全 文 ：一较大而浓重的斑点 ,高效液相色谱含量测定不符
合规定;伪品升华 、显色反应均不呈正反应 ,薄层色
谱除与类似品相同特征外 ,在 Rf值约为 0.5处斑点
颜色较浅 (正品安息香及类似品此斑点颜色较浓
重),且高效液相色谱无与苯甲酸对照品保留时间
相同的色谱峰。经性状和鉴别试验符合规定的样
品 ,其苯甲酸的含量不少于 25.0%者符合药典规
定;而苯甲酸的含量低于 25.0%的判断为劣质品。
4.3　不同来源的商品安息香中 ,无论真 、伪或劣质
品 ,绝大多数均嵌夹有类白色不透明状结块 ,我们又
将其结块单独取出 ,一同进行高效液相色谱苯甲酸
含量测定。结果表明:正品 、类似品的白色结块苯甲
酸含量比其相应的样品的含量要高 ,科学地印证了
俗称 “金银香 ”质量好的传统质量评价理论是正确
的 。有的样品中虽也凝结有白色结块 ,但不含苯甲
酸 ,应确定为伪品 。
4.4　通过上述综合实验分析表明:性状上除了增
加对夹杂的类白色或黄白色不透明结块的描述外 ,
2010年版中国药典对安息香的检定方法 ,较 2005
年版的更加准确 ,针对性强;其【含量测定】方法更
加简便 ,可操作性强 ,能够达到鉴别真伪 、控制质量
的目的。
参 考 文 献
[ 1] 中华人民共和国卫生部药政管理局等编 .现代实用本
草 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 2000:228-230.
[ 2] 张贵君主编 .现代中药材商品通鉴 [ M] .北京:中国中
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[ 3] 南京中医药大学编 .中药大辞典 [ M] .上册 .上海:上
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海南产木豆叶 HPLC指纹图谱研究
黄　松 1, 2 ,孙　琳 1 ,赖小平1, 2＊ ,吴　玲 1 ,李锦清 1
(1.广州中医药大学 ,广东 广州 510006;2.东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院 , 广东 东莞
523808)
　　摘要　目的:采用高效液相色谱法对采自海南的 10批木豆叶药材进行指纹图谱研究 ,为木豆叶药材的质量控
制提供依据。方法:采用 DiamonsilC18(2)(250mm×4.6mm, 5 μm),以甲醇-1%冰醋酸水溶液为流动相进行梯度
洗脱 , 流速 1.0 mL/min, 柱温 40℃,检测波长 268 nm。结果:以 7个共有峰为评价指标 , 精密度和重复性试验中各
共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD均小于 3%, 10批样品相似度大于 0.9。结论:此方法精密度 、稳定性和
重复性良好 , 可用于木豆叶药材的质量控制。
关键词　木豆叶;指纹图谱;高效液相色谱法
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2011)05-0699-04
收稿日期:2010-10-15基金项目:国家自然基金重点资助项目(U0732004);广东省自然科学基金(9451040701003211)作者简介:孙琳(1984-),女 ,在读博士研究生 ,主要从事中药新药筛选与研发;E-mail:sunlin115@yahoo.cn。＊通讯作者:赖小平 , E-mail:lxp88@gzhtcm.edu.cn。
　　木豆叶为豆科植物木豆 Cajanuscajan(L.)Mil-
sp的干燥叶片 〔1〕。药材主要分布于长江以南的云
南 、海南 、广西 、贵州 、广东以及福建 、湖南 、四川 、江
西 、浙江 、台湾等省区 ,可用于治疗股骨头坏死 、烧
伤 、褥疮等 〔2〕。目前 ,木豆叶的质量控制多采用牡
荆苷 、异牡荆苷作为指标 ,但仅仅依靠单一或几个化
学成分并不能反映药材中其他成分的情况 。鉴于色
谱指纹图谱的方法可以有效地评价药材质量 ,故本
实验采用 HPLC法 ,建立木豆叶药材的指纹图谱 ,并
对来自海南的 10批木豆叶药材进行比较研究 ,以期
为其鉴别与质量控制提供参考依据。
1　仪器与材料
