全 文 ：作者简介:吴卓 (1984) ，女，辽宁阜新人，药师，硕士学位，主要研究方向为药物质量标准。
通讯作者:郭伟英 (1958) ，男，辽宁锦州人，教授，硕士学位，主要研究方向为药物分析。
关东丁香叶提取物降糖作用机理初步研究
吴卓1，郭伟英2，郑荣2
(1. 辽宁医学院附属第一医院;2. 辽宁医学院药学院，辽宁 锦州 121001)
摘要:目的 研究关东丁香叶提取物对链脲佐霉素诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠的降糖作用。方法 采用链脲佐菌素法诱导
建立Ⅰ型糖尿病动物模型，利用生物化学、放免分析、组织学、免疫组化等方法，观察关东丁香叶总黄酮提取物、总环烯
醚萜提取物和水提物对糖尿病大鼠的降糖作用。结果 关东丁香叶水提取物能显著降低糖尿病大鼠空腹血糖值，增加血清
胰岛素浓度;总黄酮和总环烯醚萜提取物可促进胰岛素分泌，抑制胰高血糖素分泌。结论 关东丁香叶提取物对糖尿病大
鼠有降糖作用。
关键词:关东丁香;提取物;糖尿病;大鼠
中图分类号:Ｒ285. 1 文献标志码:A 文章编号:1674 － 0424(2015)04 － 0004 － 03
Preliminary Study on Mechanism of Hypoglycemic Effect
of Syringa Veutina Kom Leaves Extract
WU Zhuo1，GUO Weiying2，ZHENG Ｒong2
(1. The First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University;2. Liaoning Medical University，Jinzhou 121001 China)
Abstract:Objective To explore the hypoglycemic effect of Syringa veutina Kom leaves extract in the treatment of rats with
Streptozotocin － induced type 1 diabetes mellitus． Methods Ｒat model of type 1 diabetes mellitus was established by STZ induction．
Biochemistry，radioimmunity analysis，histology and immunohistochemical method were used to observe the hypoglycemic effect of a-
queous total flavonoids extracts of Syringa veutina Kom leaves and total cyclic ether aqueous extracts on diabetic rats． Ｒesults Aque-
ous extracts of Syringa veutina Kom leaves were able to significantly reduce fasting blood glucose of diabetic rats and increase serum in-
sulin concentration． Total flavonoids and total cyclic olefin extract can promote insulin secretion and inhibit glucagon secretion． Con-
clusion Syringa veutina Kom leaves extract has hypoglycemic effect on diabetic rats．
Key words:Syringa veutina Kom;extract;diabetes;rats
目前糖尿糖在治疗上主要有注射胰岛素、口服
磺酰脲类和双胍类降血糖药物等，但是所用药物都
不同程度地存在着副作用。因此，开发和研究高效
低毒的，特别是从天然资源中找到既治疗糖尿病又
无副作用的药物，显得特别重要。近年来与研究表
明，丁香叶具有多种药用价值，其中包括抗糖尿病
作用［1 － 2］。但是目前对关东丁香叶提取物降糖作用
的研究还很少。本研究旨在探讨关东丁香叶提取物
