全 文 ：收稿日期:2015 － 03 － 05;修回日期:2015 － 03 － 30
基金项目:宁波市科技局项目(编号 2012C10035)
作者简介:史钧信，硕士，研究方向为鱼类分子生物学，E-mail:shijunxin2010@ 126． com;
通信作者:薛良义，博士，教授，研究方向为分子生物学，E-mail:xueliangyi@ nbu． edu． cn。
doi∶10． 3969 / j. issn. 2095 － 1736． 2015. 06. 012
蓝点马鲛 mstn克隆及表达分析
史钧信1，薛良义1，黄红丽1，郑春静2
(1． 宁波大学 海洋学院，宁波 315211;2． 宁波市海洋与渔业研究院，宁波 315000)
摘 要 利用同源克隆和 cDNA末端快速扩增(ＲACE)技术克隆了蓝点马鲛肌肉生长抑制素基因(mstn) ，并分析了
mstn的结构特征和亲缘关系。克隆的蓝点马鲛mstn共 3870 bp，包括 3个外显子 1131 bp和 2个内含子 1201 bp。外显
子Ⅰ379 bp，内含子Ⅰ374 bp，外显子Ⅱ371 bp，内含子Ⅱ827 bp，外显子Ⅲ 381 bp，5UTＲ 108 bp，3UTＲ 1430 bp。3UTＲ含
有加尾信号 AATAAA。mstn共编码 376个氨基酸，包括信号肽(1 aa ～22 aa)、TGF-β前肽区域(37 aa ～257 aa)和 TGF-
β功能域(282 aa ～376 aa)。在内含子Ⅱ和 3UTＲ发现微卫星序列，分别为(CA)5和(CA)10 TG(CA)6 CT(CA)10。蓝点
马鲛 MSTN具有脊椎动物 MSTN的共同特征，含一个蛋白酶水解位点 ＲAＲＲ和 9 个保守的半胱氨酸残基。脊椎动物
MSTN氨基酸序列的亲缘关系分析发现，蓝点马鲛与鳜鱼亲缘关系最近，与其他鲈形总目鱼类聚为一簇。以 β-actin为
内参基因，qPCＲ分析表明，蓝点马鲛 mstn在二龄鱼不同组织表达情况不同，在鳃、肝和肾中表达较高，而在肌肉、肠、
胃、脾和性腺中表达量较低。这些结果可为蓝点马鲛肌肉生长和发育的分子机制研究提供信息。
关键词 蓝点马鲛;肌肉生长抑制素基因;克隆;ＲACE;组织表达
中图分类号 S917． 4 文献标识码 A 文章编号 2095 － 1736(2015)06 － 0012 － 05
Cloning and expression analysis of mstn in Scomberomorus niphonius
SHI Jun-xin1，XUE Liang-yi 1，HUANG Hong-li 1，ZHENG Chun-jing2
(1． School of Marine Science，Ningbo University，Ningbo 315211;
2． Ningbo Ocean ＆ Fishery Institute，Ningbo 315000，China)
Abstract Scomberomorus niphonius is widely distributed in Chinas coastal area． It is a kind of migratory species and has been a very
important part in Chinas fishery catches till now． mstn has attracted the attention of large numbers of researchers since its important
effect on muscle growth． Homology cloning and rapid amplification of cDNA ends (ＲACE)were employed to clone mstn of S． nipho-
nius，and its structural characteristics and phylogenetic relationship were also analyzed in this paper． The length of cloned mstn was
3870 bp，including 1131 bp of 3 exons and 1201 bp of 2 introns． ExonⅠ，intronⅠ，exonⅡ，intronⅡ and exonⅢ were 379 bp，374
bp，371 bp，827 bp，and 381 bp，respectively． 5UTＲ and 3UTＲ were 108 bp and 1430 bp，respectively． A polyA signal AATAAA
