全 文 ：第 6卷 第1 期 现 代 应 用 药 学1 98 9 年2 月
不同来源的裂褶菌子实体及发酵培养的
菌丝体中氨基酸与无机元素分析
浙江省医学科学院
浙江省药品检验所
王凤仙
唐红芳
黄宗玉
夏志俊 江 月仙
王悟申
摘 要 本文报道野生与人工栽 培的裂褶菌子 实体及发酵培养 的菌丝体中氨基酸与无机元素的分 析 测
定 。 结果表明 , 三种不 同来源的材料均含有所测定的 1 5种氮基酸 , 1 2种无机元素 ( 3 种常 量元素和 9 种微 量元 素 ) 。
了种必需氨基酸 (色氮酸未测 )组成齐全 , 人体必需的微量元素 铁 、 铜 、 锌 、 硒的含量丰富 。
裂 褶 菌 ( S e h i z o P h y l lu m e o m m u en
F r le s) 属担子菌纲 , 伞菌 目 , 伞菌科 , 伞菌族 。
据文献记载 , 其子实体具有滋补 、 强身作用 ,
内含一种抗癌物质 [`〕。 日本研究者从裂褶菌
的培养物中提取的裂褶菌多糖 s( P G ) 已作为
抗肿瘤剂生产并试用于临床 [“ 1。 近年又有报
道裂褶菌具有抗菌作用 , 是一种正在开发利
用的药用真菌 。 关于裂褶菌的生物活性物质 ,
目前国内外研究较多的是多糖 , 而对其所含
氨基酸与无机元素组成报道甚少 [“ ] , 尤其是
有关人工栽培子实体与发酵培养的菌丝体中
氨基酸及微量元素组成尚未见报道 。 为进一
步研究裂褶菌的药效成分 , 了解不同来源材
料的氨基酸与无机元素组成情况 , 我们测定
了裂褶菌的野生 、 人工栽培子实体及发酵培
养的菌丝体中 15 种氨基酸 , 3 种常量元素及
9 种微量元素的含量 。
材料与方法
一 、 材料来源
1
。 野生子实体 。 8 年 6月采集于杭州大
学生物系校园内及省医科院内枯木上 。
2
. 人工栽培子实休 。母种来自中国科学
院微生物研究所 。 作者以静止培养 5 天的液
体种子接入木屑培养基内 , 于 20 ~ 25 ℃培养
3。天 , 采集子实体 。
3
. 摇瓶发酵培养的菌丝体 。 斜面菌种与
人工栽培子实体的母种相同 。 蛋 白膝液体培
养基 , 摇床转速为 10 转 /分 , 25 ℃培养 10 天
收集菌丝体 。
二 、 浦定方法
(一 ) 样品的前处理
将所采集的野生与人工栽培的裂褶菌子
实体先用自来水冲洗干净 , 再以蒸馏水冲洗
3 次以上 , 菌丝体以蒸馏水洗涤抽滤至少 3
次 , 以除去附着的培养液 。 将上述三种样品
于 70 ~ 80 ℃烘干 , 研粉备用 。
(二 ) 样品测定
1
. 氨基酸测定
精密称取 约 80 m g 样 品 , 以 6 N H C I
10 5℃水解 2 4小时 , 然后于蒸汽浴上挥发除去
H C I
,蒸至 p H 2 . 0 ~ 2 。 5 , 将浓缩液收集于 5 0
m l 容量瓶内 , 稀释至刻度 , 待测 。
用岛津 L C一 3A 型氨基 酸自动分析仪进
行测定 , 通过C一 R IB型数据处理机用外标法
求得结果 。
DOI : 10. 13748 /j . cnki . i ssn1007 -7693. 1989. 01. 007
表2 无机元素测定结果( ug /g )
0 85 2 1初3 分舫 0 86 43 62 1 41 90 16。
念. 无机元素测定
( ) 1精密称取干燥样 品 0. 2 9, 置压力
消解器中 , 加入消解 液 ( H N。 。组 : O : ) , 在
12 0℃消解 6 小时 至 澄清 , 用蒸馏水定容至
2 5 m l
, 待测。
」 采用原子吸收光谱法。 其中钾 、 钠 、 钙 、
铜 、 锌 、 铁 、 锰之镐 8 种元素用火焰法 , 锡 、
镍 、 钻 3 种元素用石墨护法。
仪器 原子吸收火焰分光光 度 计 A A二
67 0型 (日本岛津 ) 。 ·
(2 ) 元素硒的测定
精密称取干燥样品 0 . 5~ 1 . 5 9 , 用混合
酸 ( H N 0 3一 H 2 5 0 4一 H C 10 ` ) 消化 , 依次加入
E D T A
、
10 % 盐酸轻胺 、 2 , 3一二氨基蔡 、
( D A N ) 溶液 , 然后以环己烷萃 取 。 在激发
光波长为 3 79 n m ,发射光波长为 52 n m条件
下测定样品的荧光强度 , 计算出硒的含量 。
仪器 日本岛津 R卜 540 型荧光分光光
度计。
表 1 氛基酸测 定结果 (m g八 0 9)
~氮六凡 1 2 3
1 9 2
.
