全 文 ：国药鉴别
收稿日期:2010-09-26; 修订日期:2011-01-30
基金项目:国家自然科学基金(No． u0732004) ;
广东省自然科学基金(No． 9451040701003211)
作者简介:孙 琳(1984-) ，女(汉族) ，山西长治人，现任为广州中医药大
学中药学院在读博士研究生，主要从事中药新药研究与开发工作．
* 通讯作者简介:赖小平(1960-) ，男(汉族) ，广东饶平人，现任广州中医
药大学中药学院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事中药新药研
究与开发工作．
云南地区木豆叶的高效液相色谱指纹图谱研究
孙 琳1，黄 松1，2，赖小平1，2* ，吴 玲1，李锦清1
(1．广州中医药大学，广东 广州 510006;
2．广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东 东莞 523808)
摘要:目的 采用高效液相色谱法对来自云南的 12 个不同品种木豆叶药材进行指纹图谱研究，为木豆叶药材质量控制提
供依据。方法 采用 Diamonsil C18(2) (250 mm ×4． 6 mm，5 μm ) ，以甲醇 － 1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱，流速 1． 0
ml·min －1，柱温 40℃ ，检测波长 268 nm。结果 以 11 个共有峰为评价指标，精密度和重复性试验中各共有峰相对保留
时间和相对峰面积的 RSD均小于 5% ，12 批样品相似度大于 0． 9。结论 此方法精密度、稳定性和重复性良好，有助于木
豆叶药材的质量控制。
关键词:木豆叶; 指纹图谱; 高效液相色谱法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 096
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)09-2253-02
Fingerprint of Pigeonpea Leaves by HPLC
SUN Lin1，HUANG Song1，2，LAI Xiao-ping1，2* ，WU Ling1，LI Jin-qing1
(1． Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China;2． Dongguan Methemati-
cal and Engineering Research Institute，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Dongguan
523808，China)
Abstract:Objective To establish the fingerprint chromatograms for quality evaluation of 12 species Pigeonpea leaves collected
from Yunnan by HPLC．Methods The analysis was performed on a Diamonsil C18 column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm )with Metha-
nol － 1% HAc as mobile phase in a gradient mode at a flow rate of 1． 0 ml /min，and at a column temperature was 40℃，and the
detection wavelength was 268 nm． Results All peaks were selected as the common fingerprint peaks． The relative standard devia-
tions for relative retention times and relative peak areas were less than 5% in the precision and repeated test，the similarity of l2
batches of samples were not less than 0． 9． Conclusion The method is reliable and can be used for the quality control of Pigeonpea
leaves．
Key words:Pigeonpea leaves; Fingerprint; HPLC