对糖尿病模型大鼠的降糖作用机制，为临床糖尿病
的药物开发提供新的线索。
1 材料与方法
1. 1 受试药材 关东丁香叶 (S2)中水提物、总
黄酮提取物、总环烯醚萜提取物均为本实验室自
制。
1. 2 实验动物 SD 大鼠，SPF 级，体重 (220 ±
30)g，雄性，由辽宁长生生物技术有限公司提
供。动物饲养于辽宁医学院附属第一医院动物实验
中心，动物饲养环境:空调实验室内，室温 (22
± 2)℃，相对湿度 (55 ± 2)%，大鼠分笼以全价
颗粒饲料喂养，自由饮水。每日换垫料 1 ～ 2 次，
保持干燥。
1. 3 仪器与试剂 YOKO － ZF 三用紫外分析仪
(武汉药科新技术开发有限公司);ＲT － 9600 型半
自动生化分析仪 (上海志研生物科技有限公司) ;
安稳血糖仪 (三诺生物传盛股份有限公司) ;低温
高速离心机 (武汉药科新技术开发有限公司) ;EL
800 酶标仪 (Bio － lek instrument) ;OLYMPUS
4
辽宁医学院学报
J Liaoning Medical University2015 Aug． 36(4)
DOI:10.13847/j.cnki.lnmu.2015.04.001
CX21 显微镜 (日本奥林帕斯) ;LELCA － ＲM2135
石蜡切片机 (德国莱卡) ;CS － IV 型摊片烤片机
(德国莱卡) ;DK － 8A 型电热恒温水槽 (上海精
宏实验设备有限公司)链脲佐霉素;柠檬酸 (分
析纯);柠檬酸钠 (分析纯) ;葡萄糖;盐酸二甲
双胍片;多聚甲醛 (分析纯) ;乙醇 (分析纯) ;
二甲苯 (分析纯) ;中性树胶;总胆固醇 (TC)
测试盒;甘油三酯 (TG)测试盒;低密度脂蛋白
(LDL － C)测试盒;高密度脂蛋白 (HDL － C)测
试盒;胰岛素放免试剂盒;丙二醛 (MDA)测试
盒;超氧化物歧化酶 (SOD)测试盒;胰岛素抗体
(批号:bs － 0862Ｒ);胰高血糖素抗体 (批号:bs
－ 3796Ｒ) ;二抗试剂盒 (批号:C － 0029) ;DAB
显色试剂盒 (批号:D －2290) ;安稳血糖试纸。
1. 4 指标及方法
1. 4. 1 试剂的配制［3］ 受试药物的配制:分别称
取总黄酮提取物、总环烯醚萜提取物，将药物溶于
蒸馏水中溶解，配制成浓度为 30 mg /mL、60 mg /
mL的水溶液，每次配制 2 ～ 3 d 的量，4 ℃保存备
用。称取水提物，将药物溶于蒸馏水中溶解，配制
成浓度为 90 mg /mL的水溶液，每次配制 2 ～ 3 d的
量，4 ℃保存备用。
柠檬酸缓冲液 (pH 4. 5)的配制:称取 2. 10
g柠檬酸溶于 100 mL蒸馏水为 A 液，称 2. 94 g 柠
檬酸三钠溶于 100 mL 蒸馏水为 B液，取 A液 11. 4
mL 加 B液 8. 6 mL，即得。
STZ的配制:将 STZ 用 0. 1 mmol /L 无菌柠檬
酸 －柠檬酸钠缓冲液新鲜配制成溶液，调节 pH 至
4. 5，滤菌器过滤除菌，临用前配制，避光冰浴冷
藏。
1. 4. 2 Ⅰ型糖尿病大鼠模型的制备［4］ 取 80 只健
康 SD大鼠，雄性，平衡饲养 7 d 后，药物注射前
观察大鼠健康情况，1 w 内饮食正常、体重不减
轻、血糖正常者即可用于实验。随机取 10 只作为
空白对照组，其余大鼠在禁食 (不禁水)12 h 后，
一次性尾静脉快速注射新鲜配制的链脲佐霉素
(STZ)，剂量为 30 mg /kg。正常对照组大鼠注射等
剂量的柠檬酸缓冲液 (pH 4. 5) ，恢复进食。3 d
后大鼠再次禁食 (不禁水)12 h，采用剪尾取血，
血糖仪测空腹血糖，以血糖值≥11. 1 mmol /L 的动
物作为Ⅰ型糖尿病 (T1DM)模型大鼠。
1. 4. 3 分组与给药 将造模成功的 70 只大鼠按其
血糖值和体重随机分为高血糖模型组、总黄酮提取
物低剂量组 (300 mg /kg)、总黄酮提取物高剂量
组 (600 mg /kg)、总环烯醚萜提取物低剂量组
(300 mg /kg)、总环烯醚萜提取物高剂量组 (600
mg /kg)、水提物组 (900 mg /kg)、盐酸二甲双胍
组 (100 mg /kg)，每组 10 只，各组间血糖值和体
重无显著性差异［5］。各组动物每天灌胃给药 1 次，
连续 21 d。各组均以 10 mL /kg 的同等容积给药。
