全 文 ：DOI:10． 3724 /SP． J． 1096． 2013． 20625
返魂草的高效液相色谱法指纹图谱研究及成分分析
赵春芳1 李庆杰2 王莲萍3 何忠梅3 刘永强* 2
1(吉林大学药学院，长春 130021) 2(长春中医药大学附属医院，长春 130021)
3(吉林农业大学，长春 130118)
摘 要 采用高效液相色谱法，建立了返魂草的指纹图谱，并与相同条件下获得的同属植物千里光图谱进行
了比较;通过液相色谱-质谱联用法及与对照品比照研究，对其 5 种共有成分进行了鉴定;并对以上成分的含
量进行同步测定。结果表明，此指纹图谱能够用于区分返魂草及其混淆品千里光;5 种成分在各自的浓度范
围内线性关系良好(r = 0． 9995 ～ 0． 9998) ，10 批样品中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、异槲皮苷含量分
别为 0． 03 ～ 0． 07 mg /g，0． 10 ～ 1． 04 mg /g，0． 01 ～ 0． 05 mg /g，0． 07 ～ 0． 35 mg /g和 0． 02 ～ 0． 74 mg /g。本方法
可用于返魂草的鉴别及药材的质量评价。
关键词 返魂草;指纹图谱;含量测定;高效液相色谱;液相色谱-质谱联用
2012-06-18 收稿;2012-08-21 接受
* E-mail:lyq1873@ 126． com
1 引 言
返魂草为菊科千里光属植物返魂草(Senecio cannabifolius Less)的干燥全草，具有理气化痰、清热解
毒等功效［1］。单方制剂主要有返魂草颗粒、肺宁口服液等［2，3］。目前，返魂草药材市场混乱，有不法商
贩用千里光代替返魂草，而现有药材标准又无法进行有效鉴别。近年来，在中药质量控制领域，指纹图
谱技术受到广泛关注，它能同时反映中药的化学成分和它们之间的比率［4］，可以比较全面地反映中药
材及制剂的质量［5 ～ 8］。为了提高返魂草药材质量标准，有效控制其质量，本研究采用高效液相色谱法，
建立了返魂草指纹图谱，用以区别其混淆品千里光，并对其中 5 种成分进行了同步分析，为返魂草的质
量控制提供了较为理想的方法。
2 实验部分
2． 1 仪器、试剂与材料
HP-1100 液相色谱仪(美国 Agilent公司，DAD检测器) ;Finnigan LTQ液相色谱-质谱仪(美国 Ther-
mo公司)。甲醇和乙腈(色谱纯，美国 Fisher公司)。
原儿茶酸、金丝桃苷、绿原酸、异槲皮苷、咖啡酸对照品及千里光对照药材购于中国药品生物制品检
定所;返魂草药材采集于 2010 年 8 月，样品 S1 ～ S6 分别采自吉林省磐石、敦化、蛟河、抚松、靖宇、柳
河;S7 和 S8 采自黑龙江省牡丹江，S9 和 S10 采自内蒙古自治区阿尔山和牙克石，经吉林大学王广树教
授鉴定为菊科返魂草属植物宽叶返魂草(S． cannabifolius Less)的干燥全草。
2． 2 溶液配制
2． 2． 1 对照品溶液 准确称取适量对照品，加甲醇制成每 1 mL 含原儿茶酸 0． 025 mg、绿原酸
0． 121 mg、咖啡酸 0． 0408 mg、金丝桃苷 0． 0522 mg、异槲皮苷 0． 0152 mg的混合对照溶液。
2． 2． 2 供试品溶液 取返魂草药材 2． 5 g，加适量 70%甲醇，索氏提取 5 h，回收溶剂，以 70%甲醇溶解
并定容至 10 mL，即得。
2． 3 色谱-质谱条件 流动相:0． 3%甲酸(A)-乙腈 (B) ，梯度洗脱:0 ～ 15 min，2% ～ 7% B;15 ～ 40
min，7% ～16% B;40 ～ 60 min，16% ～18% B;60 ～ 75 min，18% ～25% B;75 ～ 80 min，25% ～ 90%
B;80 ～ 85 min，90% ～90% B;85 ～ 90 min，90% ～2% B。流速 1． 0 mL /min;柱温:30℃;检测波长:
第 41 卷
2013 年 1 月
分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第 1 期
133 ～ 136
254 nm;进样量:10 L。正负离子扫描;离子源 ESI(±) ;雾化电压 3． 5 kV;鞘气压力 220 kPa;辅助
气压力 140 kPa;毛细管温度 350 ℃;碰撞能量 30 eV;扫描范围 m/z 100 ～ 2000。
3 结果与讨论
3． 1 供试品提取条件及色谱条件的选择
供试品经索氏提取 5 h，即可提取完全;考察甲醇浓度对提取效果的影响，70%甲醇提取效果最佳。
经过比较，乙腈-0． 3%甲酸为流动相，分离效果较好;检测波长为 254 nm，色谱峰最多，响应值较高。
3． 2 指纹图谱方法学考察 选取 S1 样品进行方法学考察，色谱图中 10 号峰出峰时间居中，峰面积较
大，故以 10 号峰作为参照峰，计算主要峰的相对保留时间和相对峰面积。实验表明，供试品溶液在 48 h
内稳定;各峰相对保留时间的 RSD分别小于 0． 01%和 0． 02 %(n = 6) ;相对峰面积 RSD 分别小于 1．
1%和 1． 8%(n = 6)。
