全 文 ：收稿日期!2005-01-12
基金项目!甘肃省自然科学基金!3ZS041-A25-073
Suported by Natural Science Foundation of Gansu Province
!3ZS041-A25-073
作者简介!雷晓燕(1958-)#女#1981年毕业于兰州医学院#学士#主任
医师#电话$0931-3912733
通讯作者 ! 葛 斌 # 副主任药师 # 电话:0931-8281809,E-mail:
gebin1965@sina.com
水红花子水提物的抗氧化活性
雷晓燕 1!许爱霞 2!高 湘 2!葛 斌 2甘肃省人民医院 1小儿科!2药剂科!甘肃 兰州730000#
摘要!目的 研究水红花子水提物的抗氧化活性及其机制% 方法 用D-半乳糖建立衰老小鼠模型#分别灌胃服用生药量
0.8&1.6和 3.2g/kg’b.w.的水红花子水提物!!=10#每日 1次#共 7周% 分别用 TBA比色法&亚硝酸盐法&DTNB法及
Sohal法测定心&肝&肾中丙二醛(MDA)&超氧化物岐化酶(SOD)&谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及脑中脂褐质!LF含
量% 结果 衰老小鼠心&肝&肾组织中 MDA含量升高#SOD及 GSH-PX活性降低#脑组织中 LF升高% 上述 3种剂量的
EFPO#能不同程度抑制脑组织中LF升高及心&肝&肾组织中MDA升高#其量效关系均呈负相关#相关系数分别为-0.963
!相关性检验 <0.01&-0.981!<0.01&-0.966!<0.05及 -0.978!<0.01(能不同程度抑制心&肝&肾组织中 SOD活力
下降#其量效关系均呈正相关#相关系数分别为 0.984!<0.05&0.990!<0.01&0.985!<0.01(能不同程度抑制心&肝&
肾组织中GSH-PX活力下降#其量效关系均呈正相关#相关系数分别为0.984!<0.01&0.956!<0.01及 0.957!<0.01%
结论 水红花子水提物可通过清除’OH#提高SOD及GSH-PX活力而发挥抗氧化活性%
关键词!提取物#水红花子( 氧自由基( 活性氧( 脂质过氧化
中图分类号!R932 文献标识码!A 文章编号!1000-2588(2005)07-0820-03
!#$%&’()#’*+ ),#’*’#- %. /)#+0-1%2342+ +�),#1 .0%5 !#$%#& ’()*+(,- .-/,%0)-&
LEIXiao-yan1,XUAi-xia2,GAOXiang2,GEBin2
1DepartmentofPediatrics,2DepartmentofPharmaceutics,PeoplesHospitalofGansuProvince,Lanzhou730000,
China
!41#0),#6 748+,#’*+ Tostudytheantioxidativeactivityofthewater-solubleextractsfrom #$%&’%( )*+,)!- .$-/!’0*-(.
9+#:%(1Malondialdehydeandsuperoxidedismutaseweremeasuredbythiobarbituricacidassay,nitritemethod,respectively.
Theactivityofglutathioneperoxidasewasdeterminedby5,5-dithionbis(2-nitrobenzoicacid)photometricmethod.Lipofuscin
wasdeterminedbySohalmethodinthebrainofsenilemodelmiceinducedbyD-galactose.Theextractsof0.8,1.6and3.2g’
kg-1’d-1wereadministeredtothemiceseparatelythroughoralgavagedailyfor7weeks.;+132#1 Malondialdehydecontent
increased,activitiesofsuperoxidedismutaseandglutathioneperoxidaseintheheart,liverandkidneydecreased.Levelsof
lipofuscininthebrainofsenilemodelmiceinducedbyD-galactoseincreased.Thethreedosesoftheextractscouldinhibitthe
levelsoflipofuscininthebrain,malondialdehydeintheheart,liverandkidney.Theseresultsshowedthattherewasanegative
dose-efectrelationship.Theextractsalsoup-regulatedthelevelsofsuperoxidedismutaseandglutathioneperoxidaseinthe
heart,liverandkidneywithapositivedose-efectrelationship.<%,231’%Thewater-solubleextractsexertitsantioxidative
activitybyeliminatingfreehydroxylradicals,increasingactivitiesofsuperoxidedismutaseandglutathioneperoxidase.