was found in 3UTＲ． The whole sequences encoded 376 amino acids，containing a putative signal peptide (1aa － 22aa) ，a TGF-β
propeptide domain (37aa － 257aa)and a TGF-β functional domain (282aa － 376aa)． Two microsatellites were found，(CA)5 in in-
tronⅡ and (CA)10TG(CA)6 CT(CA)10 in 3UTＲ． The similar microsatellites were also found in other fishes，which suggested that
these regions might have some special functions． The common domains of vertebrate MSTNs were found in S． niphonius MSTN，inclu-
ding a conservative hydrolytic site (ＲAＲＲ)and 9 cysteine residues． The phylogeny analysis showed that the relationship between S．
niphonius and S． chuatsi was the closest，and S． niphonius grouped into the same branch with other Percomorpha fishes． mstn expres-
sions in different tissues were examined by qPCＲ，and β-actin was employed as housekeeping gene． qPCＲ results showed that mstn
transcriptional level varied among different tissues in two years old S． niphonius，with a high expression in gill，liver and kidney，and
a low expression in muscle，intestine，stomach，spleen and gonad． These results provide useful information for the study of the molecu-
lar mechanism of S． niphonius muscle growth and development．
Keywords Scomberomorus niphonius;mstn;cloning;ＲACE;tissue expression
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蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius) ，属于鲈形总
目(Percomorpha)、鲈形目(Perciformes)、鲅科(Cybi-
idae)、马鲛属(Scomberomorus) ，俗称鲅鱼、马鲛，广泛
分布于中国沿海。蓝点马鲛具有洄游的习性，每年 4、
5 月份洄游到近岸的产卵场进行繁殖。其生长速度
快，种群量大，一直以来，都是中国渔业的重要捕捞对
象。目前由于其尚未实现全人工养殖，关于蓝点马鲛
的研究并不多，现有研究主要集中在生长特性［1 － 2］、形
态学［3 － 4］、种群鉴别［5 － 7］等传统生物学研究上。
肌肉生长抑制素(myostatin，MSTN)又称为生长分
化因子 8(growth differentiation factor 8，GDF-8) ，属于
转化生长因子 β(Transforming growth factor-β，TGF-β)
超家族，是肌肉生长的负调控因子。敲除 mstn 可导致
小鼠肌细胞肥大［8］，应用 ＲNAi 技术沉默 mstn，可导致
斑马鱼(Danio rerio)肌肉增生［9］，红鳍东方鲀(Takifugu
rubripes)mstn第 1197 位的碱基 C突变为 T可导致其体
重、体长、体高显著增长［10］，这说明该基因在鱼类肌肉
生长发育中起重要作用。因此，mstn 得到了广大水产
科研工作者的广泛关注，现已克隆得到多种鱼类 mstn，
如斑鳜(Siniperca scherzeri)［11］、鳜鱼(Siniperca chuat-
si)［12］、眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)［13］、牙鲆