1.1　仪器　日本岛津高效液相色谱仪(型号:LC-
20A(UV/Vis));Sartorius万分之一电子天平(型号:
BSA224S-CW);Sartorius十万分之一电子天平 (型
号:CP225D);数控超声清洗器(型号:KQ5200DA)。
1.2　材料　甲醇 (天津市大茂化学试剂厂 ,分析
纯;德国 Merck公司 ,色谱纯)、乙醇(天津市大茂化
·699·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2011.05.016
学试剂厂 ,分析纯)、冰乙酸(天津市大茂化学试剂
厂 ,分析纯)、重蒸去离子水(实验室制备);牡荆苷
对照品(批号:111687-200602)购于中国药品生物制
品检定所;木豆叶药材来源见表 1,由广州中医药大
学中药学院赖小平教授鉴定为豆科植物木豆 Caja-
nuscajan(L.)Milsp的干燥叶片 。
　表 1 　10批木豆叶药材来源
编号 来源 产地 采集时间
S1 广州致信药业有限公司 海南 2009.09
S2 广州致信药业有限公司 海南 2010.09
S3 广州中医药大学第一附属医院 海南 2009.11
S4 广州中医药大学第一附属医院 海南 2010.04
S5 自采 海南 2009.11
S6 自采 海南石山 2010.08
S7 自采 海南市郊 2010.08
S8 自采 海南龙塘 2010.08
S9 自采 海南龙桥 2010.08
S10 自采 海南灵山 2010.08
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性　色谱柱:Diamonsil
C18(2)(250 mm×4.6 mm, 5 μm);MeOH(A)-1%
HAc(B)为流动相梯度洗脱::0 ～ 10 min(10%A～
20%A), 10 ～ 40 min(22%A～ 24%A), 40 ～ 65 min
(24%A～ 33%A), 65 ～ 80 min(33%A～ 70%A), 80
～ 100 min(70%A～ 80%A), 100 ～ 115 min(80%A-
93%A), 115 ～ 125 min(100%A);流速:1.0 mL/
min;柱温:40 ℃;进样体积:10 μL;检测波长:268
nm。
2.2　对照品溶液的制备 　取牡荆苷对照品适
量 ,用甲醇制成每 1 mL含 40.4 μg的对照品溶
液 。
2.3　供试品溶液的制备　取各批木豆叶药材粉末
约 5.0 g,精密称定 ,置于锥形瓶中 ,加入蒸馏水 100
mL,加热回流提取 1h,放冷 ,过滤 ,滤液用蒸馏水定
容至 100mL,过 0.45 μm微孔滤膜 ,即得。
2.4　测定方法　分别精密吸取供试品溶液 10μL,
注入液相色谱仪 ,记录 120 min色谱图 。
2.5　精密度试验　取同一供试品溶液 ,连续进样 5
次。结果色谱图中各共有峰的相对保留时间的
RSD小于 0.1%,相对峰面积的 RSD小于 2%,符合
指纹图谱要求 ,表明仪器精密度良好。
2.6　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别在 0、
2、6、18、24h进样测定 ,结果各共有峰的相对保留时
间的 RSD小于 0.5%,相对峰面积的 RSD小于 2%,
表明供试品溶液在 24 h内稳定 。
2.7　重复性试验　取同一批号药材 5份 ,照 “2.3”
项下方法制备供试品溶液 ,进样检测 ,结果各共有峰
的相对保留时间的 RSD小于 0.5%,相对峰面积的
RSD小于 3%,表明方法的重复性良好 。
2.8　指纹图谱的建立及分析
2.8.1　共有峰的标定:将 10批木豆叶药材的指纹
图谱进行匹配(见图 1),结果 1 ～ 7号峰在 10批样
品的色谱图中均出现。因此标定此 7个峰为共有指
纹峰 ,并据此建立木豆叶药材的 HPLC指纹图谱 ,见
图 2。
2.8.2　共有指纹峰相对保留时间和相对峰面积:
以牡荆苷色谱峰的保留时间和峰面积为 1,计算其
他各峰的相对保留时间和相对峰面积。结果见表
2,表 3。由表 2和表 3可见 ,各批供试品指纹图谱
的重现性较好 ,但各批样品间共有指纹峰的相对峰
面积有一定差异。
图 1　10批木豆叶药材指纹图谱
