全 文 ：细柱五 加 (Acanthopanax gracilistylus W.W.
Smith) 是五加科五加属植物，《中华人民共和国药
典》（2010 年版）收录的“五加皮”是其干燥根皮，具
有祛风除湿、补益肝肾、强筋健骨、利水消肿的功
效，常用于脾胃阳虚、体虚乏力、风湿痹痛、筋骨痿
软等[1]。 五加皮含有贝壳烯酸、刺五加苷 B1、紫丁
香苷 、β-谷甾醇 、维生素 A、维生素 B1、胡萝卜
素、挥发油等成分 [2]。 研究发现细柱五加叶中含有
impressic aicd、五加苷元（acankoreanogein）、五加苷
等多种三萜类活性成分 [3-10]。 前期动物试验结果显
示，细柱五加叶总苷元提取物（2012 年 9 月采集）
对 SD 大鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。 本研
HPLC同时测定细柱五加叶总苷元提取物中
4种主要三萜苷元的含量
〔摘要〕 目的 建立同时测定细柱五加叶总苷元提取物中 4 种三萜苷元的高效液相色谱(HPLC)分析方法。 方法 采用 Phe-
nomenex Columbus C18 110A 色谱柱(250 mm × 4.60 mm，5.0 μm)；柱温 30 ℃；以乙腈-0.2%磷酸水为流动相，梯度洗脱；检测
波长 210 nm；流速 1 mL/min。 结果 4 个成分均能达到基线分离，样品含量测定出各组分在相应的浓度范围内均呈现良好线性
关系， 其平均加样回收率分别为 97.8%，96.0%，96.4%，98.4%。 结论 本方法可用于同时测定细柱五加叶总苷元提取物中 3α，
11α，23-trihydroxy-lup-20(29)-en-28-oic acid、3α，11-dihydroxy-23-oxo-lup-20(29)-en-28-oic acid、impressic acid、acankore-
anogein 的含量，为评价细柱五加叶总苷元质量提供了有效的方法。
〔关键词〕 细柱五加；HPLC；总苷元；五加苷元；含量测定
〔中图分类号〕R284.1 〔文献标识码〕B 〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.01.008.028.04
Simultaneous Determination of Four Triterpene Saponins from the leaves
of Acanthopanax gracilistylus by HPLC
KUANG Chao1,2， LIU Xiangqian1， GUO Jiansheng1,2,3*， LI Zhi1
（1. School of Pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410208, China;
2. Key Laboratory for Modernization of Traditional Chinese Medicine, the Education Department of Hunan Province, Changsha,
Hunan 410208, China; 3. The Third Level of Medicinal Properties and Efficacy, State Administration of Traditional Chinese
Medicine, Changsha, Hunan 410208, China）
〔Abstract〕 Objective To establish HPLC methods for the simultaneous determination of four triterpene saponins from the
leaves of Acanthopanax gracilistylus. Methods The HPLC method was established. A Phenomenex Columbus C18 110A column
(250 mm × 4.60 mm, 5.0 μm) was used for separation at temperature 30 ℃ . The samples were gradient eluted with
acetonitrile -0.1% phosphoric acid. The detection wavelength was at 210 nm and the flow rate was at 1 mL/min. Results Four
constituents in the corresponding concentration range showed a good linear relationship. The average recovery rates were 97.8%,
96.0%, 96.4% and 98.4%. Conclusion The method is accurate and simple. Four Triterpene Saponins: 3α, 11α, 23-trihydroxy-
lup-20(29)-en-28-oic acid, 3α,11α-dihydroxy-23-oxo-lup-20(29)-en-28-oic acid, impressic acid and acankoreanogein from total
saponins extract of Acanthopanax gracilistylus were simultaneously determined. That provided an effective method for evaluating
the quality of total saponins from this plant.
