全 文 ：雪莲果块茎中绿原酸及总酚酸的含量测定
石　晋 ,栾雨时＊ ,赵　宁
(大连理工大学环境与生命学院 ,辽宁 大连 116023)
　　摘要　目的:测定雪莲果块茎中有效成分绿原酸及总酚酸的含量。方法:绿原酸的测定分析采用高效液相色
谱法。色谱柱:WatersSunFireTMC18(150mm×4.6mm, 5 μm);流动相:甲醇-1%乙酸水溶液 , 二元梯度程序洗脱;
流速:0.8mL/min;检测波长:326nm。总酚酸的测定采用分光光度法 , 以没食子酸为对照品 , 在 725nm波长处进行
测定。结果:绿原酸含量在 0.4 ～ 4.8 μg范围时与峰面积呈良好线性关系(r=0.9990), 加样回收率为 97.28%;
RSD为 1.42%。总酚酸的线性范围为 0.02 ～ 0.10mg/mL(r=0.9990),加样回收率为 96.81%;RSD为 1.64%。结
论:方法灵敏准确 ,适用于雪莲果块茎中绿原酸及总酚酸的测定。
关键词　HPLC;雪莲果;绿原酸;总酚酸
中图分类号:R284.1/R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)02-0230-03
收稿日期:2008-08-12作者简介:石晋(1983-),女 ,硕士研究生 ,主要从事植物化学成分分析方面的研究。＊通讯作者:栾雨时 , E-mail:luanyushi@yahoo.com.cn。
　　雪莲果 (Smalanthussonchifolius)系菊科向日
葵属多年生草本植物 ,又称雪莲薯 、雪莲子 、亚龙果 、
亚贡 ,是一种纯生态型地下水果。其食用部位为地
下块茎 ,味甘 ,性平 ,有降压降糖 、保护肝脏 、滋阴补
肾 、增强机体免疫力等作用〔1〕 ,并表现出很高的抗
氧化性及自由基清除能力 〔2〕。Simonovska等 〔3〕曾用
TLC法将雪莲果萃取物及酸解产物进行分离 ,再通
过 HPLC/MS分析鉴定 ,发现其中含有绿原酸 、咖啡
酸 、阿魏酸等多种酚酸。 Takenaka等〔4〕也从中分离
并鉴定了 5种水溶性酚酸衍生物 ,分别为绿原酸及
四种咖啡酸二聚体。 Yan等 〔5〕在测定雪莲果抗氧化
能力的同时 , 用 NMR和 MS鉴定了其中主要的酚
酸 ,确定其为绿原酸。探索简便易行的测定方法 、掌
握雪莲果中各部位的绿原酸及总酚酸的含量 ,对其
药用质量评价及更好的开发利用这一资源具有重要
的意义 。
1 　仪器与材料
Waters600高效液相色谱仪:2487双波长紫外
检测器;600E四元泵;Empower色谱工作站;JASCO
V-560分光光度仪;FA1604s电子天平;Milipore超
纯水仪 。雪莲果由大连旅顺园艺试验场提供并鉴
定 。绿原酸及没食子酸对照品购于中国药品生物制
品检定所;甲醇 、冰醋酸为色谱纯;其余试剂均为分
析纯。
2 　方法与结果
2.1 　绿原酸的 HPLC测定
2.1.1　色谱分析条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合
硅胶为填充剂 , WatersSunFireTMC18(150 mm×4.6
mm, 5 μm),流动相为甲醇 (A), 1%乙酸水溶液
(B),二元梯度洗脱程序(0 ～ 5 min内 , A的浓度为
23%, 5 ～ 12 min内 , A的浓度降为 18%, 12 ～ 30 min
内 , A的浓度降为 10%),流速 0.8 mL/min,检测波
长 326 nm。此色谱条件下 ,绿原酸与其他组分峰分
离良好 ,见图 1。
图 1　对照品及供试品的 HPLC色谱图
A.对照品　B.雪莲果样品　1.绿原酸
2.1.2 　线性关系考察:精密称取绿原酸对照品 10
mg,用 80%的甲醇水溶液(含 1%盐酸)溶解并定容
至 10 mL,摇匀 ,得对照品储备液 ,再将其分别稀释
至 20、40、80、180、240 μg/mL。取上述溶液 20 μL
