全 文 ： 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2016, 51 (4): 631-636 · 631 ·



豨莶草中两种活性二萜成分在大鼠体内的药动学研究
殷 玥 1*, 孙 莹 1, 姜 珍 2
(1. 长春医学高等专科学校药学系, 吉林 长春 130031; 2. 沈阳药科大学药学院, 辽宁 沈阳 110016)
摘要: 建立了快速灵敏的液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 同时测定大鼠血浆中两种活性二萜奇任醇和
对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸 (DHKA) 的含量。实验以蛇床子素为内标, 血浆样品处理方法为乙酸乙
酯作为萃取试剂的液液萃取。采用 Waters Symmetry C18 柱 (2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm), 以甲醇-5 mmol·L-1 醋酸
铵水溶液 (80∶20) 为流动相进行洗脱, 流速为 0.2 mL·min-1。质谱条件采用电喷雾离子源 (ESI), 正负离子同时
检测, 扫描方式为多反应监测扫描模式 (MRM)。用于定量分析的离子反应分别为 m/z 356.4→321.4 (奇任醇)、
m/z 335.3→335.3 (DHKA) 和 m/z 245.1→188.9 (蛇床子素, 内标)。奇任醇和 DHKA 分别在 50.0～25 000 ng·mL-1
和 25.0～12 500 ng·mL-1 内线性关系良好。两种待测物及内标的提取回收率均大于 85%。方法的日内日间精密度
RSD 均小于 13.9%, 准确度在 -10.7%～10.3% 之间。采用 SPSS 软件 (13.0 版, 社会科学统计软件包) 对两种给药
形式的药动学参数进行比较。结果表明, 奇任醇在大鼠体内的药动学行为具有吸收快、消除快的特点, 体内生物
利用度低; DHKA 在大鼠体内吸收较快, 但消除过程相对较慢, 体内生物利用度高。与灌胃给予单体相比, 灌胃
给予豨莶草药材提取物后, 大鼠对奇任醇的吸收明显降低, 但消除速率有所减慢; 大鼠对 DHKA 的吸收有所降
低, 但吸收速率显著增加。该方法操作简便、快捷, 灵敏度高, 适于豨莶草中两种活性二萜成分在大鼠体内的药
代动力学研究。
关键词: 豨莶草; 药物动力学; 液相色谱-串联质谱法; 奇任醇; 对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸
中图分类号: R917 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2016) 04-0631-06
Pharmacokinetics study of two active diterpenoids from
Herba Siegesbeckiae in rat plasma
YIN Yue1*, SUN Ying1, JIANG Zhen2
(1. College of Pharmacy, Changchun Junior College of Medicine, Changchun 130031, China;
2. College of Pharmacy, Shenyang Pharmacy University, Shenyang 110016, China)

Abstract: The study established a LC-MS/MS method for the simultaneous determination of two active di-
terpenoids: kirenol and ent-16β,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid (DHKA) from Herba Siegesbeckiae in rat
plasma using osthole as an internal standard (IS). Plasma sample pretreatment involved a one-step liquid-liquid
extraction with ethyl acetate. Chromatographic separation was performed on a Waters Symmetry C18 column
(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) with isocratic elution using methanol - 5 mmol·L-1 aqueous ammonium acetate
(80∶20) as mobile phase at a flow rate of 0.2 mL·min-1. The detection was performed on a triple quadrupole
tandem mass spectrometer in multiple reaction monitoring (MRM) mode under positive and negative electrospray
ionization. Quantification was performed using SRM of the transitions m/z 356.4→321.4 for kirenol, m/z
335.3→335.3 for DHKA, and m/z 245.1→188.9 for the IS, respectively. The calibration curves were linear