·700· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月
图 2　木豆叶对照指纹图谱
S.牡荆苷
　　表 2 　10批木豆叶药材共有指纹峰的相对保留时间
峰号 不同批次编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 RSD/%
1 0.5836 0.5837 0.5841 0.5840 0.5838 0.5837 0.5839 0.5841 0.5838 0.5839 0.0282
2 0.6475 0.6465 0.6482 0.6483 0.6475 0.6473 0.6473 0.6479 0.6480 0.6484 0.0899
3 0.6665 0.6710 0.6672 0.6723 0.6664 0.6665 0.6672 0.6665 0.6701 0.6685 0.3213
4 0.8151 0.8200 0.8155 0.8212 0.8148 0.8151 0.8172 0.8168 0.8201 0.8159 0.2927
5 0.8772 0.8839 0.8775 0.8845 0.8766 0.8770 0.8789 0.8785 0.8813 0.8806 0.3254
6 1.0598 1.0599 1.0595 1.0596 1.0603 1.0594 1.0598 1.0601 1.0605 1.0599 0.0337
7 1.1242 1.1183 1.1237 1.1186 1.1246 1.1245 1.1195 1.1224 1.1189 1.1235 0.2368
　　表 3 　10批木豆叶药材共有指纹峰的相对峰面积
峰号 不同批次编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 RSD/%
1 1.8207 1.8207 2.0586 2.3260 2.5658 2.7991 2.4796 1.8827 2.3571 1.9294 15.8118
2 0.7004 0.7004 0.6007 1.7783 0.5909 0.8099 0.8705 0.6358 1.3894 0.9502 43.0178
3 1.0311 1.0311 1.0503 2.3688 0.8660 1.1508 0.9464 1.1958 2.3545 0.7561 46.0086
4 3.1246 3.1246 2.7860 4.5196 3.4176 3.3811 3.0467 2.9946 2.4689 3.4818 16.8453
5 3.3646 3.3646 3.0409 5.5657 3.8304 3.5790 3.7569 3.9411 5.2389 5.0546 21.7114
6 0.5452 0.6511 1.4383 0.4760 0.5147 0.5462 0.6831 1.3953 0.7064 0.7064 47.9030
7 0.5199 1.0025 0.7317 0.5024 1.0066 0.5793 0.7925 0.9937 0.7264 0.7264 28.0951
　　表 4 　海南产木豆叶指纹图谱相似度结果
计算方法
不同批次编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
中位数 0.947 0.958 0.945 0.949 0.953 0.957 0.959 0.952 0.941 0.943
均值 0.933 0.961 0.935 0.932 0.959 0.978 0.973 0.977 0.934 0.931
·701·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月
2.8.3　相似度分析:将色谱工作站数据导入国家
药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A版 ,通过相似度计算软件得出木豆叶指纹图
谱的共有模式 ,并以此共有模式为标准 ,对每批药材
进行相似度评价 ,结果见表 4,表明海南产木豆叶相
似度较高。
3　讨论
3.1　检测波长的选定　取木豆叶药材供试品溶液
