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HPLC法测定不同产地及品种木豆叶中牡荆苷的含量
孙 琳1，黄 松1，2，赖小平1，2*
( 1. 广州中医药大学，广东 广州 510006; 2. 广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东 东莞 523808)
摘要 目的:建立测定木豆叶中牡荆苷含量的 HPLC方法，研究不同产地及品种木豆叶中牡荆苷的含量差异。
方法:采用 HPLC法测定木豆叶中牡荆苷的含量。色谱柱为 Diamonsil C18 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流动相为甲
醇-1%冰醋酸( 29∶ 71) ;检测波长: 330 nm;流速: 1. 0 mL /min;进样量: 10 μL;柱温: 40 ℃。结果:牡荆苷在 0. 0016 ～
1. 01 μg 范围内具有良好的线性关系，r = 0. 9999; 平均回收率为 96. 523%，RSD 为 1. 85%。结论: 本方法简便、准
确、重现性好，可用于木豆叶中牡荆苷含量的测定。不同产地及品种木豆叶中牡荆苷含量差异较大。
关键词 牡荆苷; HPLC;含量测定
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2011) 01-0031-02
收稿日期: 2010-07-19
基金项目:国家自然基金重点项目( U0732004) ;广东省自然科学基金( 9451040701003211)
作者简介:孙琳( 1984-) ，女，博士研究生，主要从事中药新药研究与开发; E-mail: sunlin115@ yahoo. cn。
* 通讯作者:赖小平，E-mail: lxp88@ gzhtcm. edu. cn。
木豆［Cajanus cajan ( L. ) Millsp］为豆科木豆属
落叶灌木〔1-4〕，主要分布于长江以南的海南、云南、广
西、贵州、广东以及福建、湖南、四川、江西、浙江、台
湾等省区〔5〕。木豆叶可用于治疗外伤、烧伤、褥
疮〔5，6〕、止痛、消肿、止血等，其消炎止痛功效优于水
杨酸。木豆叶中主要含有牡荆苷、异牡荆苷等多种
黄酮类成分〔7〕，具有降血压、止痉挛、抗感染、抗菌、
辐射保护以及清除自由基的作用。近年来，已研制
出了以牡荆苷等黄酮类化合物为有效成分的木豆叶
成药，用于治疗股骨头坏死，取得了很好的疗效〔8〕。
本实验采用 HPLC法对不同产地及品种的木豆叶药
材中牡荆苷的含量进行了测定比较，为控制木豆叶
药材及其制剂的内在质量提供了依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪( 型号: LC-
20A( UV /Vis) ) ; Sartorius 万分之一电子天平( 型号:
BSA224S-CW) ; Sartorius 十万分之一电子天平 ( 型
号: CP225D) ;数控超声清洗器( 型号: KQ5200DA) 。
1. 2 药品与试剂 甲醇( 天津市大茂化学试剂厂，
分析纯;德国 Merck 公司，色谱纯) 、乙醇( 天津市大
茂化学试剂厂，分析纯) 、冰乙酸 ( 天津市大茂化学
试剂厂，分析纯) 、重蒸去离子水 ( 实验室制备) ; 牡
荆苷对照品( 购于中国药品生物制品检定所，批号:
111687-200602) ;木豆叶药材均由广州中医药大学
中药学院赖小平教授鉴定为木豆 Cajanus cajan( L. )
Millsp的叶。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱: Diamonsil C18 ( 250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ;流动相: MeOH∶ 1%HAc( 29∶ 71) ;流
速: 1. 0 mL /min;柱温: 40 ℃ ;进样体积: 10 μL;检测
波长: 330 nm。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取牡荆苷对照品
1. 01 mg 置于 10 mL 容量瓶中，加入甲醇超声溶解
并稀释至刻度，摇匀，得 101 μg /mL 的牡荆苷对照
品溶液，作为母液备用。将母液分别稀释至 101、
40. 4、8. 08、4. 04、1. 616、0. 808、0. 32、01616 μg /mL。
