全 文 ：第 46卷 第 5期 海 洋 与 湖 沼 Vol.46, No.5
2 0 1 5 年 9 月 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Sep., 2015

*宁波市重大(重点)科技攻关计划项目, 2012C10035号。王丹妮, 硕士研究生, E-mail: 1260870118@qq.com
① 通讯作者: 刘军, 副教授, E-mail: liujuncjlu@163.com
收稿日期: 2015-07-29, 收修改稿日期: 2015-08-21
蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)两种Wap65
基因克隆及蛋白功能的研究*
王丹妮1 郑春静2 江婷佳1 刘 军1①
(1. 中国计量学院 杭州 310018; 2. 宁波市海洋与渔业研究院 宁波 315010)
摘要 采用同源克隆及 Race 技术获取了蓝点马鲛 Wap65-1 和 Wap65-2 基因的 cDNA 全长序列,
长度分别为 1659 bp和 1725 bp, 各自编码 426和 436个氨基酸。通过 ClustW同源性及进化树分析
表明: 蓝点马鲛 Wap65-1与 Wap65-2基因的同源性为 60%, 处于不同的分支上。进一步对该鱼的幼
体进行热诱导, 通过 qRT-PCR分析表明: 两种基因在高温诱导下均有上调, 而 Wap65-2基因上调呈
现显著性差异(P<0.05)。在此基础上, 构建两种基因冷休克表达系统, 成功实现了两种蛋白的可溶性
表达, 而且发现 Wap65-2对高温胁迫下 E. coli BL21 (DE3)的存活具有较强的保护作用。本研究为蓝
点马鲛耐热品种的培育奠定了理论基础。
关键词 蓝点马鲛; Wap65; 基因克隆; 表达; 功能研究
中图分类号 Q78 doi: 10.11693/hyhz20150700206
Wap65蛋白(Warm temperature acclimation 65kDa
protein)是血浆蛋白的一种, 最早发现于金鱼、鲤鱼体
内(Kikuchi et al, 1995)。实验结果表明, 金鱼和鲤鱼
在高温诱导下, 有一种分子量为 65kDa的蛋白大量存
在于各组织中, 被命名为 Wap65, 此蛋白与哺乳动物
的血红素结合蛋白高度同源 (Altruda et al, 1985;
Nikkila et al, 1991; Morgan et al, 1993; Tolosano et al,
2002)。研究发现, Wap65基因在不断进化中, 由于受
到串联机制和全基因组重复的影响(Sha et al, 2008),
产生了两种不同的异构体, 分化为两种蛋白, 分别为
Wap65-1 和 Wap65-2。目前, 已经在许多鱼类发现了
该基因, 鳉包括青 鱼(Hirayama et al, 2004)、蓝鲶鱼
(Peatman et al, 2008)、斑点叉尾 (Sha et al, 2008)、剑
尾鱼(Aliza et al, 2008) 鲀、红鳍东方 (Hirayama et al,
2003)、真裸南极鱼(Clark et al, 2008)、香鱼(Shi et al,
2010)、鲈鱼(Sarropoulou et al, 2010)、大鳞泥鳅(Cho
et al, 2012)等。
蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)属于辐鳍亚
纲、鲈形目、鲭亚目、鲭科、马鲛属, 广泛分布于北
太平洋西部, 在我国产于东海、黄海和渤海, 在南海
以海南文昌铺前附近海域最为著名。由于近年来人们
对蓝点马鲛的肆意捕捞以及环境不断恶化 , 导致蓝
点马鲛的产量急剧减少 , 目前已经在中国宁波象山
建立了蓝点马鲛的保护基地。蓝点马鲛属近海温水性
洄游鱼类 , 因此高温是蓝点马鲛的生存及生产的重
要因素之一。
在 NCBI数据分析中发现, 对蓝点马鲛Wap65的
研究主要集中在微卫星的研究上 , 本研究通过克隆
Wap65-1和Wap65-2的基因全长序列, 并表达相应蛋
白, 研究其功能, 以期为蓝点马鲛耐热品种的培育提
供资料。
1 材料与方法
1.1 材料
2014 年 5 月在浙江省宁波市象山港捕捞蓝点马
鲛样本 12尾[平均重(750±5)g], 取头、肌肉、肝脏、
脾脏、头肾这 5 个组织迅速投入液氮中保存, 根据
TRIzol® Plus RNA Purification Kit (Invitrogen)提取上
5期 王丹妮等: 蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)两种 Wap65基因克隆及蛋白功能的研究 1053

