全 文 ：实验研究
顶空气相色谱法检测石茶感冒胶囊中的有机溶剂残留
何　雷1 , 2 ,崔　涛1 , 2 ,夏伟军1 , 2 ,丁中涛2＊
(1.云南省药物研究所 新药筛选研究中心 , 云南 昆明　650111;
2.云南大学化学科学与工程学院 ,云南 昆明　650091)
摘　要:目的　建立石茶感冒胶囊中可能残留的 7 种有机溶剂(正己烷 、苯 、甲苯 、对二甲苯 、邻二甲苯 、苯乙烯 、二
乙烯苯)的检测方法。方法　采用顶空气相色谱法 , 色谱柱为 Agilent H P-INNOWAX毛细管柱(30 m×1.0 mm ,
0.53 μm), 载气为高纯氮气;顶空温度为 70 ℃, 顶空时间 30 min;柱温自 30 ℃恒定 5 min , 以 10 ℃/ min 升温速率
升至 200 ℃,恒定 5 min;氢火焰离子检测器(FID),温度为 250 ℃。结果　7种有机溶剂残留物在所考察的浓度范
围内线性关系良好(r=0.999 4 ～ 0.999 8), 精密度 RSD 均小于 5.0%, 被测组分的平均回收率在 99.16% ～
102.0%之间。结论　该方法操作简便 、快速 、准确度高 , 可用于检测石茶感冒胶囊中的有机溶剂残留物。
关键词:石茶感冒胶囊;顶空气相色谱;有机溶剂残留;残留物测定
中图分类号:R927.11　　　文献标识码:A　　　文章编号:1674-5515(2009)06-0347-03
Determination of residual organic solvents in Shicha Ganmao Capsule
by gas chromatography with headspace sampling
HE Lei1 , 2 , CUI Tao1 , 2 , XIA Wei-jun1 , 2 , DING Zhong-tao2
(1.Natural Medicine Chemical Research Section , Yunnan Institute o f Materia Medica , Kunming 650111 , China;
2.School of Chemical Science and Technology , Yunnan Univer sity , Kunming 650091 , China)
Abstract:Objective　To establish a method for determination of the seven residual o rganic so lvents(n-
hexane , benzene , toluene , o-dimethy lbenzene , p-dimethy lbenzene , sty rene and diviny l benzene)in Shicha
Ganmao Capsule.Methods　Gas chromato graphy w ith headspace sampling w as applied to the study .Agi-
lent HP-INNOWAX silica capillary co lumn w as 30 m × 1.0 mm , 0.53 μm.The ini tial temperature w as
kept a t 30 ℃ fo r 5 min , then the temperature w as raised to 200 ℃ at the rate of 10 ℃/min and subsequent-
ly sustained fo r 5 min.FID detecto r temperature w as 250 ℃.The vial temperature w as 70 ℃, and the vial
time w as 30 min.Results　There w as a good lineari ty in the experimental concentration (r= 0.999 4 ～
0.999 8).The RSD was al l less than 5.0%.The average recovery rates w ere in the range of 99.16%～
102.0%.Conclusion　The analy tical method is simple , accurate and sensitive.
Key words:Shicha Ganmao Capsule;gas chromatog raphy wi th headspace sampling;residual o rganic
solv ent;determination of residues
　　石茶感冒胶囊(临床试验批号:2008L11136)是
根据传统中医药理论 ,利用云南民间使用历史较长 ,
预防 、治疗感冒疗效确切 ,无副作用 ,且资源丰富的
药材 ,通过现代技术制备的创新型民族民间复方药 ,
主要由黄芪 、石椒草 、千里光等组成。在该复方药材
的分离 、精制过程中 ,使用了大孔吸附树脂等分离材