·230· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 2期 2009年 2月
注入高效液相色谱仪 , 按色谱条件测定色谱峰面
积 ,以峰面积为纵坐标(Y),对照品进样量(μg)为
横坐标(X),进行分析 ,得线性回归方程:Y=1.71 ×
106 X(r=0.9990)。绿原酸对照品在 0.4 ～ 4.8 μg
范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.1.3　供试品溶液的制备:取雪莲果块茎经自然
风干后粉碎 ,称取 1 g, 置于 100 mL三角瓶中 ,用
80%的甲醇水溶液(含 1%盐酸)50 mL超声浸提 3
次 ,每次 30 min。 5000 r/min离心后 45 ℃下减压旋
转蒸干 。残留物溶于 2 mL提取液 ,过 0.22 μm微
孔滤膜 ,取续滤液 ,即得供试品溶液。
2.1.4　精密度试验:吸取绿原酸对照品溶液 20
μL,注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件进行分
析 ,测定 5次 ,得到绿原酸对照品峰面积的 RSD为
1.08%,表明精密度良好 。
2.1.5　稳定性试验:取同一供试品溶液分别在 0、
1、2、4、6、8 h各进样 20 μL,测定色谱峰面积 ,得到
供试品溶液绿原酸峰面积的 RSD为 1.35%,说明供
试品在 8 h内保持稳定。
2.1.6 　重现性试验:取 5份雪莲果样品 , 按
“ 2.1.3”项下的方法进行平行提取 ,测定其含量 ,结
果重现性良好 ,计算得 RSD为 1.56%。
2.1.7　加样回收率试验:称取已知含量的雪莲果
样品 5份 ,加入适量绿原酸对照品液 ,按供试品测试
方法提取测定 ,计算得到平均回收率为 97.28%,
RSD为 1.42%,表明色谱条件具有较强的可靠性。
2.1.8　样品含量测定:取雪莲果块茎的三个部位
(近表皮部 、中部及心部),按 “ 2.1.3”项下的方法进
行提取 ,以选定色谱条件外标法定量 ,结果见表 1。
　表 1　　　　　雪莲果块茎不同部位绿原
酸及总酚酸含量(mg/g)
取样部位 绿原酸含量 总酚酸含量
心部 0.215 4.59
中部 0.162 2.96
近表皮部 0.264 6.48
2.2 　总酚酸的分光光度法测定
2.2.1　测定方法:按 “2.1.3”项下进行提取 ,制备
供试液 。采用 FC法测定总酚酸含量〔6〕:取供试品
溶液 50 μL于试管中 , 加入 Folin-Ciocalteu试剂
1000 μL,摇匀后于室温下反应 5 min,再加入 1 mol/
L的碳酸钠溶液 , 30 ℃下反应 90 min,适当稀释后
于 725 nm波长处测定样品溶液吸光度 ,再通过标准
曲线计算即得总酚酸含量 ,结果见表 1。
2.2.2　线性关系考察:称取一定量没食子酸对照
品 ,制备储备液(1 mg/mL)将其分别稀释为 0.02、
0.04、0.06、0.08、0.10 mg/mL,按 “2.2.1”项下的方
法测定吸光度 。以吸光度 A为纵坐标 、对照品溶液
浓度 C为横坐标 , 得回归方程 A=6.57C(r=
0.9990)。表明总酚酸含量在 0.02 ～ 0.10 μg/mL
范围内 ,呈现良好线性关系。
2.2.3 　精密度试验:取没食子酸对照品溶液 50
μL,按方法 “2.2.1”项下测定 5次 ,吸光度 A的 RSD
为 1.25%,表明精密度良好 。
2.2.4 　稳定性试验:取同一供试品溶液按上述方
法 ,分别在反应后每隔 5 min测定一次吸光度 ,发现
供试品溶液在 1 h内稳定 , RSD为 1.43%。
2.2.5 　重现性试验:称取雪莲果样品 5份 ,按上述
方法提取并测定其中总酚酸含量 , 其 RSD为
1.58%,表明重现性良好。
2.2.6 　加样回收率实验:称取已知含量的雪莲果