述 5 个组织的总 RNA(步骤见说明书 ), 并采用
SuperScriptTM Fist-Strand Synthesis Kit 逆转录为
cDNA, 并保存于–20°C冰箱备用。热诱导实验所用的
鱼苗来自宁波市海湾苗种繁育中心, 共取 24 尾[平均
重(1.0±0.2)g], 热处理后, 保存于液氮中备用。
1.2 方法
1.2.1 Wap65-1 和 Wap65-2 基因全长的克隆 根
据 NCBI 中黑棘鲷(Acanthopagrus schlegeli)、花鲈
(Lateolabrax japonicus)、条石鲷(Oplegnathus fasciatus)
的 Wap65-1以及真裸南极鱼(Harpagifer antarcticus)、
花鲈(Lateolabrax japonicus)、 鱼(Miichthys miiuy)的
Wap65-2氨基酸序列, 利用 ClustalW对以上序列进行
保守性分析并分别设计简并性引物(见表 1)。
以蓝点马鲛肝脏 cDNA 为模板, 巣采用 式 PCR
(第一轮引物采用 F1和R1, 第二轮引物采用 F2和R2),
克隆 Wap65-1 和 Wap65-2 的部分片段 , 采用
Platinum® PCR SuperMix High Fidelity酶(Invitrogen),
进行两轮 PCR, 体系为 25μL, 反应条件均为: 94°C预
变性 2min; 94°C 30s, 62°C 30s, 68°C 2min, 38个循环,
产物保存于–20°C。
然后根据已获得的 Wap65-1 和 Wap65-2 基因部
分片段分别设计 3′和 5′RACE特异性引物(见表 1), 利
用 Gene RACETM Kit 扩增得到 cDNA 全长。第一轮
PCR反应体系为 12.5μL, 反应条件: 94°C预变性 2min;
表 1 实验中所用到的引物序列
Tab.1 The sequence of primers used in this study
引物名称 序列(5—3) 用途
1-F1 GAGTCCTTCKCWGAGTTGGAT
1-R1 GGTCATCCTTGATCATGTAA
1-F2 GACCACAAGGTGTTCAGCTAT
1-R2 CAGCGTCCACCTCACTGTG
Wap65-1中间片段克隆
2-F1 CAGCTTGATGACATCCATAACA
2-R1 TCAATCAGGGTGTAGTGAG
2-F2 GATGACAAGGTGTTCAGCTA
2-R2 GATGTACACCTGATCATCCTTA
Wap65-2中间片段克隆
r1-R1 CTCCTTGAAGGCACTCTCGATGGTGTCA
r1-R2 GTGCAGTTTGGCATTGTCGTGAACTCCT
Wap65-1 5RACE合成
r1-F1 CCACCTGGATGCTGCTGTGGAGTGTC
r1-F2 GGAGTTCACGACAATGCCAAACTGCACA
Wap65-1 3’RACE合成
r2-R1 GTCACGATGGGTGTCCAGACGCATGTA
r2-R2 CAGCCAGCGTAAAGCAGAAGTGCAGACA
Wap65-2 5’RACE合成
r2-F1 CATGGTCCCACCTGCCTGTCTGCACTT
r2-F2 CCGAAGGATGCCCGCAGTTACTTCAT
Wap65-2 3’RACE合成
q1-F CTGCACATCTGCTTTCCGCTT
q1-R CCACGTGGTCGCTATCTTCACT
Wap65-1荧光定量引物
q2-F CAGAGCACCCAGATGAACACGAT
q2-R GGATACCCGTCCTCCAGATTG
Wap65-2荧光定量引物
18S-F GAGGCCCTGTAATTGGAATGAGTA
18S-R CTGCAGCAACTTTAAGATACGCT
内参引物
1-F3 CTACCGTGGACCAGAGGACT
1-R3 GTGGTCAAATCTTGGCGAGTGTTA
检测 Wap65-1全长
2-F3 GCTCCACAGTGAGACTCCACAT
2-R3 CACCGATAAGCAGATGACTGTGAGA
检测 Wap65-2全长
pCol-Nde-65-1NF GCATCATCATCATCATCATATGAAGCTGCTCACCCACATC
pCol-Eco-65-1NR CAGGTCGACAAGCTTGAATTCTTAGTGGTCACAGCCAAAC
Wap65-1表达载体构建
pCol-Nde-65-2NF GCATCATCATCATCATCATATGAAGCTGCTCACCAAAACTCTC
pCol-Eco-65-2NR CAGGTCGACAAGCTTGAATTCCTAATCCCGACATCCCATCAT
Wap65-2表达载体构建
1054 海 洋 与 湖 沼 46卷