(Paralichthys olivaceus)［14］、波纹短须石首鱼(Umbrina
cirrosa)［15］等。随着研究的深入，发现鱼类 mstn 可以
在除肌肉外的多个组织中表达，如脑、肠、鳃、肾、性腺
等［16］，因此其有可能对其他组织的发育也产生影响。
目前鱼类 mstn的研究已成为热点，如 Genciana等［17］使
用电介导双链 ＲNA和短发卡结构 ＲNA在鲈鱼(Dicen-
trarchus labrax)体内进行 ＲNA 干扰实验;Sang 等［18］对
许氏平鮋(Sebastes schlegeli)MSTN1 前肽进行原核表
达;Poonmanee等［19］克隆了斑点胡子鲶(Clarias macro-
cephalus)的 mstn 并研究了饥饿对 mstn 表达的影响;
Carolina等［20］研究 mstn1b 5侧翼区单核苷酸多态对大
西洋鲑鱼(Salmo salar)生长的影响;Elisabeth 和 Bruria
等［21］对金头鲷(Sparus aurata)mstn2 的克隆及其启动
子区和第一内含子单核苷酸多态性的研究等。
在动物体内 mstn首先是被翻译成前体蛋白，在蛋
白酶的水解作用下形成前肽与成熟肽两部分。成熟肽
即 TGF-β功能域，具有抑制肌肉生长的作用，而前肽可
与成熟肽结合形成二聚体，从而抑制成熟肽的功能。
本实验室应用转基因技术将大黄鱼 mstn 前肽基因导
入红鲤受精卵，发现其可显著促进红鲤生长［22］;将大
黄鱼 MSTN1 前肽的抗体注射大黄鱼幼鱼，发现实验组
增重低于对照组［23］。因此作为调控肌肉生长的主要
基因，mstn在育种上具有潜在的应用前景。由于蓝点
马鲛生长相关基因研究资料十分匮乏，蓝点马鲛 mstn
的研究还未见报道，本文对蓝点马鲛 mstn 进行了克隆
并且对 mstn的组织表达特异性进行了研究，可以丰富
蓝点马鲛的基因信息，并为蓝点马鲛肌肉生长和发育
的分子机制研究奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 材料
实验用蓝点马鲛为二龄，体重(1300 ± 10)g，全长
(63 ± 1)cm，捕自象山港(29°39N，121°50E)。剪取
鱼的背部肌肉保存至 75% 乙醇，取肌肉、肠、鳃、肝、
胃、心脏、脾、性腺和肾等组织用 ＲNA 保护液固定，
－ 20℃保存。
1． 2 方法
1. 2． 1 基因组 DNA及总 ＲNA的提取
用酚氯仿法［24］提取蓝点马鲛肌肉中基因组 DNA，
Trizol法分别提取上述组织中的总 ＲNA。紫外分光光
度计测量 DNA、ＲNA的浓度，1%琼脂糖凝胶电泳检测
DNA、ＲNA的完整性。
1. 2． 2 基因组 DNA的 PCＲ扩增
根据眼斑拟石首鱼 mstn 扩增编码序列的引物［12］
合成蓝点马鲛引物 MSTN Primer (表 1) ，用于扩增蓝
点马鲛的编码序列。PCＲ 反应体系:基因组 DNA 200
ng，0. 2 mmol /L dNTPs，1. 25 U Taq，1 × PCＲ Buffer
(Mg2 + plus) ，MSTN Primer 两条引物各 10 μmol /L，无
菌水加至 50 μL。PCＲ程序:94 ℃预变性 2 min;35 个
循环(94 ℃变性 45 s，54 ℃退火 45 s，72 ℃延伸 3
min) ;72 ℃延伸 10 min，16 ℃保存 10 min。PCＲ 产物
经 1%琼脂糖凝胶电泳后，用胶回收试剂盒(Sangon
Biotech)纯化。将回收的产物与 pMD19-T 载体连接，
并将连接产物转化感受态细胞 DH5α。筛选阳性单克
隆进行菌落 PCＲ检测，将含有目的条带的菌液送至华
大基因公司测序。
1. 2． 3 cDNA的 PCＲ扩增
按照 HiFiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit 试剂
盒(Cwbiotech)的使用方法，以肌肉组织提取的总 ＲNA
为模板，合成 cDNA 第一链。以 MSTN Primer 为引物，
以合成的 cDNA 为模板进行 PCＲ 扩增。将 PCＲ 产物
克隆、测序，用以确定蓝点马鲛 mstn 的外显子和内含
子。根据已获得的 cDNA序列，设计用于 3ＲACE和 5
ＲACE的特异性引物(表 1)。3ＲACE按 Takara 3-Full
ＲACE Core Set with PrimeScriptTM ＲTase 试剂盒程序进
行。用引物 3ＲACE Outer Ｒeaction 对制备的 cDNA 进
行第一轮扩增，然后使用引物 3ＲACE Inner Ｒeaction1
和 3ＲACE Inner Ｒeaction2，以 3ＲACE Outer Ｒeaction
扩增产物为模板进行第 2 轮、第 3 轮 PCＲ扩增，经琼脂
