全 文 ：HPLC分析刺五加叶中金丝桃苷与绿原酸含量
张崇禧1 ,徐春玲2 ,鲍建才3 ,蔡恩博2 ,高笑一2 ,胡全德2 ,郑友兰2
(1.山东大学威海分校 海洋学院 ,山东威海 264209;2.吉林农业大学 中药材学院 ,吉林 长春 130118;3.长春市中医院 ,吉林 长春 130042)
　　摘要:对刺五加叶中金丝桃苷与绿原酸进行含量测定 ,探讨其最佳采收期 , 并比较不同采收期仿生栽培品与野生品刺五加叶中
主要活性成分的含量差异 ,利用高效液相色谱法测定仿生栽培与野生刺五加叶中金丝桃苷与绿原酸的含量。在仿生刺五加叶中 ,
金丝桃苷与绿原酸分别在 6月 8 日 、5 月 19日达到最高值 ,含量分别为 0.478%、0.899%;在野生刺五加叶中 , 金丝桃苷与绿原酸分
别在 5月 29 日 、5 月 19日达到最高值 , 含量分别为 0.156%、0.704%。仿生栽培刺五加叶与野生刺五加叶主成份含量差异显著 , 且
仿生栽培刺五加叶主成份明显高于野生刺五加叶主成份 , 因此仿生栽培刺五加叶可以替代野生刺五加叶作药用。这不但为日益减
少的野生资源开辟了新药源 ,而且为刺五加叶的进一步开发应用及质量控制奠定了基础。
关键词:HPLC;刺五加;金丝桃苷;绿原酸
中图分类号:P284.1　　文献标志码:A　　文章编号:1005-8141(2010)11-0961-02
Analysis of Hyperin and Chlorogenic Acid in Leaves of Acanthopanax senticosus by HPLC
ZHANG Chong-xi1 , XU Chun-ling2 , BAO Jian-cai3 , CAI En-bo2 , GAO Xiao-yi2 ,HU Quan-de2 , ZHENG You-lan2
(1.Marine College , Shandong University at Weihai ,Weihai 264209 , China;
2.College of Chinese Medicinal Material , Jilin Agricultural University , Changchun 130118 , China;
3.Changchun City Hospital of Chinese Medicine , Changchun 130042 , China)
Abstract:To determination the active ingredient in leaves of Acanthopanax senticosus from simulating and wild , compared with differences of the
main contents in leaves of Acanthopanax senticosus from simulating and wild.The contents of hyperin and Chlorogenic acid were determind by HPLC.
The highest contents of Hyperin and Chlorogenic acid in leaves of Acanthopanax senticosus from simulating cultivity were separataly on Jun 8th and
May 19th , the contents were 0.478% and 0.899%.The highest contents of Hyperin and Chlorogenic acid in leaves of Acanthopanax senticosus from
the wild were separately on May 29th and May 19th , the contents were 0.156% and 0.704%.The contents of main composition in leaves of Acan-
thopanax senticosus from the simulating cultivity showed apparently higher than the contents of main composition in leaves of Acanthopanax senticosus
from the wild.So Acanthopanax senticosus from the simulating cultivity could instead of Acanthopanax senticosus from the wild as medicine , it didnot
only make a new medicine way for decreasing wild resources , but also lay the foundation for further application and quality controlling.
Key words:HPLC;Acanthopanax senticosus;Hyperin;Chlorogenic acid.
　　收稿日期:2010-09-15;修订日期:2010-10-13
基金项目:国家科技攻关计划引导项目“长白山重要珍稀药用植
物仿生栽培及保护研究”(编号:2005BA741C)。
第一作者简介:张崇禧(1954-),男 ,山东省无棣人 ,博士 ,教授 ,主
要从事天然产物化学成分及功能食品开发研究。
通讯作者:郑友兰(1956-),女 ,湖北省武汉人 ,学士 ,教授 ,主要从
事天然产物化学成分及功能食品开发研究。
　　刺五加(Acanthopanax Senticosus (Rupr.et Maxim.)