木豆叶为豆科植物木豆 Cajanus cajan(L．)Millsp 的干燥叶
片。药材主要分布于长江以南的海南、云南、广西、贵州、广东以
及福建、湖南、四川、江西、浙江、台湾等省区，可用于治疗股骨头
坏死、烧伤、褥疮等。目前，多采用牡荆苷、异牡荆苷作为药材的
质量控制指标，但不能反映药材中其他成分的情况。鉴于色谱指
纹图谱的方法可以有效地评价药材质量，故本试验采用反相高效
液相色谱法，建立木豆叶药材的指纹图谱，并对来自云南的不同
品种间的木豆叶药材进行比较研究，为其鉴别与质量控制提供了
参考。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪［型号:LC － 20A (UV/
Vis) ］;Sartorius 万分之一电子天平(型号:BSA224S － CW) ;Sarto-
rius 十万分之一电子天平(型号:CP225D) ;数控超声清洗器(型
号:KQ5200DA)。
1． 2 药品 甲醇(天津市大茂化学试剂厂，分析纯;德国 Merck
公司，色谱纯)、乙醇(天津市大茂化学试剂厂，分析纯)、冰乙酸
(天津市大茂化学试剂厂，分析纯)、重蒸去离子水(实验室制
备) ;牡荆苷对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号:
111687 － 200602) ;木豆叶药材(药材采于云南元谋县，由广州中
医药大学中药学院赖小平教授鉴定)。来源见表 1。
表 1 不同品种木豆叶来源
序号 编号 来源 采集时间
1 CAF4 云南 2010-04
2 CAF5 云南 2010-04
3 CAF6 云南 2010-04
4 CAF7 云南 2010-04
5 CAF8 云南 2010-04
6 CAF9 云南 2010-04
7 CAF10 云南 2010-04
8 CAF11 云南 2010-04
9 ICPB 2047 云南 2010-04
10 ICPH 2671 云南 2010-04
11 ICP 7035 云南 2010-04
12 ICPI 1376 云南 2010-04
2 方法与结果
2． 1 色谱条件及系统适用性 色谱柱:Diamonsil C18(2) (250 mm
×4． 6 mm，5 μm ) ;MeOH(A)－ 1%HAc(B)为流动相梯度洗脱:
0 ～ 10 min(10%A ～20%A) ，10 ～ 40min(22%A ～24%A) ，40 ～ 65
min(24%A ～33%A) ，65 ～ 80 min(33%A ～ 70% A) ，80 ～ 100 min
(70%A ～80%A) ，100 ～ 115 min(80% A ～ 93% A) ，115 ～ 125 min
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期
(100%A) ;流速:1． 0 ml·min －1;柱温:40℃;进样体积:10 μl;检
测波长:268 nm。
2． 2 对照品溶液的制备 取牡荆苷对照品适量，用甲醇制成每毫
升含 40． 4 μl的溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 取各批木豆叶药材粉末约 5． 0 g，精密
称定，置于锥形瓶中，精密加入蒸馏水 100 ml，回流提取 1 h，放
冷，过滤，滤液用蒸馏水定容至 100 ml，过 0． 45 μm 微孔滤膜，即
得。
2． 4 测定方法 分别精密吸取供试品溶液 10 μl ，注入液相色谱
仪，记录 120 min色谱图即得。
2． 5 精密度实验 取同一供试品溶液，连续进样 5 次。结果表
明，色谱图中各色谱峰的相对保留时间的 RSD 小于 0． 1% ;相对
峰面积的 RSD小于 3% ，符合指纹图谱要求，表明仪器精密度良
好。
2． 6 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在 0，2，6，18，24 h 进
样测定，结果表明，各主要色谱峰的相对保留时间的 RSD 小于
0． 5% ，相对峰面积的 RSD小于 2% ，表明供试品溶液在 24 h内
稳定。
2． 7 重复性实验 取同一批号的药材 5 份，照供试品溶液制备方
法制备，进样检测，结果表明各色谱峰的相对保留时间的 RSD 小
于 0． 5% ;相对峰面积的 RSD 小于 5% ，表明方法的重复性良
好。
2． 8 指纹图谱的建立及分析
2． 8． 1 木豆叶药材 HPLC指纹图谱中共有峰的标定 将 12 批木
豆叶药材的指纹图谱进行匹配(见图 1) ，结果表明 1 ～ 11 号峰在
