全 文 ：doi:10． 3969 / j． issn． 1002 －7386． 2015． 14． 044 ·药物研究·
正交法试验优选豨莶草的提取工艺
张磊 刘佳 于静
项目来源:河北省中医药管理局科研计划项目(编号:2013009)
作者单位:050031 石家庄市，河北医科大学第一医院药剂科(张
磊、于静)，营养科(刘佳)
【摘要】 目的 筛选豨莶草的最佳提取工艺。方法 本实验采用 HPLC 法测定，采用正交试验设计，以奇壬醇
的提取率为考察指标，考察提取溶媒及溶媒用量、提取时间、提取次数等 4 个因素对提取结果的影响，筛选豨莶草的最
佳提取工艺条件。结果 4 个因素对奇壬醇提取率的影响程度依次为提取次数 ＞提取时间 ＞溶媒用量 ＞提取溶媒，
豨莶草最佳提取条件为加 12 倍量的 80%乙醇，回流提取 3 次，每次提取 40 min。结论 本工艺重现性好，测定方法可
行，为大批量豨莶草提取奇壬醇提供了理论依据。
【关键词】 豨莶草;奇壬醇;提取工艺;正交试验;高效液相色谱法
【中图分类号】 Ｒ 282． 7 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002 － 7386(2015)14 － 2204 － 02
豨莶草为菊科植物豨莶 Siegebeckia orientalis L、
腺梗豨莶 Spubescens Makino 或毛梗豨莶 Sglabrescens
Makino 3 种植物的干燥地上部分，具有祛风湿、利关
节、解毒的功效，常用于风湿痹痛、筋骨无力、腰膝酸
软、四肢麻痹、半身不遂、风疹湿疮等症［1］。化学成分
主要含萜和苷类等［2］，其中奇壬醇、豨莶精醇、豨莶苷
在免疫调节、抗炎抗风湿、心血管系统、抗病原微生物、
抗氧化及抗早孕方面有明显活性［3］。目前，奇壬醇作
为其定量检测标准［4］。故本实验拟以奇壬醇为指标，
采用 HPLC法测定，利用正交试验设计，分别以 70%、
80%和 90%乙醇为溶媒加热回流提取，考察影响奇壬
醇提取率的因素，筛选豨莶草的最佳提取工艺条件。
1 材料与方法
1． 1 仪器与试药 美国 Agilent -1100 高效液相色谱
仪系统(在线脱气机，四元泵，自动进样器，PDA 检测
器);Agilent Chem Office色谱工作站。甲醇、乙腈为色
谱纯(国药集团化学试剂有限公司)，水为灭菌注射用
水(石家庄四药有限公司，批号 130925404)，其他试剂
均为分析纯。奇壬醇对照品(批号 111726-200601)由
中国生物制品检定所提供。豨莶草购于国药乐仁堂石
家庄药材公司，经河北省药品检验院段吉平主任药师
鉴定为豨莶草的全草。
1． 2 方法
1． 2． 1 供式品溶液的制备:精密称取豨莶草 20． 0 g
置于 500 ml圆底烧瓶中，加适量乙醇溶液提取，摇匀，
称定质量，加热回流提取 40 min，取出，冷却，用适量乙
醇溶液补足质量，摇匀，微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，
即得。
1． 2． 2 对照品溶液的制备:取奇壬醇对照品适量，精
密称定，加甲醇溶解并稀释制成质量浓度分为为
0． 24 mg /ml的溶液，即得。
1． 2． 3 色谱条件:色谱柱为 Kromasil WQ C8 柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm);甲醇-乙腈 － 0． 05 mol /L
KH2PO4 溶液为流动相梯度洗脱，洗脱程序见表 1;检
测波长 215 nm;体积流量 1 ml /min;柱温 30℃;进样量
10 μl。
表 1 梯度洗脱程序表
时间 /min 流量 /(ml /min) 甲醇-乙腈-0． 05mol /L KH2PO4
0 ～ 15 1 6:28∶ 66
15 ～ 20 1 6:43． 5∶ 50． 5
20 ～ 30 1 6:50∶ 44
30 ～ 50 1 6:60∶ 34
50 ～ 60 1 6:28∶ 66
1． 2． 4 线性关系:取奇壬醇对照品储备液，稀释使配
制成奇壬醇为 15 ～ 240 μg /ml的对照品溶液。吸取上
述溶液 10 μl，注入 HPLC 色谱仪，记录峰面积。以质
量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准
曲线，经回归处理得回归方程为，奇壬醇:Y = 6． 57X +
9． 50(Ｒ2 = 0． 9999)。结果表明奇壬醇在 0． 15 ～
2． 4 μg呈良好的线性关系。
2 结果
2． 1 正交试验设计因素与水平 以奇壬醇的提取量
为指标，选用 L9(34)正交试验表，对提取次数、提取时
间、提取溶媒和溶媒用量进行考察。取豨莶草 20 g，按
L9(34)正交试验表设计分别进行提取，所得的提取液
经合并、滤过，浓缩至一定体积，作为 1 ～ 9 号样品。取
1 ～ 9 号样品，制备供试品溶液，用 0． 45 μm 微孔滤膜
滤过，取续滤液，按上述色谱条件测定色谱峰的峰面
积，计算样品中奇壬醇的提取率(奇壬醇提取率 =样