收稿日期: 2015-08-25; 修回日期: 2015-10-25.
*通讯作者 Tel: 15164347582, E-mail: yinyue001@163.com
DOI: 10.16438/j.0513-4870.2015-0735
· 632 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2016, 51 (4): 631-636

over the range of 50.0-25 000 ng·mL-1 for kirenol, 25.0-12 500 ng·mL-1 for DHKA. The extraction recoveries of
two analytes and IS were more than 85%. The intra- and inter-day precision (relative standard deviation) values
were less than 13.9% and accuracy (relative error) was from -10.7% to 10.3% at four quality control levels.
The pharmacokinetic parameters of different medication administration teams were analyzed with SPSS statistics
13.0 software. The validated method was successfully applied to a comparative pharmacokinetic study of the
two diterpenoids in rat plasma after intragastric administration of kirenol, DHKA and Herba Siegesbeckiae ex-
tract. Kirenol appeared to be both absorbed and eliminated fast in vivo, and DHKA absorbed fast but
eliminated slowly in vivo. And there were obvious differences between the pharmacokinetic behaviors after
oral administration of Herba Siegesbeckiae extract compared with single substances. Compared with the value
after oral administration of kirenol, the extract might inhibit the absorption and postpone the elimination of
kirenol in rats after administration of the extract. For DHKA, the absorption rate of DHKA increased rapidly
after administration of the extract. This work can provide some experimental basis for the clinical use of Herba
Siegesbeckiae. The method is simple, rapid and sensitive, which is suitable for pharmacokinetics study of the
two diterpenoids from Herba Siegesbeckiae in rats.
Key words: Herba Siegesbeckiae; pharmacokinetics; LC-MS/MS method; kirenol; ent-16β,17-dihydroxy-
kauran-19-oic acid

豨莶草 (Herba Siegesbeckiae) 为菊科豨莶属植物
的全草, 《中国药典》 2010 年版收载豨莶 (Siegesbeckia
orientalis L.)、腺梗豨莶 (Siegesbeckia pubescens Makino)
或毛梗豨莶 (Siegesbeckia glabrescens Makino) 三种
植物的地上部位作为中药豨莶草[1]。豨莶草在临床
上主要用于治疗类风湿性关节炎, 疗效显著。奇任醇
(kirenol) 和对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸
(ent-16β,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid, DHKA) 是
从豨莶草中分离得到的两种重要的活性二萜类化合
物。药理学研究表明, 奇任醇具有显著的抗炎和免疫
抑制作用, 对胶原诱导性关节炎和自身免疫性关节炎
均有疗效[2, 3]。DHKA 则具有抗血小板和抗凝活性[4]。
另有文献[5]报道, DHKA 能够通过激活角化干细胞再
生表皮组织, 是一种潜在的伤口愈合剂。本文建立了
快速、灵敏、专属的 LC-MS/MS 法同时测定大鼠血
浆中奇任醇和 DHKA 的含量, 并且比较了分别灌胃
给予大鼠豨莶草提取物和两种二萜单体后, 两组分
的药代动力学行为的差异, 为豨莶草提取物和单体
的合理用药提供了重要参考。

材料与方法
仪器 ACQUITY Ultra Performance LCTM 超高
效液相色谱仪 (美国Waters公司), Micromass® Quattro
microTM API 三重四极杆串联质谱仪 (美国 Waters 公
司), Masslynx 4.1 数据采集软件 (美国 Waters 公司),
BS110S 型电子天平 (德国 Sartorius 公司), XW-80A 旋
涡混合器 (上海精科实业有限公司), TGL-16C 型离心
机 (上海安亭科学仪器厂), LC-400 型离心机 (科大
创新股份有限公司), L-119 型试管恒温加热仪 (北京
来亨科贸有限责任公司), L-128B 型试管氮吹浓缩仪
(北京来亨科贸有限责任公司)。
药品和试剂 奇任醇 (自制 , 纯度 > 98%),
DHKA (自制, 纯度> 98%), 蛇床子素 (批号: 110822-
200407; 中国食品药品检定研究院), 乙酸乙酯 (山
东禹王实业有限公司), 甲醇 (色谱纯, 美国 Tedia 公
司), 醋酸铵、甲酸、冰醋酸 (色谱纯, 美国 Dikma 公
司), 二次重蒸水 (实验室自制)。
实验动物 健康 Sprague Dawley 雄性大鼠 18 只
(购自沈阳药科大学动物中心, 许可证号: SLXK2012-
0001), 体重 (240 ± 20) g。
色谱条件 色谱柱: Symmetry C18 色谱柱 (100
mm × 2.1 mm ID, 3.5 μm; 美国 Waters 公司); 流动相:
甲醇-5 mmol·L-1醋酸铵水溶液 (80∶20); 柱温: 室温;
流速: 0.2 mL·min-1; 进样量: 5 μL。
质谱条件 离子源: 电喷雾离子源 (ESI); 毛细
管电压: 3.0 kV; 离子源温度: 110 ℃; 脱溶剂气 (氮
气) 温度: 350 ℃; 流速: 400 L·h-1; 锥孔气流速: 30
L·h-1; 碰撞气 (氩气) 压力: 0.275 Pa; 检测方式为正
负离子检测多反应监测模式 (MRM)。奇任醇、DHKA
和内标蛇床子素的锥孔电压、碰撞诱导解离能及离
子反应见表 1, 用于定量分析的离子反应分别为 m/z
356.4→321.4 (奇任醇)、m/z 335.3→335.3 (DHKA) 和
m/z 245.1→188.9 (蛇床子素, 内标)。
溶液的制备
对照品储备液 取奇任醇、DHKA 对照品适量,
精密称定, 分别置 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并定容
殷 玥等: 豨莶草中两种活性二萜成分在大鼠体内的药动学研究 · 633 ·