12 批样品的色谱图中均出现。因此标定此 11 个峰为共有指纹
峰，并据此建立木豆叶药材的 HPLC指纹图谱结果见图 2。
2． 8． 2 共有指纹峰保留时间和峰面积与参照物保留时间和峰面
积的比值 以牡荆苷色谱峰的保留时间和峰面积为 1，计算其它
各峰的相对保留时间和相对峰面积。相对保留时间的 RSD 小于
1． 0%(n = 12，结果见表 2)。相对峰面积结果见表 3。由表 2 和
表 3 可见，各批供试品指纹图谱的重现性较好，但各批样品间共
有指纹峰的相对峰面积有一定差异。
图 1 1 ～ 12 批木豆叶药材指纹图谱
①图中 S峰为牡荆苷，作为参照峰
②图中 1 ～ 11 号色谱峰为峰面积较大的 11 个色谱峰
图 2 木豆叶对照指纹图谱
表 2 12 批木豆叶药材共有指纹峰的相对保留时间
成分
不同批次编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
RSD(%)
1 0． 582 8 0． 582 7 0． 583 9 0． 585 2 0． 583 3 0． 583 1 0． 582 0 0． 583 4 0． 583 1 0． 583 3 0． 582 9 0． 582 3 0． 141 5
2 0． 645 6 0． 645 4 0． 645 7 0． 647 5 0． 645 1 0． 645 1 0． 645 2 0． 645 2 0． 645 0 0． 645 3 0． 644 9 0． 645 5 0． 106 2
3 0． 663 3 0． 663 1 0． 663 4 0． 665 4 0． 662 8 0． 662 8 0． 662 9 0． 662 8 0． 662 7 0． 663 0 0． 662 6 0． 663 2 0． 111 1
4 0． 783 4 0． 783 4 0． 783 6 0． 784 8 0． 783 2 0． 783 3 0． 782 8 0． 783 1 0． 783 2 0． 783 3 0． 783 0 0． 783 5 0． 065 0
5 0． 813 0 0． 813 0 0． 813 6 0． 815 1 0． 812 9 0． 813 0 0． 813 0 0． 812 8 0． 813 0 0． 813 4 0． 812 7 0． 813 3 0． 077 4
6 0． 873 2 0． 873 2 0． 873 5 0． 857 8 0． 872 9 0． 873 3 0． 873 2 0． 873 1 0． 873 2 0． 873 7 0． 872 9 0． 873 7 0． 510 8
7 1． 058 9 1． 059 0 1． 058 4 1． 058 2 1． 058 4 1． 058 5 1． 059 1 1． 058 7 1． 058 9 1． 058 9 1． 059 0 1． 058 9 0． 000 0
8 1． 126 2 1． 126 3 1． 126 3 1． 124 7 1． 126 1 1． 126 0 1． 126 3 1． 126 7 1． 126 5 1． 126 6 1． 126 4 1． 126 0 0． 027 8
9 1． 185 2 1． 185 2 1． 184 5 1． 182 0 1． 186 7 1． 185 8 1． 186 1 1． 185 5 1． 186 9 1． 186 4 1． 183 9 1． 184 1 0． 047 0
10 2． 016 2 2． 017 0 2． 018 9 2． 008 0 2． 017 4 2． 015 7 2． 011 9 2． 018 2 2． 017 2 2． 008 6 2． 019 1 2． 010 0 0． 117 6
11 2． 407 0 2． 407 7 2． 410 8 2． 394 5 2． 408 4 2． 406 3 2． 402 5 2． 409 3 2． 408 4 2． 398 1 2． 410 0 2． 399 7 0． 202 9
表 3 12 批木豆叶药材共有指纹峰的相对峰面积
成分
不同批次编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0． 756 0 0． 796 0 2． 696 2 2． 698 2 1． 773 2 2． 495 9 3． 041 4 2． 864 8 2． 474 6 1． 419 3 1． 941 7 0． 928 1
2 0． 503 9 0． 530 8 2． 331 8 2． 587 8 2． 038 2 3． 003 4 1． 651 9 2． 677 7 2． 606 7 1． 921 1 2． 053 0 0． 509 6