样品 5份 ,加入适量没食子酸对照品液 ,测定其总酚
酸的含量 , 计算出平均回收率为 96.81%, RSD为
1.64%。
3　讨论
3.1　天然酚酸类化合物具有清除自由基 、抗菌消
炎 、抑制血栓形成等生物活性 〔7〕。作为酚酸类物质
的一种 ,绿原酸具有多种药理作用 ,对血液 、消化系
统的多种疾病更有显著疗效 〔8〕 ,现已成为药材和中
成药制剂内在质量控制的重要指标。根据本实验的
测定结果 ,雪莲果表皮及近表皮处绿原酸及总酚酸
含量远远高于中部 ,应对这部分资源进行回收及利
用。
3.2　在选择流动相比例时 ,曾使用甲醇 -1%乙酸
(30∶70)、(25∶75)、(23∶87)等多种比例流动相 ,这
些恒梯度流动相不能实现绿原酸同其他组分峰的分
离;而且随流动相极性的增加 ,各组分分离度增大 ,
保留时间过长;同时当甲醇 -1%乙酸达到 20∶80时 ,
一些新的组分峰又被分离出来。根据 HPLC分析的
要求 ,确定用梯度洗脱程序(0 ～ 5 min内 ,甲醇浓度
23%, 5 ～ 12 min内 ,甲醇浓度达 18%, 12 ～ 30 min
内 ,甲醇浓度降为 10%)作为绿原酸分析的最佳流
动相 。该流动相基线平稳 ,能够实现组分的分离 ,分
离度良好且保留时间适中。
3.3　采用高效液相色谱法和分光光度法测定雪莲
果中绿原酸和总酚酸的含量 ,简便 、准确 ,重现性良
好 ,方法可靠 ,可为雪莲果块茎的药用质量评价提供
可靠的检测标准。
参 考 文 献
[ 1] 李卓亚 .雪莲果化学成分及其药理作用的研究进展
·231·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 2期 2009年 2月
[ J] .食品与药品 , 2007, 9(6):41-43.
[ 2] YanXJ, SuzukiM, Ohnishi-KameyamaM, etal.Extrac-
tionandidentificationofantioxidantsintherootsofyacon
(Smalanthussonchifolius)[ J] .Journalofagricultural
andfoodchemistry, 1999, 47(11):4711-4713.
[ 3] SimonovskaB, VovkI, AndrensekS, etal.Investigation
ofphenolicacidsinyacon(Smalanthussonchifolius)leav-
esandtubers[ J] .JournalofchromatographyA, 2003,
1016(1):89-98.
[ 4] TakenakaM, YanXJ, OnoH, etal.Cafeicacidderiva-
tivesintherootsofyacon(Smallanthussonchifolius)[ J] .
Journalofagriculturalandfoodchemistry, 2003, 51(3):
793-796.
[ 5] TakasugiM, MasudaT.Three4 -hydroxyacetophenone-re-
latedphytoalexinsfrom polymniasochifolia[ J] .Phyto-
chemistry, 1996, 43(55):1019-1021.
[ 6] FaikAA, SemaHA, SengulAK, etal.Phenolicacid
contentsofkale(BrassicaoleraceaeL. var. acephala
DC.)extractsandtheirantioxidantandantibacterialactiv-
ities[ J] .Foodchemistry, 2008, 107(1):19-25.
[ 7] 齐典 , 金哲雄 .植物多酚在保健食品方面的应用 [ J] .