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＊ 基金项目　云南省科技厅省科研院所技术开发研究专项(2003KFZX-28　　　　　　　　　　)　　　　　　　　　　　　
　作者简介　何　雷(1981-),男 ,分析化学专业硕士研究生 ,主要从事新药工艺和质量控制研究。
＊通讯作者　丁中涛(1968-),男,博士 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事天然活性物质的分离与分析研究。 E-mail:ztding@ynu.edu.cn
料和相应的有机溶剂 ,因此有必要对石茶感冒胶囊
提取物中可能残留的有机溶剂正己烷 、苯 、甲苯 、对
二甲苯 、邻二甲苯 、苯乙烯及二乙烯苯进行检测 ,以
控制产品质量 ,保证用药的安全性 。
　　顶空气相色谱法将液体或固体样品中的挥发性
组分通过顶空进样器直接导入气相色谱仪进行分离
和检测 ,免除了冗长 、烦琐的样品前处理过程 ,避免
有机溶剂带入的杂质对分析造成干扰 ,也减少了对
色谱柱及进样口的污染 。近几年该方法以其简单 、
实用的优点 ,在环境检测[ 1] 、药物中的溶剂残留检
测[ 2-3] 、包装材料[ 4]等领域得到了较广泛的应用。在
选择石茶感冒胶囊有机溶剂残留检测的样品时 ,考
虑到该复方挥发油的整个提取过程并未引入有机溶
剂 ,且在最后的制剂工艺中复方的挥发油也是与复
方提取物进行单独总混 ,因此最终选择了未加入挥
发油的胶囊提取物作为供试品 。这样便大大减少了
该复方中挥发性组分对整个测定过程的干扰 。
1　仪器与材料
1.1　仪器与试剂
Agilent 6890 Plus 型气相色谱仪 , Agilent
7694 E 型顶空自动进样器 , 氢火焰离子检测器
(FID),均为 A gilent Technologies公司生产。正己
烷 、邻二甲苯 、对二甲苯为色谱纯 ,其他试剂均为分
析纯 。所用水为重蒸水。
1.2　试药
石茶感冒胶囊样品由云南省药物研究所中试
基地提供 , 批 号分别为 20070101 、 20070102 、
20070103 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为 Agilent HP-INNOWAX 柱(30 m ×
1.0 mm , 0.53 μm);柱温:采用程序升温 ,自 30 ℃
恒定 5 min ,以 10 ℃/min升温速率升至 200 ℃,恒
定 5 min;进样口温度为 180 ℃;检测器温度为
250 ℃;载气为高纯氮气 ,体积流量为 3 mL/min;分
流比为 1∶20 。顶空条件:顶空温度为 70 ℃,顶空
时间 30 min ,进样量 1.0 mL 。
2.2　对照品溶液的制备
分别精密量取正己烷 、苯 、甲苯 、邻二甲苯 、对二
甲苯 、苯乙烯 、二乙烯苯各适量 ,加 N , N-二甲基甲
酰胺配制成每 1 mL 含苯 78.7 μg 、正己烷 797.9
μg 、甲苯 800.4 μg 、邻二甲苯 791.0 μg 、对二甲苯
791.0 μg 、苯乙烯 800.8 μg 、二乙烯苯 808.7 μg 的
对照品储备液。再精密量取 1 mL 对照品储备液置
100 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,精密量取 2
mL 置 10 mL 顶空进样瓶中 ,密封 。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取 20070102 批次的石茶感冒胶囊内容
物 600 mg ,置 10 mL 顶空瓶中 ,精密加入水 2.0
mL ,摇匀 ,密封 。
2.4　溶剂的选择
石茶感冒胶囊药材组分较多 ,化学成分复杂 ,因
此在溶剂的选择方面 ,考察了甲醇 、60%甲醇 、30%
甲醇 ,二甲基甲酰胺 (DMF)、60%DMF 、30%DMF
以及纯水。结果使用甲醇 、60%甲醇 、30%甲醇作为
溶剂 ,甲醇峰对正己烷峰影响很大 ,不能达到基线分
离;而 30%DMF 、60%DMF 、DMF 虽然对待测成分
未造成影响 ,但由于 DMF 的高沸点性质 ,使得对二
甲苯 、邻二甲苯 、苯乙烯 、二乙烯苯的线性关系随着
DMF 浓度的增高而变差 。在选定的色谱条件下 ,使
用纯水作为溶剂时 ,分离效果和溶解性均很理想。
结果见图 1。
2.5　线性关系考察
精密量取对照品储备液 0.1 、0.2 、0.4 、0.8 、1.6
mL ,分别置于 100 mL 量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀 ,
再分别精密量取 2 mL 置 10 mL 顶空进样瓶中 ,分
别进样 1.0 mL ,以对照品溶液浓度为横坐标(X),
峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归 ,结果见表 1。
表 1　石茶感冒胶囊供试品溶液中有机溶剂
线性关系考察结果
有机溶剂 回归方程 r 线性范围 /(μg·mL-1)
正己烷 Y =142.27 X-102.88 0.999 4 0.799 ～ 12.78
苯 Y =173.87 X-2.977 8 0.999 7 0.079 ～ 1.259