Table 1 MS/MS transitions and parameters for the detection of the two analytes and internal standard (osthole). DHKA: ent-16β,17-
Dihydroxy-kauran-19-oic acid
Analyte Ionization mode
Mass (m/z)
Dwell time/ms Cone voltage/V Collision energy/eV
Q1 Q3
Kirenol ESI+ 356.4 321.4 (303.4) 300 17 10
DHKA ESI－ 335.3 335.3 (259.4) 300 50 10
Osthole ESI+ 245.1 188.9 (130.7) 300 20 13

至刻度, 得到质量浓度分别为 4.98 和 0.98 mg·mL-1
的对照品储备液。精密量取奇任醇储备液 5.0 mL 和
DHKA 储备液 12.5 mL, 置 100 mL 量瓶中, 用甲醇
稀释并定容至刻度, 得到质量浓度分别为 250 和 125
µg·mL-1 的混合对照品储备液, 于 4 ℃储存, 备用。
系列标准溶液 精密量取混合对照品储备液适
量, 用甲醇-水 (50∶50) 稀释成奇任醇质量浓度分
别为 50.0、100、250、1 000、2 500、10 000 和 25 000
ng·mL-1, DHKA 质量浓度分别 25.0、50.0、125、500、
1 250、5 000 和 12 500 ng·mL-1 的系列标准溶液, 于
4 ℃储存, 备用。
内标溶液 取蛇床子素对照品适量, 精密称定,
置 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并定容至刻度, 配成浓
度为 1.06 mg·mL-1 的储备液, 精密量取储备液适量,
用甲醇稀释制成浓度为 150 ng·mL-1 的内标溶液, 于
4 ℃储存, 备用。
灌胃药液的制备
豨莶草提取物灌胃药液的制备 取干燥豨莶草药
材粉末 100 g, 加 10 倍量甲醇回流提取 1 次, 再加 10
倍量乙酸乙酯回流提取 2 次, 每次 1 h, 过滤, 合并滤
液蒸发至干, 残渣用适量 0.5% CMC-Na溶液超声溶解,
制成豨莶草提取物灌胃药液 (含奇任醇 5 mg·mL-1,
含 DHKA 2 mg·mL-1)。
单体灌胃药液的制备 精密称取奇任醇和 DHKA
对照品适量, 加 0.5% CMC-Na 溶液超声溶解, 分别
制成 5 mg·mL-1奇任醇溶液, 2 mg·mL-1 DHKA 的单体
灌胃药液。
血浆样品预处理 在 10 mL 玻璃管中加入内标
溶液 100 μL, 于 40 ℃氮气流下吹干, 加入大鼠血浆
样品 100 μL 和 1% 冰醋酸水溶液 100 μL, 涡流混合
30 s, 加入乙酸乙酯 3 mL, 涡流混合 60 s, 离心 (3 500
r·min-1) 10 min, 取上清液于 40 ℃氮气流下吹干, 残
渣用甲醇-水 (80∶20) 100 μL 复溶, 取 5 μL 进样分
析。
血浆样品测定 血浆样品按“血浆样品预处
理”方法处理, 每个分析批制备一条标准曲线, 同时
制备低、中、高 3 个浓度的 QC 样品, 每个浓度的
QC 样品进行双样本分析, 并以同批的标准曲线计算
各时间点血浆样品及 QC 样品中待测物的浓度, 由
QC 样品的结果决定当日数据的取舍。
方法学考察
方法的专属性 取大鼠空白血浆 100 μL, 除不
加内标溶液外, 按“血浆样品预处理”方法操作, 进
样分析; 取 10 mL 玻璃管, 加入内标溶液 100 μL, 加
入系列标准溶液 100 μL, 涡流混合 30 s, 于 40 ℃氮
气流下吹干, 加入大鼠空白血浆 100 μL, 制备 50.0
ng·mL-1 奇任醇和 25.0 ng·mL-1 DHKA (LLOQ) 的血
浆样品, 其他按“血浆样品预处理”方法操作, 进样
分析; 分别取大鼠灌胃给予豨莶草提取物 6 和 36 h
后收集的血浆样品 100 μL, 按“血浆样品预处理”方
法操作, 进样分析; 考察专属性。
标准曲线和定量下限 分别取系列标准溶液
100 L, 于 40 ℃氮气流下吹干, 加入大鼠空白血浆
100 L, 配制成奇任醇血药浓度分别为 50.0、100、
250、1 000、2 500、10 000 和 25 000 ng·mL-1, DHKA
血药浓度分别 25.0、50.0、125、500、1 250、5 000 和
12 500 ng·mL-1 的血浆样品, 按“血浆样品预处理”
方法操作, 进样分析, 建立标准曲线。以待测物浓度
(x) 为横坐标, 待测物与内标的峰面积比值 (y) 为纵
坐标 , 采用加权 (1/x2) 最小二乘法进行回归运算 ,
求得直线回归方程即为标准曲线。
精密度与准确度 按“标准曲线和定量下限”
项下方法操作, 分别制备低、中、高 3 个浓度 (奇任
醇分别为 120、2 000 和 20 000 ng·mL-1, DHKA 分别为
60.0、1 000 和 10 000 ng·mL-1) 的质量控制 (QC) 样
品, 每一浓度进行 6 样本分析。连续测定 3 天, 并根
据当日标准曲线计算 QC 样品的浓度, 与配制浓度对
照, 求得方法的精密度 (RSD) 和准确度 (RE)。
提取回收率和基质效应 按“标准曲线和定量
下限”项下方法操作, 分别制备低、中、高 3 个浓度
(奇任醇分别为 120、2 000 和 20 000 ng·mL-1, DHKA
分别为 60.0、1 000 和 10 000 ng·mL-1) 的质量控制
(QC) 样品, 每一浓度进行 6 样本分析, 得峰面积 A;
另取大鼠空白血浆 100 μL, 除不加内标外, 按“血浆
· 634 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2016, 51 (4): 631-636