3 0． 783 6 0． 889 4 3． 959 7 3． 853 2 3． 020 0 4． 379 0 2． 640 3 3． 997 2 3． 881 5 2． 659 0 3． 040 0 0． 833 7
4 0． 940 4 0． 952 4 3． 548 4 3． 469 2 2． 996 4 3． 564 8 5． 066 4 3． 329 7 3． 215 2 2． 036 7 2． 188 1 0． 710 9
5 1． 319 6 1． 312 2 4． 025 6 3． 889 2 2． 870 9 4． 063 6 3． 146 8 3． 764 7 3． 627 8 2． 774 3 3． 847 7 1． 649 3
6 1． 585 2 1． 604 6 4． 631 2 1． 357 5 3． 263 0 4． 444 8 3． 714 7 4． 488 5 3． 985 9 3． 370 1 4． 717 6 2． 022 9
7 0． 300 1 0． 290 9 1． 254 4 1． 751 0 1． 426 8 2． 210 1 0． 655 6 1． 837 2 1． 936 4 1． 792 2 0． 958 4 0． 452 0
8 0． 293 1 0． 313 6 0． 893 5 0． 864 0 0． 719 3 0． 947 3 0． 691 9 0． 861 3 0． 988 8 0． 803 1 0． 894 7 0． 434 2
9 1． 179 5 1． 114 7 0． 877 6 1． 067 8 1． 102 5 1． 022 7 0． 746 6 1． 042 0 1． 136 1 0． 781 3 0． 965 0 1． 210 5
10 0． 927 8 0． 828 7 4． 598 3 4． 443 6 1． 646 3 2． 783 9 3． 007 8 3． 226 5 4． 006 8 1． 508 9 1． 677 3 0． 622 1
11 0． 650 1 0． 525 4 1． 857 0 1． 989 8 0． 445 5 0． 537 7 1． 213 4 1． 214 0 1． 341 3 1． 220 5 1． 320 5 0． 157 1
2． 8． 3 相似度分析 将色谱工作站数据导入国家药典委员会中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版，通过相似度计算软件
得出木豆叶指纹图谱的共有模式，并以此共有模式为标准，对每
批药材进行相似度评价，结果见表 4，表明云南地区不同品种间
木豆叶相似度较高。
3 讨论
3． 1 色谱条件及系统适用性 考察取木豆叶药材供试品溶液进
行紫外扫描，结果表明在波长 268 nm和 330 nm有较强的吸收且
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9
在 268 nm有最大吸收。检测波长在 268 nm 时，色谱峰较多，基
线平稳，各峰分离度较好。试验过程中选择了多种流动相系统:
甲醇 －水，乙腈 －水，乙腈 － 1%冰醋酸水溶液，甲醇 － 1%冰醋酸
水溶液梯度洗脱几种方式，并对梯度洗脱程序进行优化，结果表
明以甲醇 － 1%冰醋酸水为流动相梯度洗脱为最佳，各色谱峰分
离度较好，峰型尖锐，保留时间适中。在色谱柱的选用上，对不同
品牌色谱柱进行考察，Diamonsil C18(2) (250 mm ×4． 6 mm，5 μm
)相对于另外 4 种色谱柱 phenomenex synergi 4μFusion － RP 80
(250 mm × 4． 6 mm，5 /an)、PlatisilTM ODS(250 mm × 4． 6 mm，
5μm)、Kromasil 100 － 5 C18(250 mm x 4． 6 mm，5 μm)、Capcell Pak
C18 UG120 S5(250 mm ×4． 6 mmI． D．)而言，出峰数量较多，分离
度高，峰形对称性好，故选用 Diamonsil C18(2) (250 mm × 4． 6
mm，5 μm )色谱柱。
表 4 木豆叶指纹图谱相似度结果
计算
方法
不同批次编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
中位数 0． 922 0． 934 0． 951 0． 956 0． 938 0． 948 0． 944 0． 960 0． 948 0． 940 0． 951 0． 914
均值 0． 945 0． 955 0． 960 0． 966 0． 953 0． 952 0． 945 0． 971 0． 954 0． 955 0． 961 0． 933