甲苯 Y =174.55 X-38.282 0.999 8 0.800 ～ 12.81
对二甲苯 Y =177.92 X-41.999 0.999 7 0.791 ～ 12.66
邻二甲苯 Y =172.76 X-26.712 0.999 7 0.791 ～ 12.65
苯乙烯 Y =153.00 X-9.004 1 0.999 7 0.800 ～ 12.81
二乙烯苯 Y =147.39 X+5.958 8 0.999 7 0.809 ～ 12.94
2.6　精密度试验
精密量取对照品溶液 2 mL 置 10 mL 顶空进样
瓶中 ,分别进样 1.0 mL ,重复进样 6次 ,测得正己
烷 、苯 、甲苯 、对二甲苯 、邻二甲苯 、苯乙烯 、二乙烯苯
对照品溶液峰面积的 RSD 分别为 3.505%、
4.297%、4.456%、4.724%、4.926%、4.471%、
4.659%,表明本法精密度高 。
2.7　最低检测限试验
将对照品溶液逐步稀释 ,直到检测峰高为基线
348 现代药物与临床　　Modern Pharmacy and Clinic　　2009 年第 24卷第 6期
噪声的 2 ～ 3倍为止 ,计算所测溶剂的最低检测限 ,
测得正己烷 、苯 、甲苯 、对二甲苯 、邻二甲苯 、苯乙烯 、
二乙烯苯对照品溶液的最低检测质量浓度分别为
79.9 、15.7 、79.1 、79.0 、80.0 、80.0 、81.0 ng/mL 。
2.8　回收率试验
精密称定石茶感冒胶囊内容物 600 mg(批号
20070102)6份 ,置顶空进样瓶中 ,精密加入对照品溶
液2 mL ,混匀;每瓶各进样 1.0 mL进行测定 ,计算回
收率。结果正己烷 、苯 、甲苯 、对二甲苯 、邻二甲苯 、苯
乙烯 、二乙烯苯的回收率分别为 102.0%、99.56%、
100.1%、100.3%、99.62%、99.48%、99.16%;RSD
分别为 1.26%、2.10%、2.19%、2.24%、2.59%、
2.17%、2.52%。表明测定方法可靠 ,结果可信。
2.9　样品中有机溶剂残留物的测定
精密称定 3 个批次的石茶感冒胶囊内容物各
600 mg ,置 10 mL 顶空瓶中 ,精密加水 2.0 mL 溶
解 ,按“2.1”项下色谱条件测定各样品中残留的有机
溶剂 。结果显示 ,在最低检测限范围内均未检出上
述 7种有机溶剂残留物 。对照品溶液 、石茶感冒胶
囊样品溶液的色谱图分别见图 1中的 A 、B 。
1-正己烷　2-苯　3-甲苯　4-对二甲苯
5-邻二甲苯　6-苯乙烯　7-二乙烯苯
图1　石茶感冒胶囊对照品溶液(A)、供试品溶液(B)的色谱图
3　讨论
3.1　色谱柱的选择
在实验过程中 , 分别选择了弱极性毛细管柱
HP-5 、中等极性毛细管柱 DB-624和强极性毛细管
柱 HP-IN NOWAX 。结果发现弱极性毛细管柱
HP-5和中等极性毛细管柱 DB-624都不能将邻二
甲苯和苯乙烯 2个峰完全分离;而在峰形 、理论塔板
数与分离度方面 ,以键合或交联聚乙醇为固定相的
HP-INNOWAX强极性毛细管柱均优于前 2个毛
细管柱。
3.2　顶空温度的选择
为了选择合适的顶空温度 ,在实验过程中 ,使用
同一浓度对照品溶液分别在 50 ℃、60 ℃、70 ℃、
80 ℃、90 ℃下平衡 30 min后进行测定。结果显示 ,
随着顶空温度的升高 ,峰面积增大 ,但当平衡温度达
到 90 ℃时 ,方法的重现性变差。根据文献[ 5] ,为避
免热降解所致的各类干扰 ,顶空温度一般不宜超过
70 ℃,最终确定顶空温度为 70 ℃。
3.3　顶空时间的选择
为了选择合理的顶空平衡时间 ,在实验过程中 ,
使用同一浓度对照品溶液在 70 ℃下分别平衡 15 、
30 、45 、60 min后进行测定。平衡 30 、45 、60 min后
测定的结果基本一致 ,均高于 15 min ,说明各被测
成分在 70 ℃下 30 min便可达到平衡效果 。综合多
项因素考虑 ,最终确定顶空时间为 30 min。
3.4　小结
《中国药典》(2005年版)对溶剂残留量进行了
较大的修订 ,明确指出残留溶剂的控制种类和限度
与“人用药品注册技术要求国际协调会”(ICH)的要
求一致[ 6] 。本实验中对有机溶液残留的限量检测参
照了国家食品药品监督管理局药品审评中心的一般
要求 ,即每 1 g 样品中苯不超过 2μg ,正己烷 、甲苯 、
二甲苯 、苯乙烯和二乙烯苯不超过 20 μg[ 7] 。
　　以上结果表明 ,该气相色谱法专属性强 、快捷 、
准确 ,被检组分的浓度和各自峰面积之间有着良好
的线性关系 ,精密度及加样回收率均符合要求 ,可用
于石茶感冒胶囊中的有机溶剂残留量的监控。检测
结果显示 ,石茶感冒胶囊 3批样品在最低检测限范
围内均未检测到上述 7种有机溶剂残留物 。从一个
方面说明大孔吸附树脂通过合理正确的前处理而用
于中药复方的提取和精制 ,是安全可行的 。
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(收稿日期 2009-07-13)
349现代药物与临床　　Modern Pharmacy and Clinic　　2009 年第 24卷第 6期