空白对照组和高血糖模型组灌胃等体积的生理盐
水，同时定期称量体重调整用药量［6］。
1. 4. 4 检测指标
1. 4. 4. 1 丙二醛含量与超氧化物歧化酶活力 实
验期满，于给药第 21 天，心脏取血，分离血清，
转速 4 000 r /min。按照试剂盒说明方法测定 MDA
含量和 SOD活力。
1. 4. 4. 2 胰腺组织 HE染色形态观察 (1)标本
的收集与处理 各组大鼠连续灌胃治疗 21 d 后，
采血，用 2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，打开
腹腔，迅速取出新鲜的胰腺组织，尽量减少对胰腺
的损伤，浸泡于 4%多聚甲醛固定液中过夜，常温
下放置［7］; (2)HE染色［8］。
1. 4. 4. 3 胰腺组织 α细胞和 β 细胞水平的免疫组
化检测［9 － 10］。
2 结 果
2. 1 关东丁香叶提取物对糖尿病大鼠丙二醛含量
与超氧化物歧化酶活力的影响 与空白对照组比
较，高血糖模型组大鼠 MDA 含量升高 (P ＜
0. 05)，SOD活力显著下降 (P ＜ 0. 01) ，说明糖尿
病大鼠有一定程度的氧化损伤。治疗 3 w 后，与高
血糖模型组相比，关东丁香总黄酮、总环烯醚萜提
取物各剂量组、水提取物组和盐酸二甲双胍组大鼠
血清 MDA含量降低，SOD 活力升高，均有显著性
差异 (P ＜ 0. 05)。结果表明，关东丁香叶总黄酮、
总环烯醚萜提取物、水提物和盐酸二甲双胍组可升
高糖尿病大鼠机体 SOD 活性，清除自由基，抑制
脂质过氧化，改善糖尿病带来的机体异常症状，结
果见表 1。
2. 2 胰腺组织 HE 染色形态观察 图 1 显示了空
白对照组大鼠胰腺中胰岛内细胞数量较多，排列整
齐，体积较大，呈圆形或椭圆形的细胞团，边界清
晰，胞浆丰满，核多为圆形;高血糖模型组大鼠胰
腺中胰岛内细胞数量明显减少，轮廓消失，结构破
坏，胰岛细胞排列不规则，边界不清晰，部分细胞
出现肿胀或皱缩坏死，胰岛内出现空泡;盐酸二甲
双胍组胰岛内细胞数量仍较少，与糖尿病组比较有
所增多，细胞分布较规则，但细胞边界不清晰;与
高血糖模型组相比，关东丁香叶总黄酮提取物低剂
5吴卓，等:关东丁香叶提取物降糖作用机理初步研究
表 1 关东丁香叶提取物对糖尿病大鼠 MDA、SOD和 INS的影响 (珋x ± s)
组别 n 剂量 (mg /mL) MDA (nmol /mL) SOD (U /mL) INS (uIU /mL)
空白对照组 10 — 7. 78 ± 0. 27 47. 97 ± 0. 27 17. 23 ± 0. 32
高血糖模型组 10 — 12. 06 ± 0. 52△ 42. 06 ± 0. 51△ 7. 26 ± 0. 61△
总黄酮低剂量组 10 300 9. 26 ± 0. 27＊ 45. 01 ± 0. 31△＊ 11. 12 ± 0. 33＊
总黄酮高剂量组 10 600 11. 28 ± 0. 27＊ 43. 01 ± 0. 31△＊ 8. 71 ± 0. 42
总环烯醚萜低剂量组 10 300 11. 34 ± 0. 31＊ 42. 51 ± 0. 33△＊ 9. 65 ± 0. 28＊
总环烯醚萜高剂量组 10 600 8. 23 ± 0. 25＊ 46. 53 ± 0. 34△＊ 12. 50 ± 0. 32＊
水提物组 10 900 12. 22 ± 0. 30＊ 42. 98 ± 1. 35△＊ 7. 69 ± 0. 45
盐酸二甲双胍组 10 100 10. 22 ± 0. 30＊ 42. 55 ± 0. 28△＊ 10. 68 ± 0. 31＊
注:＊与模型组比较 P ＜ 0. 05，△与正常组比较 P ＜ 0. 05
量组和总环烯醚萜提取物高剂量组大鼠胰腺病变较
轻，胰岛内细胞数量增多，细胞分布规则，胰岛轮
廓完整，胞浆疏松，着色较深，细胞边界较清晰;
总黄酮提取物高剂量组、总环烯醚萜提取物低剂量
组和水提物组对胰腺的修复作用较弱。
2. 3 胰腺组织 α细胞和 β 细胞水平的免疫组化检
测 由图 2 可见，胰岛素内充满阳性反应的 β 细
胞均分布在胰岛的中央部分，胰高血糖素内充满阳
性反应的 α 细胞多数均分布在胰岛的周边部分。
结果显示，空白对照组大鼠胰岛内充满阳性反应的
β细胞，分泌颗粒丰富，呈棕褐色，着色深;高血
糖模型组大鼠胰岛内 β 细胞明显减少，未见明显
的分泌颗粒，着色淡;关东丁香叶各给药组和阳性
