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HPLC法测定不同采收期刺五加叶中丁香苷的含量



全 文 :人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期
HPLC法测定不同采收期刺五加叶中丁香苷的含量
陆 珞 阎 墨 赵晓红
(吉林省食品药品审评中心·吉林 长春·130062)
丛登立 鞠会艳
(吉林大学药学院 植物科学学院·吉林 长春·130041)
摘 要: 目的 为了制定刺五加的质量标准提供参考数据。 方法 利用 Alltech 高效液相色谱仪对不同采
收期刺五加的丁香含量进行测定。色谱柱为 ODS-C18(4.6mm×250mm,5um);测定丁香苷的流动
相为乙腈:水(20:80);体积流量:1ml/min;柱温:室温;检测波长:265nm。 结果 丁香苷在 0.1-
2.0μg 与峰面积具有良好的线性关系。 结论 本方法简便可靠、快速、重现性好,适用于刺五加中
丁香苷的含量测定,为进一步研究刺五加成分及其药理作用提供了参考数据。
关键词:HPLC;刺五加;叶;丁香苷
刺五加见于《神农本草经》,列为上品。 中药刺五
加 Acanthopanax senticosus 为五加科(Araliaceae)五加
属(Acanthopanax)植物刺五加的干燥根及根茎。 商品
名为五加参,原主产于黑龙江省山区,地方土名习称
“老虎潦”,在日本则称为虾夷五加,而在前苏联又称
为西伯利亚人参。味辛、微苦、性温、无毒含多种苷类,
包括酚性苷和树脂苷等,与人参根中的皂苷具有相似
的生理活性。有良好的益气健脾、补肾安神的功效。主
治腰膝酸软、体虚乏力、失眠、多梦、食欲不振。分布在
我国黑龙江、吉林、辽宁、河北等省。 20 世纪 70 年代
以来对刺五加的研究不断深入[2~4]。
1 材料、仪器及试剂
1.1 实验材料
临江产不同采收期的刺五加叶经吉林农业大学
园艺学院胡全德教授鉴定为五加科 (Araliaceae)五加
属(Acanthopanax)植物刺五加叶,样品来源见表 1。
表 1 刺五加的样品来源
Table.1 The source of Acanthopanax samples
1.2 仪器设备
ALLTECH 高效液相色谱仪; 色谱柱:ODS-C18
(4.6mm×250mm,5um);KQ-250DB 型数控超声波清
洗器 (昆山市超声仪器有限公司); 电子计数天平
(500g/0.001g 金羊天平仪器厂); 百灵 LA114 型电子
天平(110g/0.0001g 常熟市百灵天平仪器有限公司);
101-2 型数显电热鼓风干燥箱(上海锦屏仪器仪表有
限公司)。
1.3 试剂
乙腈(色谱纯,美国进口);甲醇(色谱纯,山东禹
王实业有限公司禹城化工厂);水(杭州产娃哈哈纯净
水 1.25L 装)经微孔滤膜滤过;甲醇(分析纯 A.R 北京
化工厂);丁香苷购于西格马公司。
基金项目:国家科技部攻关项目(2005BA741C)。
刺五加入药部位 采收日期 采收地点 样品来源
叶 5.25 猫耳山 野生
叶 5.25 苇沙河 仿生
叶 7.25 苇沙河 仿生
叶 9.11 苇沙河 仿生
叶 9.13 猫耳山 野生
叶 9.21 老岑界碑 野生
叶 7.23 闹枝 野生
叶 7.25 苇沙河 野生
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期陆 珞等:HPLC 法测定不同采收期刺五加叶中丁香苷的含量
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱: ODS-C18 (4.6mm×250mm,5um);流动
相:乙腈:水(20:80);体积流量:1ml/min;柱温:室温;
检测波长:265nm; 灵敏度:0.5AUFS; 按丁香苷峰计
算,理论塔板数在 1500以上。
2.2 试样制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取丁香苷对照品 1.00 mg, 置 10 ml 容量
瓶中,加甲醇使溶解,并稀释至刻度,制成 0.10 mg/mL
丁香苷对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
精密称取刺五加粉末约 2.0g, 精密加入甲醇
30ml, 称重, 记录重量, 浸 12 小时后, 超声处理
(250kw,36kHz)30 分,静置至室温,补足重量,过滤后
取续滤液备用。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系的考察
取丁香苷对照品溶液(0.10mg/mL)。 分别进样
1μl、5μl 、10μl、15μl 、20μl。 按上述色谱条件测定
峰面积。 以丁香苷进样量 Y 为纵坐标, 峰面积 X
为横坐标绘制标准曲线 , 计算得回归方程为 Y=
5.09535E-007X-0.312986,R2=0.9997。 结果表明
丁香苷在 0.1~2.0μg 与峰面积具有良好的线性关
系。
2.3.2 精密度试验
精密吸取丁香苷对照品溶液(0.10mg/mL)10μl,
重复进样 5 次, 测定丁香苷峰面积, 得其 RSD 为
1.18%。
2.3.3 稳定性试验
取刺五加药材供试品溶液进样 10μl,每隔 2h 测
定 1次,结果表明样品在 8h 内稳定,样品中丁香苷峰
面积的 RSD为 1.56%(n=5)。
2.3.4 重现性试验
取同一产地刺五加样品,平行 5 次取样,制备供
试品溶液, 进样测定, 结果丁香苷峰面积的 RSD 为
1.90%(n=5)。
2.3.5 回收率实验
采取加样回收法。 取已知质量分数(含丁香苷为
0.00069 mg/g)刺五加样品约 1.0g,精密加入丁香苷对
照品溶液(0.10 mg/mL)1.0ml,制备供试品溶液,按上
述色谱条件测定, 计算回收率, 结果平均回收率为
98.54%,RSD为 2.12%(n=5)。
2.4 含量测定与结果
在上述色谱条件下,分别进样测定刺五加药材中
丁香苷的含量,进样量 10μL,结果见表 2、色谱图见
图 1、2、3-1-9。
表 2 刺五加叶中丁香苷的含量
Table 1. the content of Syringin in leaves of Acan-
thopanax senticosus
采收时期 采收地点 样品来源 丁香苷含量(%)
5.25 猫耳山 野生 0.098
5.25 苇沙河 仿生 0.206
7.23 闹枝 野生 0.026
7.25 苇沙河 野生 0.026
7.25 苇沙河 仿生 0.089
9.11 苇沙河 仿生 0.113
9.13 猫耳山 野生 0.032
9.21 老岑界碑 野生 0.066
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期
3讨论
3.1同一采收期的野生叶和仿生叶的差异很大, 仿生
叶中的丁香苷的含量较野生叶中的含量高,可能是由
于仿生种植的地点自然条件较野生刺五加的生长条
件优越。 因此,可认为苇沙河的生长条件比较适合刺
五加的生长。
3.2刺五加叶中的丁香苷的含量随时间的延续波动很
大,其含量在 4、5 月份中最高,而其他的时间含量则
很低。 因此,可作为刺五加采收时期选择的参考。
3.3 检测波长的选择:丁香苷在 200~350nm 之间均有
吸收,但在 265nm 处吸收最大,故选择 265nm 作为检
测波长。
3.4流动相的确定: 经对比甲醇-水-冰醋酸=(10:55:
1);甲醇-水=(28:72)或(20:80);乙腈-水=(1:4)三种
流动相,结果乙腈-水=(1:4)作为流动相时,丁香苷与
杂质完全分离,峰形无拖尾现象,故选此作为流动相。
此法可作为刺五加中丁香苷的快速检测手段之一。
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2011 年第 3 期
参 考 文 献
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