〔Keywords〕 Acanthopanax gracilistylus; HPLC; total saponins; acankoreagenin; content determination
匡 朝 1，2，刘向前 1，郭建生 1，2，3*，李 芝 1
（1．湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2．湖南省教育厅中药现代化研究重点实验室，湖南 长沙 410208；
3.国家中药管理局药性与药效研究三级实验室，湖南 长沙 410208）
〔收稿日期〕2014－09－09
〔基金项目〕湖南省自然科学基金资助项目（11JJ2042）。
〔作者简介〕匡 朝，女，在读硕士研究生，主要从事中药新药开发与研究。
〔通讯作者〕* 郭建生，男，教授，博士研究生导师，E-mail：gjs7878@126.com。
2015 年 1 月第 35 卷第 1 期
Jan． 2015 Vol． 35 No． 1
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Hunan Univ． of CM
·中药制剂与分析·
28
图 2 五加苷元Ⅰ-Ⅳ混合对照品 HPLC 色谱图
图 3 细柱五加叶总苷元样品的 HPLC 色谱图
图 1 4 个三萜苷元的化学结构
究以其为样品，采用 HPLC 对细柱五加叶中含量较
高、有体外抗炎活性的 4 种主要三萜苷元 3α，11α，
23 -trihydroxy -lup -20 (29) -en -28 -oic acid、3α，
11α -dihydroxy -23 -oxo -lup -20 (29) -en -28 -oic
acid、impressic acid、acankoreanogein（以下简称五加
苷元Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）进行含量测定，控制细柱五加叶
总苷元提取物质量。
1 实验材料
1.1 仪器
Agilent 1200 series 高效液相色谱仪 （真空脱
气机、四元泵）；AUW220D 电子分析天平（日本岛津
公司）等。
1.2 试药
五加苷元Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对照品均为实验室自制，
经 1D 和 2D-NMR 及 HRMS 等光谱鉴定后，HPLC
测定其纯度≥98.5%。 细柱五加叶总苷元提取物由长
沙博海生物科技有限公司提供， 其原料细柱五加叶
采自湖南省长沙市近郊， 经湖南中医药大学刘向前
教授鉴定为细柱五加 Acanthopanax gracilistylus W.
W. Smith的叶。
1.3 试剂
甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水；其余试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Phenomenex Columbus C18 110A 柱
(250 mm × 4.6 mm，5.0 μm)；以乙腈 (A)-0.2%磷
酸水 （B） 梯度洗脱 ：0～5 min，45%A；5～14 min，
45%～50%A；14～28 min，50%～60%A；28～40 min，
60%A；流速为 1 mL/min；检测波长为 210 nm；柱
温为 30 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取五加苷元Ⅰ 19.25 mg、 五加苷元Ⅱ
17.89 mg、 五加苷元Ⅲ 29.10 mg、 五加苷元Ⅳ
31.00 mg于 50 mL容量瓶中，超声溶解后用甲醇定
容至 50 mL，配制成每 mL 分别含 0.379 2、0.352 4、
0.573 3、0.610 7 mg的混合对照品溶液。 各对照品
结构见图 1，HPLC色谱图见图 2。
2.3 供试品溶液的制备[6]
精密称取总苷元 24 mg于 10 mL 容量瓶中，超
声溶解后用甲醇定容至 10 mL，0.45 μm 微膜滤过，
取续滤液，得供试品溶液，HPLC色谱图见图 3（图中
1、2、3、4分别代表五加苷元Ⅰ-Ⅳ）。
2.4 标准曲线的制备
分别精密量取 1.5、3、6、9、12、15 μL 混合对照
品溶液，进样，按“2.1”项下条件测定，记录峰面积。
以色谱峰峰面积为纵坐标(Y)，对照品的进样质量为
横坐标(X)进行线性回归，得回归方程分别为
五加苷元Ⅰ：Y=298.3X+152.1，r=0.999 3，线性
范围为 0.57～5.69 μg；
五加苷元Ⅱ：Y=260.7X+124.3，r=0.999 9，线性
范围为 0.53～5.29 μg；
五加苷元Ⅲ：Y=229.1X+85.8，r=0.999 7， 线性
范围为 0.86～8.60 μg；
五加苷元Ⅳ：Y=300.2X+99.5，r=0.999 9， 线性