糖凝胶电泳检测后克隆测序。5ＲACE按照 Takara 5-
Full ＲACE Kit with TAP 试剂盒程序进行。用引物 5
ＲACE Outer Ｒeaction 对制备的 cDNA 进行第一轮扩
增，然后用引物 5 ＲACE Inner Ｒeaction 进行第二轮
PCＲ扩增，PCＲ产物经 1%琼脂糖凝胶电泳检测后克
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隆测序。
表 1 实验用引物序列及退火温度
Table 1 Sequence of primers and annealing temperature
引物名称 引物序列(5→3)
退火温度
(℃)
MSTN Primer
3ＲACE Outer
Ｒeaction
3ＲACE Inner
Ｒeaction1
3ＲACE Inner
Ｒeaction2
5ＲACE Outer
Ｒeaction
5ＲACE Inner
Ｒeaction
MSTN qPCＲ
β-actin qPCＲ
F:ATGCATC(T /C)GTCTCAGATTGTG
Ｒ:TCA(A /C)GAGCA(T /G)CCACAACGGTC
F:GCAAAGAGCAGATAGTCTATGGC
Ｒ:TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT
F:GGTGGACCGTTGTGGCTGCTCTTG
Ｒ:CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG
F:CCACAAACAGCCCGACCCTCCCAC
Ｒ:CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG
F:CATGGCTACATGCTGACAGCCTA
Ｒ:TGCTCCGTGTCTGCTGGGC
F:CGCGGATCCACAGCCTACTGATGATCAGTCGATG
Ｒ:GGTGGCGGAGGGCTGCTGGTGC
F:GAACCCGAGTCCATCGTCCA
Ｒ:GTGCCTGCTCCCGTCTGC
F:CAGGGAGTGATGGTGGGTATG
Ｒ:GCTCCTCTGGGGCAACTCTC
54
55
62
63
59
66
58
58
图 1 蓝点马鲛 mstn核苷酸序列及推断的氨基酸序列
Fig 1 The sequences of S． niphonius mstn gene and the predicted amino acid
外显子用大写字母表示;内含子、5UTＲ和 3UTＲ用小写字母表示;poly(A)加尾信号(aataaa)用波浪线标
出;微卫星序列用下划线标出;氨基酸用单个大写字母表示，排在对应核苷酸序列下面，终止密码子用* 号
表示;半胱氨酸残基和 ＲXXＲ蛋白水解位点用阴影标出。
1. 2． 4 序列分析
将获得的 DNA 序列和 cDNA 序列进行比对，确定
内含子和外显子区域，根据外显子序列推断氨基酸序
列。Blast 确定 mstn 核苷酸序
列及氨基酸序列的同源性。用
Clustal W进行氨基酸序列多重
比对，比对的物种包括:人(Ho-
mo sapiens)、大鼠(Ｒattus norve-
gicus)、牛(Bos Taurus)、绵羊
(Ovis aries)、野猪(Sus scrofa)、
鲤鱼 (Cyprinus carpio)、鲫鱼
(Carassius auratus)、斑马鱼、黑
鲫(Carassius carassius)、北极红
点鲑(Salvelinus alpines)、虹鳟
(Oncorhynchus mykiss)MSTN1、
虹鳟 MSTN2、银鲑(Oncorhyn-
chus kisutch ) MSTN1、银 鲑
MSTN2、大菱鲆 (Scophthalmus
maximus)、牙鲆、点带石斑鱼
(Epinephelus coioides)、鳜鱼、大
黄鱼(Larimichthys crocea)、眼斑
拟石首鱼、条纹石鮨(Morone
saxatilis)、鲈鱼、红鳍东方鲀
MSTN1、红鳍东方鲀 MSTN2。
使用 MEGA 4. 0 中的 Neighbor-
Joining法构建系统进化树，自
展值为 10000。用 SignalP 4. 1
Server (http:/ /www． cbs． dtu．
dk /services /SignalP /)分析信号
肽序列。
1. 2． 5 qPCＲ分析 mstn在不同组织中的表达
使用 Takara 公司的 PrimeScriptTM ＲT reagent Kit
with gDNA Eraser(Perfect Ｒeal Time)试剂盒对各组织
的总 ＲNA进行逆转录。根据序列分析的结果，跨内含