3． 3 指纹图谱的建立
3． 3． 1 指纹图谱的绘制 分别吸取 10 批返魂草供试品溶液 10 L，按上述色谱条件测定，记录色谱图，
用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 ”(中国药典委员会 2004A 版)进行处理，生成对照谱图(R)
(见图 1) ;共标定了 19 个共有峰(占总面积 90%以上) ，共有峰在 10 批药材中相对保留时间 RSD ＜
0． 02%，10 批样品相似度在 0． 919 ～ 0． 967 之间。
图 1 10 批样品指纹图谱和共有模式指纹图谱
Fig． 1 Chromatographic finger-prints of 10 batches of samples and common model of chromatographic fin-
ger-prints
3． 3． 2 共有峰的归属 在 2． 3 节色谱-质谱条件下，对返魂草药材供试品溶液和混合对照品溶液进行
分析，对照品与供试品溶液中相应峰的保留时间及碎片信息一致，见表 1。
表 1 共有峰的鉴定
Table 1 Identification of co-possessing peaks
峰号
Peak No．
化合物
Compound
准分子离子
Quasi
molecular ion
(m/z)
准分子离子归属
Quasi molecular
ion mod
碎片
Fragment
(m/z)
分子量
Molecular
weight
6 原儿茶酸 Prolocatechuic acid 153． 25 ［M － H］! 198． 90，189． 25，306． 89 154
10 绿原酸 Chlorogenic acid 353． 49 ［M － H］! 399． 10，707． 20 354
13 咖啡酸 Caffeic acid 179． 37 ［M － H］! 137． 27，175． 27，224． 98 180
16 金丝桃苷 Hyperin 463． 13 ［M － H］! 508． 35，576． 45，926． 22 464
17 异槲皮苷 Isoquercitrin 462． 99 ［M － H］! 508． 10，576． 47，926． 35 464
3． 4 返魂草与千里光指纹图谱对比
将相同条件下获得的千里光对照药材指纹图谱与返魂草对照图谱进行对比，千里光图谱缺少 14，
15，19 号共有特征峰;计算其相似度为 0． 702，说明二者有明显差异，见图 2。
3． 5 共有成分的测定
3． 5． 1 线性关系考察 分别取系列浓度混合对照品溶液进样测定，结果见表 2。
3． 5． 2 方法学考察 选择 S1 药材，对以上 5 种成分的测定进行方法学考察。供试品溶液在 48 h 内稳
431 分 析 化 学 第 41 卷
图 2 返魂草(S1)与千里光(S2)色谱图比较
Fig． 2 Comparison of chromatograms of Senecio cannabifolius Less(S1)and Senecionis Scandentis Herba(S2)
定;各成分峰面积 RSD(n = 6)为 0． 6% ～1． 1%; ，各成分含量 RSD(n = 6)为 0． 9% ～2． 0%;各成分回
收率为 96． 1% ～97． 9%;RSD(n = 6)为 1． 2% ～2． 0%。以上结果表明，本方法准确可靠。
表 2 各成分标准曲线
Table 2 Regression equation for different compounds
成分
Compound
线性方程
Regression
equation
线性范围
Linear range
(g)
相关系数
Correlation
coefficient
(r )
成分
Compound
线性方程
Regression
equation
线性范围
Linear range
(g)
相关系数
Correlation
coefficient
(r )
原儿茶酸
Prolocatechuic acid Y = 2838． 6x + 9． 2 0． 025 ～ 1． 25 0． 9997
金丝桃苷
Hyperoside Y = 1938x + 49． 0 0． 052 ～ 2． 61 0． 9998
绿原酸
Chlorogenic acid Y = 995． 9x + 39． 2 0． 12 ～ 6． 03 0． 9995
异槲皮苷
Isoquercitrin Y = 2126． 1x + 7． 4 0． 015 ～ 0． 759 0． 9998
咖啡酸
Caffeic acid Y = 1612． 9x + 17． 2 0． 05 ～ 2． 40 0． 9997
3． 5． 3 样品测定 按照确定的方法，对返魂草样品 5 种成分进行测定，结果见表 3。
表 3 返魂草药材的测定结果
Table 3 Contents of constituents in Senecio cannabifolius L． dispensing granules
序号
No．
原儿茶酸
Prolocatechuic cid
(mg /g )
绿原酸