1 0
1 9 9
.
8 0
1 0 58
.
5 0
1 5 1 3
1 2 8
、
5 0
3 5
,
1 3
1凌. 7 5
0
。
2 5
5
。
3 8
0
.
4 3
6
.
8 8
0
.
0 51
奋
8 3
.
0 0
2 0 9
,
5 0
2 5 1
.
9 0
1 8
.
6 3
5 8
,
3 8
5 1
。
4 8
5
。
6 3
0
。
6 3
6
,
8 8
0
.
31
1
.
2 5
0
.
1 4 7 0
.
2 42
钾钙钠铜锌铁锰福镍拐钻硒
7148“5309邸2劝能翁天 门 冬 氮俄
苏 纸 酸
丝 纸 徽
谷 氮 酸
甘 氨 酸
丙 氮 酸
绷 氮 敌
蛋 纸 娘
异 亮 氛 酸
亮 氮 酸
酪 纸 限
笨 丙 氮 故
组 氛 酸
较 拭 一 故
精 氛 酸
鱿 基 酸 总 盆
必擂组基酸总盆 ,
必需戴签酸占
氨塞酸总量%
8 5 4
。
4 54
.
4 42
。
8 8 7
.
4 1 1
.
55 4
,
4 7 5
.
4 1
。
4 0 5
.
6 8 3
.
1 2 2
。
1 6 5
。
1 2 1
.
3 8 7
.
5 3 2
。
65 4 2
.
2 6 14
-
1 16 2
.
3 4
5 7了. 2 1
56 2
.
1 0
1 6 3今. 3 4
5 1 2
.
6 0
73 3
.
8 3
5 8 3
.
2 8
1 4 1
.
5 3
4 8 5
.
9 3
8 6 6
.
8 2
3 68
.
8 0
39 4
.
5 3
么01 . 9马
54 4
.
4 2
8 55
.
1匀
96 2 9
.
9 1
3 59 3
.
7 2
9 5 6
.
46
斌宁牙. 石5
4 2 3
.
3 6
1 1 0 8 0 8
5 2 6
.
3 6
6 6 5
.
2 1
4 56
.
2 5
1 9 0
。
3 9
4 0 1
.
8 2
7 0 4
.
2 3
1尽0 。 66
2 2 4
.
6 6
1 7 7
.
04
4 5 7
.
3 0
7 2 3
.
5 7
7 6 7 4
。
9 4
2 9 1 4
。
2 0
3匀. 9 6 3 7 。 3 2 3 7 . 马7
结果与讨论
氨基酸与无机元素测定结果分别列于表
1 和表 2 。
1
。 由表 1 可见 , 无论是野生 、 人工栽培
的子实体或是发酵培养的菌丝体中均含有所
测定的 15 种氨基酸 , 其中 7种必需氨基酸 (色
氨酸未测 )组成齐全。 氨基酸总量以人 工 栽
培的子实体为最高 , 其次是发酵菌丝体 , 7
种必需氨基酸总量高低次序亦同 。 必需氨基
酸占氨基酸总量的百分数 , 人工栽培子实体
与发酵菌丝体基本一致 , 野生样品略高于前
二者。
2
. 表 2结果表明 , 三种不同来源的样品
均含有所测定的 12 种无机元素 , 且人体必需
的微量元素铁 、 铜 、 锌和硒的含量丰富。 微
量元素在人体生命活动中的重要作用已越来
越引起人们的注意 , 铁是血红蛋白的重要组
成部分 , 缺铁将导致贫血 , 铜参与造血过程
及多种酶的合成 ; 锌与几十种酶 的活 性 有
关 。 硒是“ 种对人体健康有重要意义的微量
元素 , 是人体某些酶 (如谷胧甘肤过氧 化 物
酶 )的组分之一 , 它具有促进抗体生成和对抗
一些重金属的毒性作用 , 参与多种重要的生
理生化活动 , 能使某些致癌物质的代谢活性
.