子分别设计 MSTN qPCＲ 引物一对。以本实验室克隆
的蓝点马鲛 β-actin为内参基因，同样跨内含子设计 β-
actin qPCＲ引物(表 1)。用两对引物对蓝点马鲛肌肉
组织 cDNA进行常规 PCＲ扩增，验证引物的特异性，并
对扩增片段进行克隆测序，确保其为目的序列。验证
之后，按照 Takara公司的 SYBＲ Premix Ex TaqTMⅡ(Tli
ＲNaseH Plus)试剂盒要求进行 qPCＲ。
2 结果
2. 1 蓝点马鲛 mstn的结构特征
通过对 mstn 基因组 DNA 扩增共获得 2332 bp 基
因序列(GenBank登录号:KP399600) ;对 cDNA扩增获
得 2669 bp基因序列(GenBank 登录号:KP452508) ，其
中 3ＲACE扩增分 2 次进行，第 1 次获得 356 bp，第 2
次获得 1074 bp。将扩增的 DNA 序列与 cDNA 序列进
行拼接，共获得了 3870 bp 的基因序列，包括 3 个外显
子(exons)和 2 个内含子(introns)。外显子Ⅰ379 bp，
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内含子Ⅰ374 bp，外显子Ⅱ371 bp，内含子Ⅱ827 bp，外
显子Ⅲ381 bp，5非翻译区(UTＲ)108 bp 以及 1430 bp
的 3UTＲ。在 3UTＲ 存在加尾信号 AATAAA 和 poly
(A)尾。外显子总长 1131 bp，共编码 376 个氨基酸;
内含子总长 1201 bp。此外，在内含子Ⅱ和 3UTＲ分别
发现(CA)5和(CA)10 TG(CA)6 CT(CA)10的微卫星序
列(图 1)。
Blast搜索表明蓝点马鲛 mstn 核苷酸序列和氨基
酸序列与鳜鱼、鲈鱼、条纹石鮨、眼斑拟石首鱼等鱼类
存在 90%以上的同源性，蓝点马鲛 MSTN 包含两段保
守区域:TGF-β 前肽区域(37aa ～ 257aa)和 TGF-β 功
能域(282aa ～ 376aa)。信号肽的预测结果显示，在 22
和 23 氨基酸残基之间存在一个信号肽切割位点，表明
前 22 个氨基酸残基是信号肽序列。
2. 2 蓝点马鲛 MSTN进化树
为分析蓝点马鲛 MSTN 的进化关系，根据 MSTN
氨基酸序列，使用 MEGA 4. 0 构建了 21 种脊椎动物
MSTN的进化树(图 2)。蓝点马鲛与鳜鱼亲缘关系最
近，聚为一支;再与其他鲈形总目鱼类聚为一簇。
图 2 基于 MSTN氨基酸序列构建的进化树
Fig 2 The NJ phylogenetic tree based on amino acid sequences
人(ABI48390. 1)、大鼠(NP _062024. 1)、牛(BAE20190. 1)、绵羊
(AAX14033. 1)、野猪(ADQ74915. 1)、鲤鱼(ACS92640. 1)、鲫鱼
(AGＲ44669. 1)、斑马鱼(AAP85526. 1)、黑鲫(AGK84718. 1)、北极
红点鲑(CAH25443. 1)、虹鳟 MSTN1 (NP _ 001117754. 1)、虹鳟
MSTN2(NP_001117755. 1)、银鲑 MSTN1(AAＲ08901. 1)、银鲑 MSTN-
2(AAO15420. 2)、大菱鲆(ABU25351. 1)、牙鲆(ABD65405. 1)、点带
石 斑 鱼 (AAW47740. 1 )、鳜 鱼 (AEH16746. 1 )、大 黄 鱼
(AAW34054. 1)、眼 斑 拟 石 首 鱼 (ABH85412. 1)、条 纹 石 鮨
(AAK67983. 1 )、 鲈 鱼 (AAW29442. 1 )、 东 方 鲀 MSTN1
(ADT89782. 1)、东方鲀 MSTN2(NP_001027844. 1)。
2. 3 mstn的组织特异性表达
qPCＲ检测蓝点马鲛肌肉、肠、鳃、肝、心、胃、脾、性
腺、肾中 mstn 的表达情况，发现 mstn 在二龄蓝点马鲛
鳃、肝和肾中表达量较高，在其他组织中表达量较低
(图 3)。
3 讨论
本实验使用同源克隆以及 ＲACE 技术成功克隆得
到蓝点马鲛 mstn序列 3870 bp，有 3 个外显子和 2 个内
含子，共编码 376 个氨基酸序列。通过对基因组 DNA
和 cDNA扩增产物的比对，发现其内含子符合“GT……
AG”法则，这与其他鱼类 mstn［13 － 14］的特征一致。其氨
基酸序列具有 13 个半胱氨酸残基，一个蛋白酶水解位
点 ＲAＲＲ。整条肽链含有 N 端信号肽，一个 TGF-β 前
肽区域和 TGF-β 功能域，与其他脊椎动物 MSTN 特征
相似［25 － 26］，因此确定该序列是蓝点马鲛 mstn。通过核
苷酸和氨基酸序列比对以及系统进化树的构建，发现
