全 文 ：豨莶草（Herba Siegesbeckiae）为菊科一年生
草本植物，主要分布于热带和温带地区[1]，全世界共
有五种，我国目前有 3 种.豨莶是临床常用的中药，
具有祛风湿，利筋骨，降血压等功效.临床常用于四
肢麻痹，筋骨疼痛，腰膝无力，疟疾，急性肝炎，高血
压病，疔疮肿毒，外伤出血等疾病的治疗.
作为降糖中药， 延边大学的李志勇的研究表
明，豨莶草的水提物、醇提物均对链脲佐菌素引起
的动物高血糖有治疗作用，能显著降低模型大鼠胰
岛素抵抗作用.PTP-1B 是 1988 年被分离的一种蛋
白酪氨酸磷酸酶，由于其在胰岛素信号传导中的负
调节作用可导致个体胰岛素抵抗，从而发生糖脂代
谢紊乱，进一步形成 2型糖尿病.本文以 PTP-1B 抑
制作用为模型对豨莶草降低胰岛素抵抗作用成分
进行体外筛选.
1 仪器与材料
原料：豨莶草（购于郑州中药城）经河南省中医
学院药学院冯卫生教授鉴定为中药豨莶 ,PTP-1B
(自制），薄层硅胶（GF254-R）和柱层析硅胶，青岛
海洋化工有限公司；对硝基苯磷酸二钠（pNPP），美
国 Amresco公司；其余试剂均为国产分析纯.
仪器：HP.1-26电热恒温水浴锅(北京卓川电子
科技有限公司),723可见分光光度计(上海第三分析
仪器厂),TGL-18C高速台式离心机 (上海安亨科学
仪 器 厂 )BRUKER 红 外 光 谱 仪 ；Bruker Avance
AMX-400 核磁公振光谱仪 (美国 Bruker 公司 ),
Multiscan MK3 酶标仪(芬兰).
2 试验方法
2.1 提取、分离与化合物结构鉴定
称取粉碎的豨莶草粉 5kg，用 95%乙醇回流提
取 3 次，减压抽滤回收乙醇后得浸膏 .浸膏用水分
散后先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，蒸去溶
剂分别得石油醚，乙酸乙酯，正丁醇组分，计算收
率，不同组分各取 20mg 用 100μL 乙醇溶解，酶动
力学测体外抑制作用.
乙酸乙酯组分进行硅胶柱层析， 取 1KG 柱层
析硅胶，石油醚湿法装柱，用石油醚：乙酸乙酯=4:1
溶解样品上样，分别用石油醚：乙酸乙酯=4:1、3:1、
2:1、1:1、1:2、1:3，乙酸乙酯：甲醇=20:1、10:1、5:1 洗
脱，每管 200mL，共接 100 管，其中 Fr18~22 得 R1＃
组分；Fr36~40 得 R2＃ 组分；Fr45~49 得 R3＃ 组分
Fr56~61得 R4＃组分 Fr68~74得 R5＃组分.
取 200g 柱层析硅胶，甲苯湿法装柱，用甲苯：
甲酸乙酯=6：1 溶解样品上样，分别用甲苯：甲酸乙
酯：甲酸=6：1：0.1、5:1:0.1、4:1:0.1、3:1:0.1、2:1:0.1、1:
1:0.1、1:2:0.1 洗脱，每管 50mL，共接 70 管合并 20~
25 流份得到淡黄色粉末状物，经吡啶重结晶，得淡
黄色粉末结晶，即化合物 R6＃.合并 37~40 流份析
出透明结晶，用氯仿重结晶即得到化合物 R7＃.
2.2 酶动力学实验
底物浓度 26.66mmol/L 时，取一定量的豨莶草
各组分提取液，在 405nm 处测定其吸光度.试验设
豨莶草中抗糖尿病成分的研究
马 嵩，王留成
（郑州大学 化工与能源学院，河南 郑州 450001）
摘 要：以 PTP- 1B抑制作用为模型对豨莶草各分离部位和有效成分进行体外筛选，确定了豨莶草降
低胰岛素抵抗活性成分.通过反复柱层析得到一个活性成分经紫外、红外、1H- NMR 等波谱分析确定化学
结构为槲皮素，确认它即为豨莶草降低胰岛素抵抗作用的化学物质基础.