经 0. 45 μm微孔滤膜滤过后，作为对照品溶液备用。
2. 3 供试品溶液的制备 称取木豆叶干粉约 3 g，
置于锥形瓶中，加入体积分数为 65%的乙醇溶液
60 mL，超声提取 30 min，取出，放置至室温，用 65%
乙醇溶液补足减失的重量，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，
滤液作为供试品备用。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察: 精密吸取对照品溶液，按
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“2. 1”项下色谱条件进样，记录峰面积，以对照品溶
液的峰面积为纵坐标，以加入的对照品量为横坐标
进行线性回归，回归方程为: y = 3229489. 747x －
3740. 189244，r = 0. 9999;线性范围为 0. 0016 ～ 1. 01
μg，最低检测限为 0. 96 ng。
2. 4. 2 精密度试验:选取对照品溶液高、中、低 3 个
浓度，重复进样 5次，以牡荆苷峰面积积分值为指标，
测定其精密度，结果得平均 RSD 分别为 0. 46%、
0. 81%和 0. 10%。表明本实验方法精密度较高。
2. 4. 3 稳定性试验: 精密吸取同一浓度对照品溶
液 10 μL，分别于 0、2、6、18、24 h 进行测定，记录峰
面积，结果表明对照品溶液在 24 h 内稳定性良好，
平均 RSD =0. 77%。
2. 4. 4 重复性试验:取同一批木豆叶药材 5 份，按
供试品溶液的制备方法制备样品溶液，进行 HPLC测
定，测得 RSD% =0. 56%，结果表明方法重复性良好。
2. 4. 5 加样回收率试验: 取已知含量的木豆叶供
试品溶液，加入一定量的牡荆苷对照品，按供试品溶
液测定方法操作，计算回收率。加样回收率为
96. 52%，RSD = 1. 85%。结果表明，本方法分析误
差较小，操作过程中损失少，回收率高，方法可靠。
2. 5 样品的测定 精密吸取供试品溶液 10 μL进
样，按照色谱条件测定牡荆苷含量，见表 1。
表 1 木豆叶样品测定结果( n =3)
编号 产地 牡荆苷含量 /( mg /g) RSD /%
1 四川 0. 0469 0. 54
2 广西 0. 0382 0. 43
3 海南 0. 2947 0. 27
4 广东 0. 5939 0. 70
5 云南 1. 0141 0. 09
6 云南 0. 3390 0. 77
7 云南 0. 4163 0. 63
8 云南 0. 0656 0. 34
9 云南 0. 0118 0. 77
10 云南 0. 5352 0. 39
11 云南 0. 3159 0. 56
12 云南 0. 3062 0. 26
13 云南 0. 0154 0. 36
14 云南 0. 2885 0. 16
15 云南 0. 0080 0. 24
16 云南 0. 1596 0. 47
17 云南 1. 5288 0. 11
18 云南 0. 5122 0. 25
3 讨论
3. 1 检测波长的确定 取牡荆苷对照品溶液，在
200 ～ 400 nm扫描，结果表明，牡荆苷在 267 nm 和
330 nm处均有最大吸收峰，但在 330 nm 下峰形对
称，基线平稳，所以本实验选定 330 nm为检测波长。
3. 2 流动相的选择 由于牡荆苷属于黄酮类化合
物，在液相分析中容易产生拖尾，因此在流动相中加
入了少量醋酸，起到了消除拖尾、改善峰型的作用。
此外，随着流动相中甲醇比例的增加，各物质的保留
时间明显缩短，但分离效果变差，选择甲醇-1%醋酸
( 29∶ 71) 为流动相时，保留时间适中，分离效果好，
故选其为流动相。本研究建立了木豆叶中牡荆苷的
含量测定方法，并进行了方法学考察，考察结果表
明，本方法线性关系及重现性良好，为牡荆苷提供了
准确、方便的测定方法，可用于木豆叶的质量控制，
并为其进一步研究打下基础。
3. 3 木豆叶中牡荆苷含量的差异 表 1 中编号为
5 ～ 18 的木豆叶药材均采自云南木豆叶种植基地，
为不同培育品种，本研究对其牡荆苷含量的考察结
果为木豆叶新品种的培育提供了参考依据。
18 批不同产地和品种木豆叶含量测定结果可
以看出，牡荆苷含量差异较大，说明种间的牡荆苷含
量差别较大。因此，在实际应用中应注意对其质量
的控制，入药时要选定固定品种的木豆叶。
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