获得的序列与鲈形总目鱼类 mstn 亲缘关系最近，这与
鱼类分类学上蓝点马鲛隶属于鲈形总目相一致。
图 3 MSTN 在蓝点马鲛不同组织的表达情况
Fig 3 The expression profiles of S． niphonius MSTN in different tissues
目前已经克隆到多种鱼类的 mstn，在某些鱼类发
现存在两种以上的 mstn，并且其表达状况不同［27 － 28］。
本实验克隆得到蓝点马鲛特异的 mstn 序列，经过序列
比对发现其与Ⅰ型 mstn较为接近，至于在蓝点马鲛是
否存在Ⅱ型还有待进一步探究。此外，在蓝点马鲛
mstn内含子Ⅱ和 3UTＲ 分别发现(CA)5和(CA)10 TG
(CA)6CT(CA)10微卫星序列，同样在大黄鱼
［29］内含子
Ⅱ存在(CA)4，在金鲷
［30］内含子Ⅱ存在(CA)10 TA
(CA)8，在眼斑拟石首鱼
［13］内含子Ⅱ和 3UTＲ 分别发
现(CA)4和(CA)7，在牙鲆
［14］内含子Ⅱ和 3UTＲ 分别
发现(CA)10和(CA)4CG(CA)6等，说明在鱼类 mstn 内
含子Ⅱ和 3UTＲ中广泛存在富含 CA重复的微卫星序
列。这些微卫星序列的功能有待进一步研究。
mstn最先是在哺乳动物中发现的［31］，随后也从鱼
类克隆到了 mstn，但是哺乳类和鱼类 mstn 的表达模式
却显著不同。mstn只在小鼠的骨骼肌中表达［31］，在牛
的骨骼肌、心肌中表达［32］;但在鱼类中发现其在各组
织广泛表达，张敏等［12］发现 mstn 在鳜鱼性腺、肾、眼、
脑、皮肤和胃中都有表达，且其表达量均较低;徐建勇
等［14］发现 mstn在 6 月龄的牙鲆性腺、肌肉、肾、脾组织
中都有表达，在肾和脾中表达量较高，在性腺、肌肉中
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表达量较低，且饥饿可以显著影响 mstn 的表达;杜富
宽等［25］发现 mstn在刀鲚鳃、肝、脾、肠、肾、肌肉、脑中
都有表达，其中在肌肉和脑组织中表达量较高，在其他
组织表达量较低;郁建锋等［33］发现 mstn在 3 月龄鳡鱼
肌肉、脑、心肌中表达量较高，在肝、肠、鳃、肾等组织中
未见表达。Liu 等［28］研究 mstn1 在大黄鱼不同生长阶
段的表达变化状况，通过对大黄鱼受精卵、桑葚胚、囊
胚、原肠胚、心跳期以及孵化后 10 d、20 d、30 d等时期
表达量的 qPCＲ检测，发现 mstn1 在鱼的不同生长阶段
表达量存在显著差异;同时通过对 2 龄成鱼的饥饿实
验发现饥饿也会导致大黄鱼 mstn1 的表达产生显著差
异。由此可见 mstn的表达量可能与鱼的种类、不同的
生长阶段以及环境有关。通过对比 mstn 在鱼类及哺
乳动物的表达状况，推断 mstn 在低等脊椎动物的作用
可能更加多样。本实验中检测到 mstn 在二龄蓝点马
鲛肝、鳃、肾中表达量较高，在肌肉、肠、胃、脾、性腺、心
中表达量较低，这也证实 mstn 在鱼类组织中的广泛表
达。刘蝉馨等［1］通过研究蓝点马鲛生长规律，发现蓝
点马鲛一龄至三龄阶段生长速度最快。本实验研究发
现二龄蓝点马鲛 mstn在肌肉组织中表达量较低，与蓝
点马鲛的生长规律相吻合，mstn 在肌肉的低表达有利
于其肌肉生长，处在生长期的 6 月龄牙鲆中也发现
mstn在肌肉中表达量较低［14］，成熟期的刀鲚 mstn在肌
肉中则表达量较高［25］，这些也说明 mstn的表达与生长
相关。通过氨基酸序列比对发现蓝点马鲛 MSTN与其
他鱼类 MSTN有很高的同源性，说明 MSTN 在一级结
构上比较保守，因此 MSTN 的结构特征可能不是影响
蓝点马鲛快速生长的原因，mstn 在鱼类不同生长时期
的表达可能对鱼类生长的作用更为关键，因此进一步
了解鱼类 mstn的作用机理是十分必要的。
参考文献:
［1］刘蝉馨，张 旭，杨开文． 黄海和渤海蓝点马鲛生长的研究［J］． 海洋与
湖沼，1982，13(2) :170 － 178．
［2］邱盛尧，叶懋中． 黄渤海蓝点马鲛当年幼鱼的生长特性［J］． 水产学报，
1993，17(1) :14 － 23．
［3］水柏年，孙希福，韩志强，等． 黄海、东海蓝点马鲛群体的形态特征分析
［J］． 水产学报，2009，33(3) :445 － 451．
［4］沙学绅，何桂芬，张孝威． 蓝点马鲛卵子和仔、稚鱼形态特征的观察［J］．
海洋与湖沼，1996，8(1) :1 － 8．
［5］韦 晟，周彬彬． 渤、黄海蓝点马鲛种群鉴别的研究［J］． 动物学报，
1988，34(1) :71 － 81．
［6］王英俊，叶振江，杨永桓，等． 耳石形态在黄海蓝点马鲛群体鉴别方面的
应用［J］． 中国海洋大学学报，2007，37(Sup．) :155 － 158．