关键词：豨莶草；蛋白酪氨酸磷酸酶；抑制剂；槲皮素
中图分类号：R285.5文献标识码：A 文章编号：1673- 260X（2012）06- 0045- 02
Vol. 28 No. 6
Jun. 2012
赤 峰 学 院 学 报（自 然 科 学 版）
Journal of Chifeng University（Natural Science Edition）
第 28卷 第 6期（下）
2012年 6月
组分 抑制剂(μL) 酶量(μL) 底物(μL) 缓冲液(μL)
标准 0 15 20 125
样品 20 15 20 105
表 1 样品抑制活性的反应体系
45- -
DOI:10.13398/j.cnki.issn1673-260x.2012.12.066
计见表 1（以不加酶的反应体系作为对照）.
3 结果与分析
3.1 提取
豨莶草提取及各组分收率见表 2.
由表 2 可知，豨莶草浸膏收率为 8.42%，正丁
醇组分收率最高，乙酸乙酯次之，石油醚组分最少.
3.2 豨莶草石油醚、乙酸乙酯、正丁醇组分 PTP-
1B体外抑制活性比较
石油醚、乙酸乙酯、正丁醇组分对 PTP-1B 体
外作用的时间－吸光度曲线结果见图 1.
由图 1可知，乙酸乙酯组分的抑制效果最强.
3.3 乙酸乙酯相不同组分 PTP-1B 体外抑制活性
比较
乙酸乙酯相经反复柱层析， 得到 7 个组分，不
同组分对 PTP-1B 体外作用的时间－吸光度曲线结
果见图 2.
由图 2 可知 ，R2＃、R2＃、R3＃、R4＃ 和 R5＃ 对
PTP1B 的抑制效果不明显， 而 R1＃ 对 PTP1B 有明
显的抑制效果， 对 R1＃ 继续纯化得到 R6＃ 和 R7＃.
而 R6＃抑制效果很好，第 20min的吸光度计算 R6＃
组分对 PTP1B的抑制率为 72.0％.
3.4 化合物 R6＃的化学结构鉴定
淡黄色粉末状固体，盐酸-镁粉反应呈阳性，三
氯化铝反应呈黄绿色荧光，α－萘酚试验呈阴性，说
明该化合物为不带糖苷的黄酮类化合物.红外光谱
分析化合物 R6＃ 主要官能团红外吸收归属-OH
3346 cm- 1; C= O 1670 cm- 1; C= C (-Ar)
1614、1511、1428 cm- 1; - CH3 1363 cm- 1; =
C- O-C 1311 cm- 1; C= O 1211 cm- 1 以及
1H-NMR (3O0MHz，DMSO-d6) δ:12.47 为 5-OH，
7.52(IH，d，J=8.5Hz)，6.86(1H，d，J=8.5Hz)，7.65(1H，
s)为 B 环 ABX 系统，分别为 B 环 H-5’，H-6’，H-
2’.δ:6.16(1H，s)为 H-6，δ:6.38(1H，s)为 H-8，δ:10.68
(1H，s，7-OH)，δ:9.36(3H，s，3-OH，3’，4’-OH)与文
献[3]一致确定化合物 R3＃为槲皮素.
4 结论
传统中药记载， 豨莶对消渴症具有一定的疗
效，已有的研究证明，豨莶提取物能显著降低模型
大鼠胰岛素抵抗作用. 本文以生物活性为导向，从
豨莶中分离得到了优良的 PTP1B 抑制剂槲皮素，
该化合物可能是豨莶抗糖尿病的化学物质基础.
——————————
参考文献：
〔1〕阴健，郭力弓．中药现代研究与临床应用[M]．北
京：学苑出版社，1997.
〔2〕北京医学院，北京中医学院 .中草药成分化学
[M]．北京：人民卫生出版社，1980.
〔3〕Ternal B.Tetrahedron,1976,32(5):565.
豨莶草石
油醚组分
豨莶草乙酸
乙酯组分
豨莶草正
丁醇组分
浸膏
质量（g） 57.0 63.5 79.5 421.0
得率(％) 1.14 1.27 1.59 8.42
表 2 豨莶草提取各组分收率
图 1 豨莶草各组分的时间－吸光度曲线
图 2 纯化组分的时间－吸光度曲线
46- -