=+- /%0(16extracts,#$%&’%( )*+,)!- .$-/!’0*-(;oxygenfreeradicals;activeoxygen;lipoperoxidation
水红花子 !#$%&’%( 1)*+,)!- )$-/!’0*-(#FPO为蓼
科植物荭蓼的干燥果实#有消瘀破积#键脾利湿功效%
近年国内研究资料表明#水红花子对艾矢腹水癌和肉
瘤-180有一定抑制作用 )1*% 本研究对水红花子水提
物!extractfromFPOthroughwater,EFPO的抗氧化
活性进行如下探讨%
1材料和方法
1.1试剂
丙二醛(MDA)测试盒&超氧化物岐化酶(SOD)测
试盒&谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒为南京
建成生物工程研究所产品# 其它试剂均为国产分析
纯%水红花子经甘肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴
定为蓼科植物红蓼!)*+,)!%2 )$-/!’0*/L.的干燥成
熟果实%
1.2水红花子水提物水提物的制备$
将药材适度粉碎#蒸馏水浸泡 30min#第 1次微
沸!约90!40min#分离煎出液#第2次微沸30min#
第 3次微沸 20min#合并 3次煎出液#静置离心#浓
缩成所需浓度#贮存备用%
1.3动物分组及给药)2*
实验用昆明种小鼠60只由兰州医学院医学实验
中心提供#雌雄各半#7~8周龄#体质量!202g%随机
分为6组$对照组&模型组&阳性对照组及大&中&小剂
量用药组% 采用灌胃法给药#用药组小鼠分别给生药
第一军医大学学报!JFirstMilMedUniv 2005;25(7)820’ ’
SOD:Superoxidedismutase;GSH-PX:Glutathioneperoxidase;##!<0.01#controlgroup;*!<0.05,**!<0.01$modelgroup
表2EFPO对D-gal致衰老小鼠心!肝!肾组织中SOD及GSH-Px活力的影响
!#$% &’’()*+ &,-. /’ /0 )*121*1(+ /’ 3.4 05 637--8 10 9(:*; <12(: 05 =150(>+ /’ ?/@)( A1*9 +(01<(
?/5(< )@+(5 #> 4-B< !%=10,!mol/gwettissue,&’()!*+
Group Dose(g/kg#b.w.)
SOD GSH-PX
Heart Liver Kidney Heart Liver Kidney
Control - 4.49!0.31 7.91!0.49 5.67!0.33 6.86!0.57 12.1!0.82 8.56!0.62
Model - 3.43!0.30## 6.65!0.40## 4.56!0.37## 5.82!0.40## 9.18!0.74## 7.47!0.48##
VitE 0.2 3.70!0.24* 7.23!0.50* 5.54!0.46* 6.27!0.44* 9.81!0.68* 7.81!0.73*
EFPO 0.8 3.91!0.32* 7.15!0.44* 5.08!0.47* 6.36!0.42* 10.2!0.9* 8.17!0.70*
1.6 4.22!0.40** 7.59!0.45** 5.42!0.44** 6.97!0.59** 11.1!0.7** 9.16!0.79**
3.2 4.68!0.35** 8.16!0.46** 5.85!0.40** 7.56!0.64** 11.7!0.5** 9.65!0.78**
EFPO:ExtractfromFructusPolygoniOrientalisthroughwater;LF:lipofuscin;MDA:
malondialdehyde;##!<0.01$controlgroup;*!<0.05,**!<0.01$modelgroup
表1EFPO对小鼠脑组织中LF及心!肝!肾组织中MDA的影响
!#$C &’’()*+ /’ &,-. /0 D, 10 #:10 05 E4F 10 9(:*; <12(: 05 =150(>+ /’ ?1)(
!)=10,!!mol/gwettissue,&’()!,+
Group Dose(g/kg#b.w.)