品中奇壬醇总量 /投入药材中豨莶草总量 × 100%)。
见表 4。
4022 河北医药 2015 年 7 月 第 37 卷 第 14 期 Hebei Medical Journal，2015，Vol 37 Jul No. 14
表 2 因素水平
水平
因素
A提取溶媒 B溶媒用量(倍) C提取时间(min)D提取次数(次)
1 70%乙醇 8 20 1
2 80%乙醇 10 40 2
3 90%乙醇 12 60 3
表 3 L9(34)试验安排和结果
试验号 A B C D 奇壬醇提取率(%)
1 1 1 1 1 3． 96
2 1 2 2 2 5． 51
3 1 3 3 3 6． 89
4 2 1 2 3 6． 35
5 2 2 3 1 3． 97
6 2 3 1 2 6． 21
7 3 1 3 2 4． 68
8 3 2 1 3 6． 29
9 3 3 2 1 5． 55
K1 5． 45 5． 00 5． 49 4． 49
K2 5． 51 5． 26 5． 80 5． 47
K3 5． 51 6． 22 5． 18 6． 51
Ｒ 0． 06 1． 22 0． 62 2． 02
表 4 方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 F值 P值
A 0． 01 2 1． 00 0． 500
B 2． 48 2 408． 40 0． 002
C 0． 58 2 96． 08 0． 010
D 6． 10 2 1005． 97 0． 001
误差 0． 01 2
F0． 05(2，2)= 19． 00
2． 2 提取工艺优选 可知在上述 4 个因素中，对奇壬
醇提取率的影响程度依次为:D ＞ B ＞ C ＞ A。据测定
结果并考虑省时节能、降低成本的角度，优选出最佳提
取工艺为 A2B3C2D3，即 80%乙醇回流提取 3 次，每次
40 min，12 倍溶媒。
2． 3 验证试验
2． 3． 1 精密度试验:取豨莶草药材适量，精密称定，制
备供试品溶液，吸取 10 μl，注入高效液相色谱仪，重复
进样 6 次，按确定的色谱条件记录峰面积，奇壬醇质量
分数的 ＲSD 0． 6%。
2． 3． 2 稳定性试验:取豨莶草药材适量，精密称定，制
备供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、12、24 h，吸取
10 μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，奇壬醇质量
分数的 ＲSD 为 1． 0%，说明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2． 3． 3 重现性试验:取豨莶草药材适量，精密称定 6
份，制备供试品溶液，分别吸取 10 μl，注入高效液相色
谱仪，记录峰面积，奇壬醇质量分数的 ＲSD为 1． 7%。
2． 3． 4 回收率试验:取豨莶草药材约 10． 0 g，共 6 份，
精密称定，精密量取奇壬醇对照品溶液 1 ml(约相当
于豨莶草药材含奇壬醇的 50%)，依次加入上述 6 份
药材中，制备供试品溶液，分别吸取 10 μl，注入高效液
相色谱仪，记录峰面积，奇壬醇的平均回收率为
99． 18%，ＲSD为 0． 9%。
3 讨论
2005 年版《中国药典》收载豨莶草的质量控制指
标成分为奇壬醇，因为奇壬醇为 3 种药用豨莶草原植
物的共有成分，专属性强且为主要的活性成分。有文
献证实用 HPLC法测定豨莶草中奇壬醇的含量简便易
行、准确、重复性好［5，6］。但未有文献考察不同提取工
艺对奇壬醇提取率的影响。故本实验以奇壬醇为指
标，采用 HPLC法测定，利用正交试验设计，考察影响
奇壬醇提取率的因素，筛选豨莶草的最佳提取工艺
条件。
历代本草对豨莶草的毒性考证为“有小毒”，但有
文献研究豨莶草水煎醇沉剂毒性较小，其半数致死量
LD50 测定相当于生药 414． 3 g /kg，与水煎剂的 LD50
则相当于生药 146． 7 g /kg 相比，表明水煎醇沉剂的
LD50 剂量大于水煎剂，即水煎醇沉剂较水煎剂毒性减
小［7］。该小组学者继续研究发现毒性成分主要存在
于极性大的溶剂中，而其有效成分存在于极性小的溶
剂中［8］。故本实验直接采用乙醇为溶媒对豨莶草进
行提取，并从溶媒浓度、溶媒用量 /倍、提取时间、提取
次数四个方面考察。
本实验通过正交试验表设计分别进行提取，并进
行方差分析得出结论 4 个因素对奇壬醇提取率的影响
程度依次为提取次数 ＞提取时间 ＞溶媒用量 ＞提取溶
媒，综合结果表明豨莶草采用 80%乙醇回流提取 3
次，每次 40 min，12 倍量溶媒为最佳工艺。经方法学
考察试验表明，本方法的线性好，精密度高，重现性及
回收率均较好，测得结果准确。
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(收稿日期:2015 － 02 － 09)
5022河北医药 2015 年 7 月 第 37 卷 第 14 期 Hebei Medical Journal，2015，Vol 37 Jul No. 14