对照组糖尿病大鼠胰岛内 β 细胞增多，分泌颗粒
增多，着色较深，其中总黄酮提取物低剂量组和总
环烯醚萜提取物高剂量组的大鼠 β 细胞略多，着
色略深于总黄酮高剂量组和总环烯醚萜低剂量组，
水提物组大鼠胰岛表达较弱。
与空白对照组相比，高血糖模型组大鼠胰岛内
充满阳性反应的 α 细胞，细胞数量较多，分泌颗
粒丰富，着色加深;关东丁香叶各给药组和阳性对
照组糖尿病大鼠胰岛内 α 细胞减少，分泌颗粒减
少，着色较浅，其中总黄酮提取物低剂量组和总环
烯醚萜提取物高剂量组的大鼠 α 细胞略少，着色
略浅于总黄酮高剂量组和总环烯醚萜低剂量组，水
提物组大鼠胰岛血糖素表达较强。
3 讨 论
本研究观察到:关东丁香叶总黄酮提取物、总
环烯醚萜提取物和水提物均有降低 STZ 诱导Ⅰ型
糖尿病大鼠血糖的作用 (有量效关系)，增加血清
胰岛素水平，改善机体糖代谢紊乱。其中，总环烯
醚萜提取物高剂量组和总黄酮提取物低剂量组降糖
效果较优，而水提取物效果较差。关东丁香叶总黄
酮提取物、总环烯醚萜提取物和水提物对Ⅰ型糖尿
病大鼠均有调血脂的功效，可降低大鼠血清 TC、
TG、LDL － C水平，升高 HDL － C 含量，改善机体
脂代谢紊乱。关东丁香叶总黄酮提取物、总环烯醚
萜提取物和水提物可降低糖尿病大鼠血清 MDA 含
量，升高 SOD活力，提高机体抗氧化能力。
HE染色结果显示，光镜下可见关东丁香叶提
取物各组大鼠胰岛细胞病变减轻，胰岛数量增多，
呈圆形或椭圆形细胞团，轮廓完整，分布规则，排
列整齐，胞浆疏松，细胞边界清晰。
免疫组化结果显示，与高血糖模型组相比，关
东丁香叶提取物大鼠胰腺中胰岛 Insulin 表达明显
升高，Glucagon表达明显降低。说明关东丁香叶提
取物可纠正糖尿病模型大鼠胰岛细胞萎缩，减轻胰
岛细胞病理损伤，对受损的胰岛有一定的保护作
用。
本研究表明，关东丁香叶提取物可通过多种环
节和途径，改善 STZ 诱导Ⅰ型糖尿病模型大鼠症
状，纠正糖、脂代谢紊乱，提高抗氧化能力，减轻
胰岛细胞病理损伤，提高胰岛 β 细胞的分泌指数
和功能指数等，从而发挥降血糖作用。结果表明，
关东丁香叶总黄酮和总环烯醚萜提取物对治疗糖尿
病具有广阔的应用开发前景，其降血糖机制可能是
促进胰岛素分泌，抑制胰高血糖素分泌，修复胰岛
β细胞。 (此文图 1 －2 见附页 2 －3)
参考文献:
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(下转第 15 页)
6 辽宁医学院学报 2015 年 8 月，36 (4)
与胶体的配比，减少了液体的输注输注量，从而用
较少的液体实现了良好的器官灌注，减轻了脏器的
休克 －灌注再损伤，减轻氧自由基的大量产生，减
缓了机体再灌注损伤，保护了机体遭受严重的灌注
再损伤。
综上，本实验的不同液体都可以早期纠正机体
的 MAP，达到灌注充容的目的。在对抗机体炎症
反应和免疫功能反应方面高渗盐羟乙基淀粉通过提
供更持续的血流动力及抑制相关炎症因子使其复苏
效果较好。但本实验对高渗盐联合胶体的配比，及
高渗盐联合胶体复苏后对机体生存时间未作出解
释，这是本研究的下一步方向。
(此文图 1 －3 见附页 4)
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附贞2 辽宁民学院学报2015年8月，36 (4)
文见第4-6页
I 1对照绀大鼠胰腺H K染色(x200)
c ：总黄m提取物低剂髓1大鼠a腺I丨e染色(x2oo)
水提物组大鼠胰腺11E染色(X200)
尚l�IL糖模咽组大鼠胰腺HK染色�x200)
1)：总故酮提取物商剂If丨：飢人臥胰腺HE染色(x200)
W1
F�总坏烯醚萜提取物高剂ii组大鼠胰腺HE染色(x200)
觀
A l V •
H ：盐酸二甲双胍组大鼠胰腺HE染色(X200)
图1大鼠胰腺HE染色�x200)
辽宁医学院莩报2015年8月，36 (4)
A�空白对照组大鼠胰高血糖素免疫组化(x200)
C�总黄酮提取物低剂量组大鼠胰高血糖素免疫组化(X200)
(；：水提物绀大鼠炚;高Ifil.掂M免疫飢化�x2(K)>
附页3
B�高血糖模型组大鼠胰高血糖素免疫组化(X200)
I)：总黄酮提取物《剂lit组大鼠胰髙血糖紫免疫组化(X200)
II：盐酸_.屮《胍纟丨1大鼠胰总Ifll糖桌免疫绀化
图2大鼠胰高血糖素免疫组化�x20()>