98°C 10s, 72°C 30s, 5个循环; 98°C 10s, 70°C 30s, 5个
循环; 98°C 10s, 65°C 30s, 25个循环; 最后, 68°C彻底
延伸 5min。第二轮 PCR 反应体系 20μL, 反应条件:
94°C, 2min, 98°C 10s, 65°C 30s, 30个循环; 最后 68°C
彻底延伸 5min。PCR产物保存于–20°C。
上述所有 PCR 产物与 pUCm-T 载体连接, 转化
到 E. coli DH5α感受态细胞中, 培养过夜, 每块板随
机挑选 5 个菌落, 然后进行菌落检测, 选取阳性菌,
送往上海生物工程有限公司进行测序。
序列拼接后, 得到 Wap65-1 和 Wap65-2 基因的
cDNA 序列全长, 并设计引物, 进行全长克隆, 克隆
所得的基因序列与拼接序列一致 , 从而确定基因的
序列。
1.2.2 生物信息学的分析 运用 NCBI 中的
BLASTN 对 Wap65-1 和 Wap65-2 基因的同源性进行
分析, 用 MEGA 5 软件构建 Neighbor-joining系统进
化树 , 并利用 PredictProtein 软件对 Wap65-1 和
Wap65-2 蛋白序列进行功能位点分析 , 采用
DNAMAN软件将蓝点马鲛的这两种氨基酸序列和已
知的其它鱼类的氨基酸序列进行比对和分析, 采用
Signal P 4.1工具进行蛋白信号肽分析。
1.2.3 蓝点马鲛幼体高温胁迫及两种基因的表达特
征分析 将蓝点马鲛的幼体在 20°C、25°C、30°C、
35°C 的温度下进行 1h 的热诱导, 然后提取总 RNA,
并逆转录为 cDNA, 用于荧光定量表达分析。根据
Beacon Designer 7.0 设计目的基因及内参引物(见表
1)。采用 Power SYBR® Green PCR Master Mix进行荧
光定量 PCR(反应体系及反应条件见说明书)。采用
2–ΔΔCT法计算Wap65-1和Wap65-2基因的表达量并进
行分析, 并用 SPSS11.0软件进行显著性分析。
1.2.4 蓝点马鲛 Wap65-1 和 Wap65-2 原核表达及 E.
coli BL21 (DE3)热耐受性实验 设计特异性引物
(见表 1), 扩增两个基因 ORF, 用 EcoRⅠ和 NdeⅠ对
目的基因及 pCold TF 载体分别双酶切 , 根据
In-Fusion® HD Cloning Kit (Clontech)构建重组质粒并
导入表达宿主菌 E. coli BL21 (DE3), 37°C培养至 OD
值 0.4—0.6 之间 , 15°C 进行冷休克 , 然后加入
IPTG(至终浓度为 0.5mmol/L), 15°C低温诱导 20 h。
之后离心, 收集总蛋白, 剩下的菌液超声破碎, 收集
上清, 然后将总蛋白及上清进行 SDS-PAGE 电泳分
析。再取一部分样品, SDS-PAGE电泳后, 用 His-Tag
Monoclonal Antibody一抗, 做 Western blot分析, 经
过转膜、杂交及显色, 分析蛋白的表达情况。
在热耐受性实验中 , 将带有 pCold TF、
Wap65-1-pCold TF、Wap65-2-pCold TF基因的 E. coli