LF MDA
Brain Heart Liver Kidney
Control - 12.9!2.5 6.54!0.44 3.34!0.32 5.03!0.40
Model - 17.2!1.9## 7.7!0.55## 4.36!0.43## 6.16!0.47##
VitE 0.1 15.1!1.5* 7.30!0.45* 4.78!0.48* 5.54!0.46*
EFPO 0.8 14.9!1.6* 7.25!0.60* 3.94!0.35* 5.58!0.60*
1.6 13.1!1.1** 6.86!0.56** 3.64!0.34** 5.17!0.42**
3.2 11.6!1.3** 6.44!0.33** 3.35!0.29** 4.67!0.37**
量 0.8$1.6$3.2g/kg#b.w的水红花子水提物% 每日 1
次& 阳性对照组给予维生素E200mg/kg#b.w%每日1
次& 模型组和对照组给予相当量的对照液(只含防腐
剂)& 给药同时%模型组$阳性对照组和用药组小鼠每
天颈背部皮下注射D-半乳糖1mg/g#b.w% 对照组皮
下注射等量注射用水%各组给药7周后进行各项指标
测定&
1.4小鼠心!肝!肾组织中过氧化脂质降解产物MDA
的测定
用 TBA比色法 ’3(%心$肝$肾组织用 Tris缓冲液
!pH7.4,10mmol/LTris-HCl,0.1mmol/LEDTA-2Na,
10mmol/L蔗糖%0.8%NaCl配成10%组织匀浆%取组
织匀浆 0.1ml%按测试盒操作法加入试剂%反应终体
积为4.2ml& 反应管振荡混匀% 水浴中煮沸40min%
3500r/min离心10min% 上清液于532nm处测吸光
度值&
1.5小鼠心!肝!肾组织中SOD活力的测定
用亚硝酸盐法’4(%心$肝$肾组织用Tris缓冲液配
成1%组织匀浆%取组织匀浆 50!!l%按测试盒操作法
加入试剂%反应体积为1.8ml&反应管振荡混匀%37!
恒温水浴中温育 40min% 加入显色剂 10min后%于
550nm处测吸光度值&
1.6小鼠心!肝!肾组织中GSH-Px活力的测定
用DTNB法’5(%取1%组织匀浆及1mmol/LGSH
各0.2ml(对照管不含GSH)%37!水浴中预温5min%
按测试盒操作法加入试剂%37!水浴中反应5min%3
500r/min离心10min%取上清液加入显色剂%室温静
置15min%于412nm处测吸光度值&
1.7小鼠脑组织中脂褐质LF#的测定
用Sohal法’6(%取小鼠大脑100mg%加入2#1氯仿
-甲醇提取液2ml%充分匀浆%滤纸过滤%滤渣用提取
液洗涤%加提取液至 5ml%测定荧光强度(发射波长
435nm%激发波长365nm)&
1.8统计分析
实验数据用 !!$表示%组间实验数据显著性差异
用 - 检验分析%受试药量效相关显著性差异用相关性
检验分析%统计软件用EXCEL&
2结果
2.1EFPO对 D-gal致衰老模型小鼠脑组织中 LF及
心!肝!肾组织中MDA的影响
D-gal致衰老模型小鼠脑组织中LF及心$肝$肾
组织中MDA显著升高%分别给予生药量0.8$1.6$3.2
g/kg#b.w的水红花子水提物后%能不同程度抑制脑组
织中LF升高及心$肝$肾组织中MDA升高!表1&
2.2EFPO对D-gal致衰老模型小鼠心!肝!肾组织中
SOD及GSH-PX活力的影响
小鼠心$肝$肾组织中SOD及GSH-PX活力均明
显下降& 分别给予生药量 0.8$1.6$3.2g/kg#b.w的水
红花子水提物后%能不同程度抑制心$肝$肾组织中
SOD及GSH-PX活力下降!表2&
第7期 雷晓燕,等.水红花子水提物的抗氧化活性 821# #
2.3EFPO对抗衰老模型小鼠脑组织 LF升高及心!