范围为 0.92～9.16 μg。
2.5 精密度试验
按照“2.1”项下色谱条件测定，取“2.2”项下对
照品溶液，进样 10 μL，重复进样 6 次，结果五加苷
元Ⅰ-Ⅳ的峰面积的 RSD 分别为 0.8%、2.4%、2.5%、
匡 朝，等 HPLC 同时测定细柱五加叶总苷元提取物中 4 种主要三萜苷元的含量第 1 期 29
表 5 细柱五加叶总苷元中主要三萜苷元含量测定结果(%)
批 号
20130905
20130906
20130907
20130908
20130909
五加苷元Ⅰ
2.13
2.14
2.11
2.15
2.12
五加苷元Ⅱ
1.67
1.66
1.86
1.61
1.80
五加苷元Ⅲ
10.06
10.09
10.18
9.97
10.18
五加苷元Ⅳ
28.12
27.81
27.98
28.08
27.86
表 3 五加苷元Ⅲ回收率实验结果
表 4 五加苷元Ⅳ回收率实验结果
编
号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品中含量
（mg）
1.187 2
1.199 1
1.190 9
1.200 9
1.197 3
1.194 8
1.176 5
1.186 9
1.201 8
加入量
（mg）
0.613 2
0.613 2
0.613 2
1.022 0
1.022 0
1.022 0
1.430 8
1.430 8
1.430 8
测得量
（mg）
1.746 6
1.756 2
1.742 2
2.137 3
2.136 9
2.140 3
2.485 6
2.515 3
2.547 6
回收率
（%）
97.01
96.90
96.57
96.15
96.29
96.55
95.33
96.09
96.77
平均值
（%）
96.4
RSD
（%）
0.5
编
号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品中含量
（mg）
3.317 6
3.300 8
3.281 6
3.302 4
3.320 9
3.330 4
3.313 8
3.297 3
3.287 8
加入量
（mg）
1.951 2
1.951 2
1.951 2
3.252 0
3.252 0
3.252 0
4.552 8
4.552 8
4.552 8
测得量
（mg）
5.175 4
5.162 3
5.155 0
6.458 0
6.408 6
6.409 4
7.812 9
7.810 3
7.737 0
回收率
（%）
98.23
98.29
98.51
98.53
97.50
97.37
99.32
99.49
98.68
平均值
（%）
98.4
RSD
（%）
0.7
表 2 五加苷元Ⅱ回收率实验结果
表 1 五加苷元Ⅰ回收率实验结果
1.1%，表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批号总苷元样品 6 份（批号 20130906），
按照“2.3”项下操作，进样 10 μL，测定结果五加苷
元Ⅰ-Ⅳ的峰面积的 RSD 分别为 0.3%、2.6%、0.7%、
0.5%，表明方法的重复性好。
2.7 稳定性试验
取同一批号 （批号 20130906） 供试溶液，在
25 ℃下放置，分别按“2.1”项下色谱条件在 0、2、4、
6、8、10、12、24、36、48、72 h 时 测 定 ， 每 次 进 样
10 μL， 测定五加苷元Ⅰ-Ⅳ的峰面积的 RSD 分别
为 1.6%、2.1%、2.4%、3.1%，表明样品 72 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
取已测定的细柱五加叶总苷元样品 （批号
20130906）9份，每份 12 mg，精密称定。 分别精密加
入 3.0、3.0、3.0、5.0、5.0、5.0、7.0、7.0、7.0 mL 混合对
照品溶液到样品中，照“2.3”项下操作，进样 10 μL，
计算上述 4种苷元平均回收率，见表 1~4。
2.9 样品测定
取样品适量，按照“2.3”项下操作制备得样品溶
液，按“2.1”项下色谱条件进样 10 μL，记录五加苷
元Ⅰ-Ⅳ的峰面积，计算其含量，结果见表 5。
3 结论
本实验曾比较了流动相分别为乙腈-醋酸水、
乙腈-甲酸水、乙腈-磷酸水时，各色谱峰的分离效
果， 结果以乙腈-0.2%磷酸水为流动相时色谱峰分
离良好且基线较平稳。
本实验建立的细柱五加叶总苷元含量测定方
法，经方法学验证，基本达到 HPLC 分析要求，适用
于细柱五加叶总苷元中五加苷元Ⅰ-Ⅳ这四种三萜
苷元的同时测定。 本法的建立，为细柱五加叶总苷
元的质量控制提供了可供参考的质控指标和方法。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国中医药科技
出版社，2010：61.