［7］Shui B N，Han Z Q，Gao T X，et al． Mitochondrial DNA variation in the East
China Sea and Yellow Sea populations of Japanese Spanish mackerel Scombero-
morus niphonius［J］． Fish Sci，2009，75:593 － 600．
［8］Lin J，Arnold H B，Della-Fera M A，et al． Myostatin knockout in mice increa-
ses myogenesis and decreases adipogenesis［J］． Biochem Biophys Ｒes Com-
mun，2002，291(3) :701 － 706．
［9］Acosta J，Carpio Y，Borroto I，et al． Myostatin gene silenced by ＲNAi show a
zebrafish giant phenotype［J］． J Biotechnol，2005，119(4) :324 － 331．
［10］Wang Y，Wang X，Meng X，et al． Identi fication of two SNPs in myostatin
(MSTN)gene of Takifugu rubripes and their association with growth traits
［J］． Mol Cell Probes，2014，28:200 － 203．
［11］孙科军，刘希良，王开卓，等． 斑鳜 myostatin 基因及其启动子的克隆与
序列分析［J］． 基因组学与应用生物学，2012，31(2) :133 － 140．
［12］张 敏，赵金良，邓燕飞． 鳜肌肉生长抑制素 Myostatin cDNA 克隆与组
织表达分析［J］． 动物学杂志，2010，45(3) :1 － 10．
［13］薛良义，李 婷，杨巧一，等． 眼斑拟石首鱼肌肉生长抑制素基因克隆
及组织表达分析［J］． 海洋学报，2008，30(3) :95 － 101．
［14］徐建勇，陈松林． 牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆［J］． 水产学
报，2008，32(4) :497 － 506．
［15］Nadjar － Boger E，Maccatrozzo L，Ｒadaelli G，et al． Genomic cloning and
promoter functional analysis of myostatin-2 in shi drum，Umbrina cirrosa:con-
servation of muscle-specific promoter activity［J］． Comp Biochem Physiol B
Biochem Mol Biol，2013，164:99 － 110．
［16］赵浩斌，彭 扣，王玉凤，等． 鱼类肌肉生长抑制素研究进展［J］． 水生
生物学报，2006，30(2) :227 － 231．
［17］Terova G，Ｒimoldi S，Bernardini G，et al． Inhibition of myostatin gene ex-
pression in skeletal muscle of fish by in vivo electrically mediated dsＲNA and
shＲNAi delivery［J］． Mol Biotechnol，2013，54:673 － 684．
［18］Lee S B，Cho M J，Kim J H，et al． Production of bioactive rockfish (Sebastes
schlegeli)myostatin － 1 prodomain in an Escherichia coli system［J］． Protein
J，2011，30:52 － 58．
［19］Kanjanaworakul P，Srisapoome P，Sawatdichaikul O，et al． cDNA structure
and the effect of fasting on myostatin expression in walking catfish (Clarias
macrocephalus，Gunther 1864) ［J］． Fish Physiol Biochem，2015，41:177 －
191．
［20］Pe aloza C，Hamilton A，Guy D Ｒ，et al． A SNP in the 5flanking region of