黑龙江医药 , 2006, 19(2):120-122.
[ 8] 张鞍灵 , 马琼 , 高锦明 , 等 .绿原酸及其类似物生物活
性 [ J] .中草药 , 2001, 32(2):173-176.
RP-HPLC同时测定天山花揪中绿原酸 、
芦丁和金丝桃苷含量
芮　鸣 ,张　芹 ,唐　辉＊ ,王鲁石 ,马运芳
(新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室 ,新疆 石河子 832002)
　　摘要　目的:建立 HPLC同时测定天山花揪中绿原酸 、芦丁和金丝桃苷 3种成分含量的方法。方法:用 60%的
乙醇超声提取 , WatersC18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱 ,以甲醇-乙腈 -0.3%磷酸水为流动相进行梯度洗脱 ,检
测波长 360 nm,柱温 25℃。结果:绿原酸 、芦丁和金丝桃苷分别在 33.12 ～ 115.9, 1.051 ～ 11.56, 0.8040 ～ 8.844
μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系 , 相关系数均为 0.9999;平均加样回收率(n=3)分别为 98.87%、 100.2%、
101.0%。经测定天山花揪叶中绿原酸 、芦丁和金丝桃苷含量分别为 1.271%、 0.08884%、0.1430%。结论:本法一
次性同时测定天山花揪中 3种成分含量 , 方法简便 、准确 、可靠 , 可为药材和制剂研究提供较为全面的科学依据及
有效的质量控制方法。
关键词　天山花揪;绿原酸;芦丁;金丝桃苷;高效液相色谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)02-0232-03
收稿日期:2008-07-22基金项目:新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目(2006GG52)作者简介:芮鸣(1981-),男 ,硕士研究生 ,从事天然药物分析及制剂研究。＊通讯作者:唐辉 , Tel:0993-2057167, E-mail:th pha@shzu.edu.cn。
　　天山花揪 SorbustianshanicaRupr.为蔷薇科花
揪属植物 ,系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药 ,
《新疆维吾尔自治区药品标准》(第一册)记载:“民
间以嫩枝叶 、果实和茎皮入药 。嫩枝叶和茎皮:味
苦 ,性寒 ,无毒;果实:味甘苦 ,性平 。功能:清热利
肺 ,补脾生津 ,止咳;主治:肺结核 ,哮喘 ,咳嗽 ,胃炎 ,
胃痛 ,维生素 A和 C缺乏症 〔1〕 ”。该属植物中含有
较丰富的黄酮 、花青素 、双联苯酚 、类山梨酸苷 、生氰
苷等成分〔2-4〕。具有抑菌 〔5〕、抗氧化 〔6, 7〕 、抗癌 〔8〕 、抗
辐射和止咳平喘 〔9〕 、依赖性地抑制心肌收缩和保护
心肌缺血等作用 〔10〕。为了更好的分析天山花揪的
有效成分 ,及对药材质量进行控制 ,笔者建立了同时
测定天山花揪叶中绿原酸 、芦丁和金丝桃苷含量的
高效液相色谱方法 ,现报道如下。
1　仪器与材料
1.1　仪器　Agilent1100型高效液相色谱系统(配
有:四元泵 ,紫外检测器 , HP1100化学工作站);日
本岛津 UV2401(PC)紫外光谱仪;德国 Sartorius
BP211D十万分之一电子分析天平;超声清洗仪。
1.2　材料　绿原酸 、芦丁和金丝桃苷对照品(由中
国药品生物制品检定所提供);天山花揪供试品采
自新疆玛纳斯林场 ,海拔 2 000 ～ 2 500 m,由石河子
大学药学院成玉怀高级实验师鉴定为蔷薇科花揪属
植物天山花揪 SorbustianshanicaRupr.;甲醇 、乙腈
为色谱纯 ,水为纯净水 ,磷酸 、乙醇及其它试剂均为
分析纯。
·232· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 2期 2009年 2月