肝!肾组织中MDA含量升高的量效关系
水红花子水提物可显著抑制小鼠脑组织中 LF
升高!其量效关系呈负相关!相关系数为-0.963!相关
性检验 !<0.01也可显著抑制心#肝#肾组织中 MDA
升高!其量效关系均呈负相关!相关系数分别为-0.981
$!<0.01%&-0.966$!<0.05%及-0.978$!<0.01%’
2.4EFPO抑制衰老模型小鼠心!肝!肾组织中 SOD
及GSH-PX活力下降的量效关系
水红花子水提物可显著抑制小鼠心#肝#肾组织
中SOD活力下降!其量效关系均呈正相关!相关系数
分别 0.984(!<0.05%&0.990(!<0.01%&0.985(!<0.01%
可显著抑制心&肝&肾组织中 GSH-PX活力下降!其
量效关系均呈正相关!相关系数分别0.984(!<0.01%&
0.956(!<0.01%及0.957(!<0.01%)
3讨论
小鼠长期注射D-半乳糖可致代谢功能紊乱!自
由基过剩*2+) 自由基过剩可诱发炎症!免疫失调!恶性
肿瘤等多种疾病*7+!亦是机体衰老的机制之一*8+)脂质
过氧化是氧自由基损伤组织的重要方式!其损伤途径
为, 氧自由基+细胞膜脂质! 脂质过氧化反应!过
氧化脂质!丙二醛+细胞成分!脂褐质*9+!脂质过氧
化与氧自由基密切相关*10+)研究和开发抗氧化剂及自
由基清除剂对防治与自由基有关的疾病有重要意义)
生命过程中生物体不断产生氧自由基!即超氧阴
离子自由基(O2-%和羟自由基(-OH%等!它们有很强
的生物活性) 适量自由基对细胞的分裂!生长!消炎!
解毒等起积极作用) 但过剩会损伤细胞膜! 使DNA
断裂!蛋白质变性!酶失活!最后导致细胞解体和死
亡) 还有一些含氧产物如过氧化氢(H2O2%等!它们虽
不属自由基!但含有活性氧!化学性质较基态氧活泼!
可在自由基反应中产生!同时还可直接或间接触发自
由基反应) 它们和自由基一样!当产生过剩时会损伤
机体)机体自身存在抗氧化系统!包括GSH-PX!SOD
等抗氧化酶)GSH-PX对活性氧和组织产生的-OH及
H2O2有较强的清除能力! 对保护细胞结构和功能完
整!延缓细胞衰老起着重要作用) SOD对机体的氧化
与抗氧化平衡起着重要作用!此酶能清O2-!保护细胞
免受损伤) 抗氧化剂可直接清除过剩自由基!或通过
增强体内抗氧化系统起抗氧化作用)
D-半乳糖致衰老模型小鼠脑组织中 LF明显升
高! 心. 肝. 肾组织中MDA含量明显升高!SOD和
GSH-PX明显降低) 本实验发现0.8.1.6.3.2g/kg-b.w
的的EFPO!能不同程度抑制衰老模型小鼠脑组织中
LF升高及心.肝.肾组织中 MDA升高!其量效关系
均呈负相关! 这提示 EFPO可清除-OH及抗脂质过
氧化能不同程度抑制心.肝.肾组织中 SOD活力下
降!其量效关系均呈正相关!能不同程度抑制心.肝.
肾组织中GSH-PX活力下降! 其量效关系均呈正相
关! 这提示EFPO可清除O2-!H2O2及活性氧) 可见!
EFPO通过清除-OH! 提高 SOD及 GSH-PX活力而
发挥抗氧化活性!可能对上述与自由基有关的疾病有
防治作用)
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