the myostatin-1b gene is associated with harvest traits in Atlantic salmon(Sal-
mo salar) ［J］． BMC Genet，2013，14:112．
［21］Nadjar － Boger E，Funkenstein B． Myostatin-2 gene structure and polymor-
phism of the promoter and first intron in the marine fish Sparus aurata:evi-
dence for DNA duplications and /or translocations［J］． BMC Genetics，2011，
12:22．
［22］汤泽源，薛良义，胡铭炎． 利用不同基因转移方法构建转基因红鲤［J］．
农业生物技术学报，2013，21(1) :19 － 28．
［23］应 俊，薛良义． 大黄鱼肌肉生长抑制素 － 1 前肽原核表达、多克隆抗体
制备和功能验证［J］． 中国细胞生物学学报，2014，36(10) :1344 －
1349．
［24］Sambrook J，Fritsch E F，Maniatis T． Molecular cloning:a laboratory manual
［M］． New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989．
［25］杜富宽，聂志娟，徐钢春，等． 刀鲚 MSTN 基因的克隆及其组织表达
［J］． 中国水产科学，2014，21(4) :684 － 692．
［26］Gu Z，Zhang Y，Shi P，et al． Comparison of avian myostatin genes［J］．
Anim Genet，2004，35:470 － 472．
［27］濮剑威，孙成飞，蒋霞云，等． 草鱼两个肌肉生长抑制素 cDNA 克隆、表
达及过量表达对胚胎发育的影响［J］． 生物技术通报，2011(8) :153 －
160．
［28］Liu Z F，Xue L Y，Sun S，et al． Myostatin-2 isolation and spatiotemporal ex-
pression comparison between myostatin-1 and-2 in Larimichthys crocea［J］．
Genes Genom，2014，36:599 － 609．
［29］Xue L，Qian K，Qian H，et al． Molecular cloning and characterization of the
myostatin gene in croceine croaker，Pseudosciaena crocea［J］． Mol Biol Ｒep，
2006，33(2) :129 － 135．
［30］Maccatrozzo L，Bargelloni L，Ｒadaelli G． Characterization of the myostatin
gene in the gilthead seabream (Sparus aurata) :sequence，genomic struc-
ture，and expression pattern［J］． Mar Biotechnol，2001，3(3) :224 － 230．
［31］Mcpherron A C，Lawler A M，Lee S J． Ｒegulation of skeletal muscle mass by
a new TGF-8 superfamily member［J］． Nature，1997，387(6628) :83 － 90．
［32］Sharma M，Kambadur Ｒ，Matthews K G，et al． Myostatin，a transforming
growth factor-beta superfamily member，is expressed in heart muscle and is
upregulated in cardiomyocytes after infarct［J］． J Cell Physiol，1999，180
(1) :1 － 9．
［33］郁建锋，张 营，王星果，等． 鳡肌肉生长抑制素(MSTN)基因的克隆及
其组织特异性表达分析［J］． 水产学报，2010，34(10) :1486 － 1494．
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第 32 卷第 6 期
2015 年 12 月
生 物 学 杂 志
JOUＲNAL OF BIOLOGY
Vol. 32 No. 6
Dec，2015