平衡时间为 30 min，溶剂响应
值较高，故选择文中的顶空平衡条件进行试验。
3． 2 检测器的选择 目前有机溶剂残留检测一般采用气相
色谱法，检测器主要有氢焰离子化检测器(FID)和质谱检测
器(MS) ，大部分实验室配备的为 FID，因此本方法采用 FID
检测器，质谱检测器主要对样品残留溶剂结构进行确认。如
果检测结果接近或超过规定限度值，建议有必要采用 GC-MS
方法对残留溶剂进一步定性以作参考。
参 考 文 献
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4 中国药典［S］． 2015 年版．四部． 105
(2016-01-20 收稿 2016-03-01 修回)
HPLC法测定复方维生素 B6凝胶剂中维生素 B6与醋酸氟轻松
的含量
纪万里 要辉 沈定文 (湖北科技学院药学院 湖北咸宁 437000)
摘 要 目的:建立复方维生素 B6凝胶剂中维生素 B6与醋酸氟轻松的含量测定方法。方法:采用 HPLC 法，色谱柱:Lichro-
spher CN C18柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相:庚烷磺酸钠溶液(称取6． 8 g磷酸二氢钾和1． 0 g庚烷磺酸钠，加水溶解并稀
释至 1 000 ml)-甲醇-三乙胺(35∶ 65∶ 0． 2) ，用磷酸调 pH至3． 2;检测波长:238 nm;柱温:25℃;进样量:20 μl。结果:维生素
B6在15． 0 ～ 300． 0 μg·ml
－1浓度范围内线性关系良好(r = 1． 0000) ，平均回收率为99． 65%，ＲSD 为0． 3%(n = 9) ;醋酸氟轻松
在0． 4 ～ 8． 0 μg·ml －1浓度范围内线性关系良好(r = 0． 999 0) ，平均回收率为99． 35%，ＲSD为0． 85%(n = 9)。结论:该方法简
便，重复性好，测定的结果准确，可用于复方维生素 B6凝胶剂的含量测定。
关键词 维生素 B6;醋酸氟轻松;高效液相色谱法;凝胶剂
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2016)06-1214-03
Determination of Vitamin B6 and Fluocinonide in Compound Vitamin B6Gel by HPLC
Ji Wanli，Yao Hui，Shen Dingwen (College of Pharmacy，Hubei University of Science and Technology，Hubei Xianning 437000，Chi-
na)
ABSTＲACT Objective:To establish a method to determine vitamin B6 and fluocinonide in compound vitamin B6gel． Methods:The
contents of vitamin B6 and fluocinonide in the gel were determined by HPLC with a Lichrospher CN C18 column (250 mm ×4． 6 mm，5
μm)． The mobile phase was heptane sulfonate solution (adding 6． 8 g potassium phosphate monobasic and 1． 0 g heptane sulfonate into
1000 ml water)-methanol – triethylamine (35:65:0． 2，adjusting pH to 3． 2 with phosphoric acid)． The detection wavelength was
238 nm and the column temperature was 25℃ ． The injection volume was 20 μl． Ｒesults:Vitamin B6 had a good linear relationship
within the range of 15． 0-300． 0 μg·ml －1(r = 1． 000 0) ，and the average recovery was 99． 65% (ＲSD = 0． 3，n = 9)． Fluocinonide
had a good linear relationship within the range of 0． 4-8． 0 μg·ml －1(r = 0． 9990) ，and the average recovery was 99． 35% (ＲSD =
0． 85，n = 9)． Conclusion:The method is simple and reproducible，and the result is accurate． The method can be used for the deter-
mination of the gel
KEY WOＲDS Vitamin B6;Fluocinonide;HPLC;Gels
维生素 B6被广泛应用于冻疮、皮肤红肿、干燥皱裂、脂
溢性皮炎、舌炎等皮肤病的治疗，在体内主要以与蛋白质结
合的形式存在，包括吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺 3 种形式［1］。若
体内缺乏维生素 B6，就会出现糙皮病
［2］，但若单纯补充维生
素 B6，皮肤炎症仍可蔓延，不受控制。糖皮质激素类药物，
如醋酸氟轻松，具有抗炎、抗过敏作用，能抑制结缔组织增
生，降低毛细血管和细胞膜的通透性，减少炎性渗出，抑制组
胺及其他炎症介质的形成和释放，具有治疗特性皮炎的功
效［3］。目前，临床上醋酸氟轻松与维生素 B6的联合应用主
要用于治疗接触性皮炎、脂溢性皮炎、神经性皮炎、慢性湿疹
等皮肤疾病，还有报道用于治疗小儿红臀方面也获得了良好
效果［4］。本文将维生素 B6与醋酸氟轻松制成复方凝胶剂，
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