BL21 (DE3)菌株, 接种后, 37°C扩大培养使其 OD值
在 0.5, 然后加入 IPTG(终浓度 0.5mmol/L)低温诱导
20h 后, 取出测其 OD 值均在 0.6—0.7, 在保证菌液
浓度一致的条件下, 分别取 1mL 的细菌转移到 45°C
条件下, 热处理 0、15、30、45 和 60min, 每个时间
点的菌液浓度保持一致, 并在每个时间点取 50μL 菌
液, 然后稀释 50倍后, 取 100μL涂板, 37°C过夜培养,
计算每个培养板的菌落数目。运用 SPSS软件进行分
析, 并计算细菌生存率, 数据以平均数±标准差表示。
2 结果
2.1 Wap65-1和Wap65-2基因全长 cDNA序列分析
采用 RACE 的方法获得 Wap65-1和 Wap65-2的
cDNA 序列全长。登录号分别为 : KT356862 和
KT356863。Wap65-1基因长度为 1659bp, 其中 5′和 3′
未参与编码的碱基长度分别为 71bp和 307bp, 开放阅
读框(ORF)为 1281bp, 编码区编码 426 个氨基酸, 预
测分子量大小约为 48.74kDa, 理论等电点为 5.5, 3’端
含有终止密码子 TAA 及一个 ploy(A)尾巴。运用
Predictprotein 分析蓝点马鲛的 Wap65-1 蛋白功能位
点, 发现具有多个功能位点的蛋白序列, 包括 2个 N-
糖基化位点(67—70和 179—182), 2个蛋白激酶 C磷
酸化位点(362—364和 365—367); 8个酪蛋白磷酸化
位点(40—43, 69—72, 93—96, 199—202, 286—289,
293—296, 316—319及 353—356); 5个酪氨酸激酶磷
酸化位点(113—120, 155—162, 185—191, 211—219
及 302—309); 3 个 N-甲基化位点(62—67, 252—257
及 420—425)。
Wap65-2 基因长度为 1725bp, 其中, 5′和 3′的未
参与编码的碱基长度分别为 83bp和 331bp, 开放阅读
框(ORF)为 1311bp, 编码区编码 436 个氨基酸, 预测
分子量大小约为 48.45kDa, 理论等电点为 5.7, 3’端含
有终止密码子 TAA 及一个 ploy(A)尾巴。运用
Predictprotein 分析蓝点马鲛的 Wap65-2 蛋白序列的
功能位点, 同样发现具有多个功能位点的蛋白序列,
包括 3 个 N 糖基化位点(78—81 和 208—211, 220—
223), 7个蛋白激酶 C磷酸化位点(80—82, 179—181,
277—279, 290—292, 334—336, 373—375 和 411—
413), 11个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(51—54, 80—83,
144—147, 251—254, 257—260, 277—280, 290—293,
296—299, 303—306, 316—329及 334—337), 2个酪氨
5期 王丹妮等: 蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)两种 Wap65基因克隆及蛋白功能的研究 1055