1 9
.
降低 [弓 ]。 山东医科大学近年研究发现 , 缺硒
是导致肝硬化 、 肝癌的一个重要因素 。可见 ,
硒是防癌 、 抗癌的重要元素。 裂褶菌具有滋
补 、 强身 、 抗癌作用 , 除与它含有能增强免
疫作用的多糖外 , 可能与它含有丰富的微量
元素 , 特别是硒的含量较 高也有 一 定 的 关
系 。
3
。 从测定结果来看 , 人工栽培子实体及
发酵菌丝体中 12 种元素含量与野生子实体含
量比较有高有低 , 呈不规则关系 。如元素钾 、
钙 、 铁 、锰 、 钻的含量较野生低 , 其他元素含
量接近或偏高 。 尤其是人休必需的微量元素
铜 、 锌 、 硒的含量为野生样品的 1 . 23 一 4 . 80
倍 。
综合氨基酸与微量元素分析结果 , 本研
究为裂褶菌的进一步开发利用和以人工栽培
子实体及发酵培养物代替野生资源 , 提供了
一定的科学依据。
4
. 氨基酸 、 微量元素的种类与 含量 ,
对野生材料来讲 , 可能因采集地点、 采集季
节不同而有差异 , 人工栽培或发酵培养材料
也可能因菌株 、 培养基组成 、 培养时间等条
件不同而不同 。 因此 , 研究改变上述条件 ,
结合生物技术就有可能提高所需 组 分 的 含
量 ,降低无用或有害组分 (如元素镐 )的含量 。
这方面工作值得进一步研究探讨 。
参 考 文 献
仁 1 3 刘波 : 中国药用真菌 第二版 , 太原 , 山西人 民
出版社 , 1 07 8 , 2 0 9一 2 1 0。
〔 2 〕 胡润生等 : 国外药讯 , 1 9 8 6 1 4 : 2 3 。
〔 3 〕 朱泉娣 : 中草药 , 1 9 86 , 1 7 ( 8 ) . 1 7。
〔 4 〕 王魏等 . 生物无机化学 , 第一版 , 北京 , 清 华大
学出版社 , 1匀38 , 1 9 7一 2 0 5。
致谢 : 本文经浙江省医学科学院药物所刘 良 初 副
研究员审阅 , 并提出宝贵意见 , 特此致 谢 。
A n a l y s i s o f A m i n o A e id s a n d I n o r g a n i e E l e m e n t s i n
L i e z h e ju n ( S
c h i z o P h y l l。 。 , e o 。 。 u n e ) f r o m
D i f f e r e n t S o u r s e a 八 d C u l t u r a l M y e e l i u m
W
a n g F e n g x i a n e t a l
.
( Z h e j i
a n g A e a d e爪 y o f M e d i e a l S e i e n e。 , H a n g e h o w )
H u a n g Z o n g y u
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e j i a n g P r o v i n c i a l I n s t i t u t e f o r D r u g C o n t r o l
, 荃丁a n g e h o w )
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T h i 3 p a P e r r e P o r t e d t h e a n a l y s i s o f a m i
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·
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芯。尸人, 11。 。 : e o用仍 u 。 召 ) f r o m w i l d a n d e u l t iv a t e d s p e e ie s a n d m y e e l i u m o f f e r m e n t a t io n . T h e r e s u l t s
s圣一o w e d t h a t a l l s a m P l e s f r o m d i f f e r e n t 5 0 一i r s e s c o n s i s t o f 1 5 a m i n o a e id s a n d 1 2 i n o r g a n i e e l e m -
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T h e e o m P o s i t i o n o f 7 n e e e s s a r y a m i n o a e i d s ( e x e e P t f o r t r y
.
) w a s e o m P l
e t e a n d t h
e e o x卜
t e n t s o f t r 纽 e e e l e m e n t s F e , 〔: u , Z e a n d S e w e r e r 呈e h .
.
2 0
·