3． 2 供试品溶液制备方法的选择 实验中比较了水提，水提 －石
油醚萃取和水提 －石油醚萃取 －不同浓度醇沉提取样品，结果显
示，其出峰数量、峰形及分离度均无明显差别，因此选用最为简便
的水提法制备供试品溶液。
3． 3 参照峰的选择 木豆叶的主要成分为黄酮，目前其含有的黄
酮类化合物已知的有:牡荆苷、异牡荆苷、木犀草素、芹菜素、柚皮
素 － 4，7 二甲醚等，均属于黄酮类衍生物。从木豆叶对照指纹图
谱(图 2)上可以看出，牡荆苷的峰高适中，与相邻峰的分离度较
好，故定为参照峰。
实验结果表明，通过指纹图谱整体图形、共有特征峰、相对保
留时间等参数可对药材进行鉴定，通过各共有峰相对峰面积可对
药材的内在质量进行评价。从 12 批木豆叶药材指纹相似度结果
可以看出，同一产地不同品种的木豆叶指纹图谱相似度较高，均
大于 0． 9。但是，各峰相对峰面积有一定的差异，说明药材之间
的内在质量是有差异的，揭示药材应在保证产地和品种相同的前
提下才能保证药品内在质量的一致性。同时，所采集的 12 个木
豆叶品种中包括云南现有品种及新培育的高产高抗虫性品种，本
实验结果表明，新品种与原有品种在化学成分及整体质量方面具
有一致性，在保证质量稳定的前提下，为木豆新品种的进一步培
育提供了依据，并且也为木豆叶的质量评价提供了全面的分析方
法。
参考文献:
［1］ 陈思妮，张振秋． 广金钱草 HPLC 指纹图谱的研究［J］． 中成药，
2008，30(9) :1249．
［2］ 胡轶娟，朱 军，万 丽．决明子 HPLC 指纹图谱研究［J］．中国中医
药科技，2008，15(5) :365．
［3］ 黄月纯，席 萍，唐洪梅． 袁氏生脉成骨片 HPLC 指纹图谱的初步
研究［J］．中药新药与临床药理，2004，15(6) :410．
［4］ 李正红，潘学政，周朝鸿，等．云南地方栽培木豆群体数量性状变异
分析［J］．林业科学研究，2004，17(5) :547．
收稿日期:2010-10-11; 修订日期:2010-12-30
基金项目:科技部社会公益研究专项(No． 2005DIBIZ169)
作者简介:李先端(1955-) ，男(汉族) ，陕西山阳人，现任中国中医科学院
中药研究所研究员，主要从事中药质量研究工作．
中药炮制辅料炼蜜中成分测定及鉴别
李先端，钟银燕，毛淑杰，顾雪竹，钮正睿
(中国中医科学院中药研究所，北京 100700)
摘要:目的 对中药炮制辅料炼蜜中水分、酸度、密度、淀粉酶活性等进行测定及鉴别。方法 主要根据食品国标、药典等
方法。结果 炼制蜂蜜的温度、时间等对以上成分影响较大。温度、时间增加，水分、酶值降低，酸度、密度增加。结论 作
为炮制用炼蜜应对蜂蜜的炼制工艺进行优选，以保证辅料炼蜜的质量及被炮制饮片的质量。
关键词:炼蜜; 密度; 酸度; 酶值; 含量测定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 097
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2255-03
蜂蜜是中药炮制常用的辅料之一，传统认为中药用蜂蜜炮制
有增强润肺止咳、补中益气、缓和药性的作用。现代研究表明，蜂
蜜炮制可以增加某些药材中苷元的溶解度，帮助溶解，促进吸收。
此外蜂蜜中的大量转化糖具有还原性，能防止药材中的有效成分
氧化变质，从而保证药品的质量。从古至今，中药蜜丸、炮制辅料
用蜂蜜都要经过炼制，成品俗称“炼蜜”。由于炼蜜目前没有统
一工艺规定和质量要求，各地企业所采用的炼蜜温度、时间等都
不一样，导致炼蜜质量的不同。前文研究已经发现蜂蜜炼制温
度、时间对蜜的糖类、5 －羟甲基糠醛有明显影响［1，2］，那么炼蜜
对其中所含其它成分影响如何?参照国家食品蜂蜜标准
(GB18796 － 2005)方法，选取自炼蜜及饮片厂用炼蜜 21 个样品，
对炼制后蜂蜜中含水量，密度，酶值、酸度等指标进行测定，为进
一步探讨炼蜜温度等因素对蜂蜜成分的影响，确定炮制辅料用蜜
的最佳炼制工艺奠定基础。
1 材料
阿贝折色仪，北京计量检测科学研究所;超级恒温器(501
型) ，上海实验仪器厂;马弗炉;分光光度计(Fabrmgne on /
95335DDomont cedex Type:ANTHELIE junior) ;恒温水浴锅，北京
分析仪器厂;酚酞指示剂，1 mol /L NaOH 标准溶液;硅胶 G 板
(青岛海洋化工厂预制版) ;试剂均为分析纯。实验用蜂蜜来源:
河北荆条蜜(生蜜)购于良乡金蜂蜂业有限公司，含水量为
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期