Harms)系五加科植物[ 1] ,是我国北方地区特产常用药
材之一 ,具有扶正固本 、益智安神和补肾健脾等功
效[ 2 ,3] ,主要分布于我国东北 、华北和陕西 、四川 、广西
等地。最新研究资料表明 ,刺五加叶中的黄酮类物质
具有广泛的药理活性 ,如金丝桃苷 、槲皮素 、芦丁等 ,有
扩张血管 ,增加冠状动脉血流量 ,降低心肌耗氧量 ,抗
心肌缺血 ,改善心电图 ,抗异位心律 ,降低血压 ,镇静安
神[ 4 ,5]等功效;绿原酸具有抗菌 、抗病毒 、增高白血球 、
保肝利胆 、抗肿瘤 、降血压 、降血脂 、抗氧化及兴奋中枢
神经系统等多种药理作用[ 6-12] 。近年来 ,刺五加的需
求量不断增大 ,导致对野生刺五加的过度采挖 ,野生资
源已严重不足 ,被国家列为三级保护渐危品种 。因此 ,
为了保证刺五加的资源可持续发展 ,引种栽培已势在
必行 。本文以金丝桃苷和绿原酸这两种活性成分为指
标 ,采用高效液相色谱对野生和栽培刺五加叶金丝桃
苷和绿原酸进行含量测定比较 ,为刺五加引种栽培以
及栽培品替代野生品提供一定的科学依据。
1　材料 、仪器与试药
1.1　药材
药材采于吉林临江 ,经吉林农业大学园艺学院胡
全德教授鉴定为五加科(Araliaceae)五加属(Acan-
thopanax)植物刺五加 Acanthopanax sessiliflorus(Rupr.et
Maxim.)Harms ,见表 1。
1.2　仪器
高效液相色谱仪美国 ALLTECH 公司;色谱柱
Apollo -C18(4.6mm ×250mm , 5um);电子计数天平
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资源开发与市场 Resource Development &Market 2010 26(11)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　·实验与技术·
(500g/0.001g 金羊天平仪器厂);KQ-5000 DE 型数控
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电子天平
(110g/0.0001g 常熟市百灵天平仪器有限公司);101-2
型数显电热鼓风干燥箱(上海锦屏仪器仪表有限公司)。
1.3　试剂
甲醇(色谱纯 ,Fisher Scientific);水(杭州产娃哈哈
纯净水 1.25 L装)经微孔滤膜过滤;甲醇(分析纯 ,北
京化工厂);无水乙醇(分析纯 ,北京化工厂);绿原酸
(购自中国药品生物制品鉴定所);金丝桃苷(购自中国
药品生物制品鉴定所);冰醋酸(分析纯 ,北京化工厂)。
2　实验方法与结果
2.1　绿原酸含量测定
主要有:①色谱条件 。色谱柱:长柱 Apollo-C18
(4.6mm×250 mm , 5um);流动相:甲醇-0.1%冰醋酸
(3∶7);体积流量 1ml/min , 柱温 30℃, 检测波长
327nm[ 7] 。②对照品溶液的制备 。精密称取干燥绿原
酸对照品 0.004g 置于 10ml容量瓶中 ,加甲醇使其溶
解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 0.4 mg/ml的绿原酸对
照品溶液 。③样品溶液的制备 。将不同采收期的野生
刺五加叶与仿生刺五加叶干燥并粉碎 ,过 100 目筛。
恒重后精确称取各种样品粉末 2.0000g ,精密加入甲醇
30ml ,摇匀 ,称重 ,记录重量 ,浸 12h后在超声波发生器
内提取 30min ,静置冷却至室温 ,补足重量 ,过滤后取
续滤液备用。④线性关系考察 。分别精密吸取对照品
溶液 2μl 、4μl 、8μl 、10μl、12μl ,在上述色谱条件下测定峰
面积 ,以进样量 X 为横坐标 ,峰面积 Y为纵坐标绘制
标准曲线 。绿原酸线性回归方程为 Y =609724x
-28799.2 , R2=0.999967。结果表明 ,绿原酸在0.8—
4.8 μg内与峰面积具有良好的线性关系。 ⑤精密度试
验。将5月 19日的样品供试品溶液连续进样 5次 ,每
次10 μl ,测定绿原酸的峰面积 。结果绿原酸 RSD平均
为1.62%,精密度良好 。⑥稳定性试验 。取 5月 19日
的样品供试品溶液 ,分别于 1h 、2h 、4h 、8h 、10h进样 ,测
定绿原酸峰面积 ,结果绿原酸 RSD平均为 1.23%(n=
5),表明样品在制备成供试品溶液后的 24h 内稳定。
⑦重现性试验。分别重复制备 5月 19日的样品供试
品溶液5次 ,进样测定 ,绿原酸 RSD平均为 1.45%(n
=5),表明本测定方法重复性良好 。 ⑧回收率试验。
精确称取上述已知绿原酸含量的 5 月 19 日的样品
2.0000g ,计算绿原酸的含量 ,精密加入绿原酸对照品
溶液 1.0ml。按以上方法制备供试品溶液 ,并测定供
试品溶液中绿原酸的峰面积 ,计算出加样后绿原酸的
含量 、回收率及相对标准偏差 , 结果回收率平均为