进行紫外扫描 ,结果在 268和 330 nm有较强的吸
收 ,且在 268 nm有最大吸收 。检测波长在 268 nm
时 ,色谱峰数量较多 ,基线平稳 ,且各峰分离度较好 ,
故选定 268nm作为检测波长。
3.2　流动相的选择　实验过程中选择了多种流动
相系统梯度洗脱方式:甲醇 -水 、乙腈 -水 、乙腈-1%冰
醋酸水溶液 、甲醇 -1%冰醋酸水溶液 ,并对梯度洗脱
程序进行优化 ,结果表明:以甲醇 -1%冰醋酸水溶液
为流动相梯度洗脱时 ,洗脱效果最佳 ,各色谱峰分离
度较好 ,峰型尖锐 ,保留时间适中。
3.3　色谱柱的选用　实验中对以下 5种不同品牌
色谱柱进行了考察:DiamonsilC18(2)(250mm×4.6
mm, 5 μm)、Phenomenexsynergi4 μFusion-RP80
(250mm×4.6 mm, 5 μm)、PlatisilTM ODS(250 mm
×4.6 mm, 5μm)、Kromasil100-5C18(250mm×4.6
mm, 5μm)和 CapcelPakC18 UG120 S5(250 mm×
4.6mm, 5μm)。结果 DiamonsilC18(2)(250 mm×
4.6mm, 5μm)色谱柱相对于另外 4种色谱柱而言 ,
出峰数量较多 ,峰形对称性好 ,且分离度较高 ,故选
之 。
3.4　供试品溶液制备方法的选择　实验中比较了
水提法 、水提-石油醚萃取法和水提 -石油醚萃取-不
同浓度醇沉法三种样品提取方法 ,结果显示三种方
法出峰数量 、峰形及分离度均无明显差别 ,因此选用
最为简便的水提法制备供试品溶液。
3.5　参照峰的选择　木豆叶中主要含有牡荆苷 、
异牡荆苷 、木犀草素 、芹菜素 、柚皮素 -4, 7二甲醚等
黄酮类成分 ,从木豆叶对照指纹图谱(图 2)上可以
看出 ,其中牡荆苷的峰高适中 ,与相邻峰的分离度较
好 ,故将牡荆苷定为参照峰。
从 10批木豆叶药材指纹相似度结果可以看出 ,
同一产地的木豆叶指纹图谱相似度较高 ,均大于
0.9。但是 ,各峰相对峰面积有一定的差异 ,说明药
材之间的内在质量是有差异的 。实验结果表明 ,通
过指纹图谱整体图形 、共有特征峰 、相对保留时间等
参数可对药材进行鉴定 ,通过各共有峰相对峰面积
可对药材的内在质量进行评价。目前木豆叶药材的
来源主要依靠野生资源 ,不同的产地 、采收期以及贮
藏年限等 ,均会对其质量产生影响 。因此 ,木豆叶药
材应在保证来源相同的前提下才能保证药品内在质
量的一致性。本实验对海南产木豆叶的 HPLC指纹
图谱进行了初步研究 ,为进一步探讨木豆叶的物质
基础及作用机制提供了依据 。
参 考 文 献
[ 1] 李功营 , 唐洪梅 ,丘振文 , 等.岭南常用中药木豆叶中牡
荆苷的 HPLC含量测定 [ J] .中药新药与临床药理 ,
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山海螺的薄层鉴别及紫丁香苷的含量测定
王文永 ,赵仕丞 ,刘东新
(河北省唐山市丰润区人民医院 ,河北 唐山 064000)
　　摘要　目的:对山海螺药材中紫丁香苷进行薄层鉴别及含量测定。方法:以紫丁香苷为对照品 ,进行薄层色谱
鉴别 , 用高效液相色谱法测定紫丁香苷的含量。采用 AgilentC18(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱 , 甲醇-水(20-80)
为流动相 ,检测波长为 265 nm, 流速 0.8mL/min。结果:薄层色谱中紫丁香苷的斑点清晰;高效液相色谱法精密度 、
重复性与稳定性良好 , 紫丁香苷在 0.1652 ～ 1.652μg范围内有较好的线性关系 , 平均加样回收率为 98.67%, RSD
为 0.91%。结论:该方法可用于山海螺的鉴别和紫丁香苷的含量测定。
关键词　山海螺;紫丁香苷;薄层鉴别;含量测定
中图分类号:R282.5/R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2011)05-0702-03
收稿日期:2010-04-27
·702· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月