图 1 Wap65-1开放阅读框核苷酸序列及推导编码的氨基酸
Fig.1 The open reading frame of full length cDNA of Wap65-1 gene and deduced amino acid sequence
方框里 ATG为起始密码子, TAA为终止密码子, 下划线为信号肽

酸激酶磷酸化位点(166—173和 196—202), 3个肉蔻
酰基位点(32—37, 240—245和 387—392)。
2.2 Wap65-1和Wap65-2基因多序列比对及系统进
化树分析
使用 DNAMAN 软件对蓝点马鲛 Wap65-1 和
Wap65-2的氨基酸序列进行同源序列分析, 结果如图
3所示, 蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)Wap65-1
基因与花鲈(Lateolabrax japonicus)的同源性为 86%,
与条石鲷(Oplegnathus fasciatus)、金头鲷(Sparus
aurata)、黑棘鲷(Acanthopagrus schlegeli)的同源性为
85%。利用 MEGA5 软件进行系统进化分析, 结果表
明, 蓝点马鲛 Wap65-1 基因与花鲈的亲缘关系比较
近。蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)Wap65-2 基
因与条石鲷(Oplegnathus fasciatus)、花鲈(Lateolabrax
1056 海 洋 与 湖 沼 46卷


图 2 Wap65-2开放阅读框核苷酸序列及推导编码的氨基酸
Fig.2 The open reading frame of full length cDNA of Wap65-2 gene and deduced amino acid sequence
方框里 ATG为起始密码子, TAG为终止密码子, 下划线为信号肽

japonicus)的同源性为 84%, 与南极真裸鱼(Harpagifer
antarcticus)、 鱼(Miichthys miiuy)的同源性为 82%,
与大菱鲆(Scophthalmus maximus)的同源性为 80%。
利用 MEGA5 软件进行系统进化分析 , 结果表明 ,
蓝点马鲛 Wap65-2 与条石鲷、花鲈的亲缘关系比
较近。
2.3 Wap65-1和Wap65-2在不同温度下mRNA的表
达特征分析
qRT-PCR 结果表明: 蓝点马鲛 Wap65-1 基因和
Wap65-2基因在 20°C、25°C、30°C、35°C分别都有
表达, 而 Wap65-2 的表达量随着温度的增高而明显
增高, 这一结果与所查文献所得出的结果类似, 在蓝
5期 王丹妮等: 蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)两种 Wap65基因克隆及蛋白功能的研究 1057


图 3 蓝点马鲛 Wap65-1和 Wap65-2氨基酸序列与其它鱼类氨基酸序列比对
Fig.3 Amino acid sequence alignment of Wap65-1 and Wap65-2 from S. niphonius with other fishes
同种氨基酸用相同颜色背景表示; 缺失的氨基酸用“.”表示


图 4 蓝点马鲛 Wap65-1和 Wap65-2基因与其它鱼类的系统进化树
Fig.4 Phylogenetic tree of Wap65-1 and Wap65-2 from S. niphonius and other fishes
1058 海 洋 与 湖 沼 46卷


图 5 蓝点马鲛幼体在不同温度下 Wap65-1和 Wap65-2的
相对表达量
Fig.5 Expression characterization of Wap65-1 and Wap65-2
transcript in different temperature

点马鲛体内, 主要参与温度调节的基因是 Wap65-2。
2.4 蓝点马鲛 Wap65-1 和 Wap65-2 原核表达及 E.
coli BL21 (DE3)热耐受性实验
重组质粒转化大肠杆菌 BL21(DE3)IPTG诱导后,
SDS-PAGE 检测表明在相对分子质量为 100kDa 处出
现浓度较高的表达条带, 由于 pCold TF 载体自带表
达伴侣 , 所以表达出的蛋白分子量应减掉自带分子
伴侣的分子量(48kDa)。经过计算后, 所得蛋白的分子
量与预测一致, 并且用 His-Tag Monoclonal Antibody
一抗进行 Western blot分析(见图 6)。
通过对表达 pCold TF、Wap65-1-pCold TF、
Wap65-2-pCold TF的 E. coli BL21 (DE3)进行 45°C的
热处理, 在处理 15、30、45和 60min后, 细菌生存率


图 6 蓝点马鲛 Wap65基因的原核表达
Fig.6 Prokaryotic expression of S. niphonius
a. Wap65两种蛋白的 SDS-PAGE电泳结果; b. Wap65两种蛋白的
Western bolt分析结果
分别是 40%、22%、15%、7%, 以及 75%、60%、45%、
30%; 而对照组(含 pCold TF)细菌生存率在上述各时
间点分别是 30%、17%、10%和 5%(见图 7), 这说明
热刺激条件下, Wap65-1-pCold TF和 Wap65-2-pCold
TF 对细菌都起到了一定程度的保护作用, 而 Wap65-2
与空白对照组比较, 表明其保护作用尤为显著。


图 7 Wap65基因在高温胁迫下保护实验
Fig.7 The protection experiments of Wap65 under high
temperature stress