99.6%(n=5),RSD平均为1.56%(n=5)。
2.2　金丝桃苷含量测定
主要有:①色谱条件。色谱柱Apollo-C18(4.6mm
×250mm , 5um);流动相甲醇-0.1%冰醋酸(55∶45);
体积流量 1ml/min;柱温 30℃;检测波长 360nm;进样
10μl。②对照品溶液的制备 。精密称取干燥金丝桃苷
对照品 0.002g ,分别置于 10ml容量瓶中 ,加甲醇使其
溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 0.2 mg/ml的金丝桃
苷对照品溶液。 ③样品溶液的制备 。按照以上方法制
备。 ④线性关系考察 。分别精密吸取对照品溶液 2μl、
4μl 、8μl 、10μl 、12μl ,按上述色谱条件测定峰面积 ,以进
样量 X为横坐标 ,峰面积 Y为纵坐标绘制标准曲线。
金丝桃苷的线性回归方程为 Y=260055x-41018.9 , R2
=0.999989。结果表明 ,金丝桃苷在 0.4-2.4μg 内与
峰面积有良好的线性关系。 ⑤精密度试验 。将 5月
19日的样品供试品溶液连续进样5次 ,每次10μl ,测定
金丝桃苷的峰面积。结果表明 ,金丝桃苷 RSD平均为
1.55%(n=5),精密度良好。 ⑥稳定性试验 。取 5月
19日的样品供试品溶液 ,分别在 1h 、2h 、4h 、8h 、10h进
样1 次 ,测定金丝桃苷的峰面积 ,结果金丝桃苷 RSD
平均为 1.58%(n=5),表明样品在制备供试品溶液后
至少 24h内稳定 。⑦重现性试验。分别重复制备 5月
19日的样品供试品溶液 ,连续进样 5次 ,进样测定的
金丝桃苷 RSD平均为 1.38%(n=5),表明本测定方法
重复性良好。⑧回收率试验。精确称取上述已知金丝
桃苷含量的5月 19日的样品 2.0000g ,计算金丝桃苷
的含量 ,精密加入金丝桃苷对照品溶液 1.0 ml。按以
上方法制备供试品溶液 ,并测定供试品溶液中金丝桃
苷的峰面积 ,计算出加样后金丝桃苷的含量 、回收率及
相对标准偏差 ,回收率平均为 98.9%(n=5), RSD 分
别为 1.48%(n=5)。
2.3　含量测定结果
在上述色谱条件下 ,分别进样测定不同采收期的
野生刺五加叶与仿生栽培刺五加叶金丝桃苷和绿原酸
含量 ,进样量 20μl ,统计分析结果见表 1。
　　表 1　 不同采收期野生刺五加叶与仿生栽
培刺五加叶金丝桃苷和绿原酸含量
采收期 金丝桃苷(%) 绿原酸(%)野生 仿生栽培 野生 仿生栽培
05-09 0.133 0.237 0.291 0.155
05-19 0.088 0.355 0.704 0.899
05-29 0.156 0.458 0.620 0.777
06-08 0.109 0.478 0.135 0.562
06-19 0.056 0.295 0.184 0.869
07-24 - 0.244 - 0.265
08-03 - 0.365 - 0.656
08-13 0.052 0.313 0.091 0.569
　　注:“ -”代表主成份含量特别低。
(下转第 965页)
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·实验与技术·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　资源开发与市场 Resource Development&Market 2010 26(11)
图 6　初始浓度的影响
4　结论
本文利用LDH的“结构记忆”效应 ,在 LDH结构恢
复的同时实现了硝酸盐氮的去除 。实验表明 ,焙烧水
滑石对硝酸盐氮显示出了优异的吸附性能 。当 pH 为
9 、温度 25℃、反应时间 120min 、HTC 投加量 0.1g/
100ml 、振荡速度 150r/min 、硝酸盐氮初始浓度 100mg/L
时 ,焙烧水滑石对硝酸盐氮的去除率高达 96.73%,为
高浓度含硝酸盐氮废水的处理和水体富营养化的控制
提供了参考。
本文的研究表明 ,在实验浓度范围内 ,焙烧水滑石
吸附硝酸盐氮是一个吸热过程 ,吸附等温线符合 Fre-
undlich等温方程。
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(上接第 962页)
3　讨论
本实验选用甲醇—水 、甲醇—0.1%磷酸溶液 、甲
醇—0.2%磷酸溶液 、乙腈—0.1%磷酸溶液的比较表
明 ,甲醇—0.1%冰醋酸(3∶7)、甲醇 —0.1%冰醋酸(55
∶45)分别对绿原酸 、金丝桃苷的分离度较好 ,出峰时间
适中 ,与杂质分离完全 ,峰形无拖尾现象 ,故选此作为
流动相。
从表 1可见 ,在叶的整个生长周期内 ,仿生刺五加
叶中金丝桃苷 、绿原酸含量都显著高于野生刺五加叶。
仿生刺五加叶可替代野生刺五加叶 ,这为解决刺五加
资源短缺问题提供了可行性依据。
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