Chlorogenic acid
(mg /g )
咖啡酸
Caffeic acid
(mg /g )
金丝桃苷
Hyperoside
(mg /g )
异槲皮苷
Isoquercitrin
(mg /g )
S1 0． 04 0． 77 0． 03 0． 28 0． 07
S2 0． 04 0． 70 0． 03 0． 24 0． 07
S3 0． 03 0． 77 0． 03 0． 29 0． 08
S4 0． 04 0． 90 0． 04 0． 35 0． 09
S5 0． 04 0． 41 0． 02 0． 06 0． 02
S6 0． 03 0． 64 0． 02 0． 26 0． 08
S7 0． 04 0． 54 0． 01 0． 18 0． 05
S8 0． 03 0． 16 0． 02 0． 07 0． 02
S9 0． 07 0． 23 0． 03 0． 11 0． 04
S10 0． 02 1． 04 0． 05 0． 31 0． 74
在返魂草药材中，绿原酸、咖啡酸、丝桃苷、异槲皮苷等多种成分奠定了其抗菌、抗炎、抗病毒、平喘
等功效的物质基础［9］。该指纹图谱的建立及对共有成分的分析，能够对反魂草及其混淆品进行有效鉴
别，为返魂草质量控制提供了较为理想的手段。
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High Performance Liquid Chromatographic Fingerprint and
Active Ingredient Assay of Senecio cannabifolius Less
ZHAO Chun-Fang1，LI Qing-Jie2，WANG Lian-Ping3，HE Zhong-Mei3，LIU Yong-Qiang* 2
1(Jilin University College of Pharmacy，Changchun130021，China)
2(Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130021，China)
3(Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China)
Abstract The fingerprint of Senecio cannabifolius Less was established by using high performance liquid
chromatography (HPLC)． The fingerprint of Senecionis Scandentis Herba，belonging to the same genus，was
also compared with Senecio cannabifolius Less under the same conditions． 5 co-possessing peaks were
identified by LC-ESI-MS method． The contents of the 5 co-possessing components were simultaneously
determined． The results showed that the fingerprint could be used to distinguish between the Senecio
cannabifolius Less and its adulterants，Senecionis Scandentis Herba． There were good linearities (r =
0． 9995 ～ 0． 9998) for the five components in their respective areas of concentrations． The contents of
prolocatechuic acid，chlorogenic acid，caffeic acid，hyperoside，isoquercitrin of the 10 batches samples were
0． 03 － 0． 07 mg /g，0． 16 － 1． 04 mg /g，0． 01 － 0． 05 mg /g，0． 07 － 0． 35 mg /g，and 0． 02 － 0． 74 mg /g，
respectively． This method is suitable for the quality assess and identification of Senecio cannabifolius Less．
Keywords Senecio cannabifolius Less;Fingerprint;High performance liquid chromatography;Liquid
chromatography-electrospray ionization mass spectrometry analysis
(Received 18 June 2012;accepted 21 August 2012)
631 分 析 化 学 第 41 卷