编
号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品中含量
（mg）
0.251 1
0.251 8
0.252 2
0.249 1
0.253 0
0.252 6
0.253 7
0.252 1
0.250 7
加入量
（mg）
0.123 6
0.123 6
0.123 6
0.206 0
0.206 0
0.206 0
0.288 4
0.288 4
0.288 4
测得量
（mg）
0.365 3
0.364 9
0.370 4
0.440 8
0.442 7
0.433 1
0.540 4
0.539 6
0.536 7
回收率
（%）
97.49
97.20
98.56
96.86
96.45
94.44
99.69
99.83
99.55
平均值
（%）
97.8
RSD
（%）
1.8
编
号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品中含量
（mg）
0.196 6
0.196 4
0.195 8
0.219 6
0.200 7
0.189 5
0.199 1
0.210 3
0.212 5
加入量
（mg）
0.136 2
0.136 2
0.136 2
0.227 0
0.227 0
0.227 0
0.317 8
0.317 8
0.317 8
测得量
（mg）
0.310 3
0.311 6
0.323 8
0.425 8
0.419 6
0.408 1
0.511 3
0.511 9
0.508 3
回收率
（%）
93.24
93.69
97.53
95.34
98.11
97.98
98.92
96.93
95.85
平均值
（%）
96.0
RSD
（%）
2.0
湖南中医药大学学报 2015 年第 35 卷30
严用和著 《济生方·求子篇》 认为：
“子应养血益气，以减喜怒，阴阳平和，则妇人乐有
子矣。 ”明·《济阴纲目》中提到：“人有隐情曲意难以
舒其表则气郁而不畅， 不畅则心气不开， 脾气不
化，水谷日少，不能变化气血以入二阳之海，海无
余所以不月也。 ” 说明情志不舒影响机体气血运
行及生殖机能。 现代临床研究表明，焦虑、抑郁病
证与性激素水平和受孕有着密切关系， 周红卫等
[6]认为在辅助生育治疗过程中减少应激原 ，降低
焦虑情绪，可提高治疗的成功率；何松彬等 [7]研究
表明女性抑郁症患者 PRL 含量显著升高，E2含量明
显下降，性激素水平紊乱；李建业等[8]研究表明性激
素水平的变化与女性不孕症有密切关系。
不确定空瓶应激模型是一种有效的焦虑应激
模型， 情绪应激激活了 HPA轴和交感神经系统，实
验动物血清肾上腺素、去甲肾上腺素以及皮质醇水
平的升高，较好地模拟了人类焦虑的行为和生理反
应[4]。 焦虑动物模型作为基础实验研究的平台与载
体，在探索焦虑障碍的病因、发病机制以及新药研
发等方面发挥着重要作用，而动物行为学的表现既
是评价模型是否成功的一项标准，也是评价药物疗
效的参考指标。该研究采用 EPM评价大鼠行为学变
化，模型组中 OE、OT 较空白组均明显减少，显示模
型组雌性大鼠已经出现了明显的焦虑状态，表明模
型复制成功。
本研究结果显示，模型组大鼠血清 T 浓度明显
升高，LH 浓度明显降低，血清雄激素浓度高对卵泡
的发育成熟及排卵均有不良影响。 光镜观察发现模
型组卵巢组织闭锁卵泡多， 黄体和成熟卵泡少，子
宫内膜较薄，间质纤维增生，表明焦虑可严重影响
雌性大鼠的受孕，降低其生殖功能。 目前焦虑对不
孕形成及发展机制研究报道较少， 有待进一步研
究。
参考文献：
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（本文编辑 徐爱良）
（上接第 27 页）
（本文编辑 杨 瑛）
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匡 朝，等 HPLC 同时测定细柱五加叶总苷元提取物中 4 种主要三萜苷元的含量第 1 期 31