3 讨论
Wap65 广泛存在于硬骨鱼类的血浆蛋白, 参与
了体内多种机制的调控。本次研究通过克隆技术获得
了蓝点马鲛 Wap65-1和 Wap65-2的 cDNA全长序列,
通过 SDS-PAGE 电泳检测结果表明 , Wap65-1 和
Wap65-2 的分子量大约为 48kDa, 与理论大致吻合。
两个基因的 N端都有 19个氨基酸序列为信号肽序列,
与花鲈及其它硬骨鱼类的 Wap65 基因一样。虽然
Wap65-1与Wap65-2是具有同源性的, 但是, Wap65-2
蛋白具有鱼类Wap65的典型结构特征, 具有保守的 7
个疏水残基和 2个组氨酸残基, 这些都与血红素结合
区的形成有关(史雨红等, 2012), 而 Wap65-1却没有。
通过对蛋白质氨基酸的分析 , 发现在氨基酸的
组成中, 两种蛋白赖氨酸和组氨酸的含量比较高, 其
氨基酸上含有多个功能位点, 例如糖基化、磷酸化等,
有助于进一步研究蛋白的结构稳定性和功能 , 同样
也促进了蛋白质的主要定位。
通过对其进化的分析 , 结果表明 : 蓝点马鲛的
Wap65-1与花鲈亲缘关系最近, Wap65-2与条石鲷、
花鲈的 Wap65-2亲缘关系最近。
许多资料证明, Wap65-1与 Wap65-2除了在分子
特征的差异, 其表达量在不同温度下, 也有差异。在
高温处理的蓝点马鲛幼体组织定量结果表明 ,
Wap65-2 的表达量随着温度的升高表达量呈显著性
差异(P<0.05), 与所查文献结果一致。这就说明了在
5期 王丹妮等: 蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)两种 Wap65基因克隆及蛋白功能的研究 1059

蓝点马鲛体内, 其参与温度调节的主要是 Wap65-2。
鱼类 Wap65-1 和 Wap65-2 表达的差异性证明了
它们之间的功能的差异性。通过对鱼类在进化过程中
适应性的分析, 可以知道 Wap65-2 仍然处于快速的
进化当中, 其中也存在着一些选择位点, 称为正达尔
文选择位点, 尤其是在 Wap65-2 中该位点更多一些
(Sarropoulou et al, 2010)。
目前, 对 Wap65 这类蛋白的功能研究还不是很
多, 除了与温度有关, 还与其它多种环境应激因子有
关, 例如水的盐度(Choi et al, 2008), 重金属胁迫等
有关(George et al, 2004; Hayes et al, 2004; Berthet et
al, 2005; Burgos et al, 2005)。另外, 许多数据研究发
现, 鱼类的免疫系统与 Wap65 之间的关系非常密切,
而且细菌、LPS也会诱导Wap65的上调(Peatman et al,
2008), 此外, 转录调控区 NF-IL6存在于 Wap65-2基
因 5’调控区, 表明免疫因子调节与 Wap65-2 的表达
可能相关。但是, 目前在功能和作用途径仍不清楚。
本次研究成功克隆了蓝点马鲛 Wap65-1 和
Wap65-2基因的 cDNA序列全长, 并通过不同温度下
其表达量的差异, 进一步确定Wap65-2与温度之间的
关系, 在温度调节过程中起着重要的作用, 为以后深
入研究 Wap65 基因在鱼类或者其它动物的功能奠定
了基础。
参 考 文 献
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1060 海 洋 与 湖 沼 46卷

MOLECULAR CLONING AND FUNCTIONAL ANALYSIS OF TWO DIFFERENT Wap65
GENES FROM SCOMBEROMORUS NIPHONIUS
WANG Dan-Ni1, ZHENG Chun-Jing2, JING Ting-Jia1, LIU Jun1
(1. China Jiliang University, Hangzhou 310018, China; 2. Ningbo Institute of Marine and Fishery, Ningbo 315010, China)
Abstract Full-length cDNA sequences of Wap65-1 and Wap65-2 were cloned first time from the Scomberomorus
niphonius by homology cloning and RACE techniques. The Wap65-1 and Wap65-2 sequences are 1659bp and 1725bp,
encoding 426 and 436 amino acids respectively. Sequences comparison and phylogenetic analysis showed that the
homology of Wap65-1 and Wap65-2 is 60%, which located in different branches. Furthermore, the fish larva were induced
by high temperature, the real-time quantitative PCR results showed that the expression of two different genes are
up-regulated under the high temperature induced, and the expression of Wap65-2 gene show significant difference
(P<0.05). On this basis, we succeeded getting the soluble expression of two proteins by contracting two kinds of
Cold-Shock expression system, and found Wap65-2 had better strong effect on survival protection under high temperature
stress. The study laid a theoretical foundation for breeding heat resistant varieties of S. niphonius.
Key words Scomberomorus niphonius; Wap65; gene cloning; expression; function research