样品预处理”方法操作, 向获得的残渣中加入相应
浓度的标准溶液 100 μL 及内标溶液 100 μL, 40 ℃氮
气流下吹干, 再用甲醇-水 (80∶20) 100 μL 复溶, 得
到未经提取的血浆样品溶液, 每一浓度 6 样本分析,
得峰面积 B。取相应浓度的标准溶液 100 μL 及内标
溶液 100 μL, 40 ℃氮气流下吹干, 用甲醇-水 (80∶20)
100 μL 复溶, 得到不含血浆基质的样品溶液, 每一浓
度 3 样本分析, 得峰面积 C。提取回收率和基质效应
分别以 (A/B×100) % 和 (B/C×100) % 表示。
稳定性 分别制备低、高 2 个浓度 (奇任醇分别
为 120 和 20 000 ng·mL-1, DHKA 分别为 60.0 和 10 000
ng·mL-1) 的 QC 样品, 每一浓度进行 3 样本分析, 分
别考察 QC 血浆样品经室温放置 4 h; 3 次冻融循环;
-20 ℃放置 20 天; 预处理后 4 ℃下放置 12 h 的稳定
性。按“血浆样品预处理”方法操作, 进样分析, 求
得 RSD 和 RE。
SD 大鼠药代动力学实验及统计学分析 健康
Sprague Dawley 雄性大鼠 18 只, 随机分成 3 组, 每组
6 只。给药前禁食 12 h, 自由饮水, 分别灌胃给予豨莶
草提取物灌胃药液 (剂量相当于奇任醇 50 mg·kg-1,
DHKA 20 mg·kg-1)、奇任醇单体灌胃药液 (剂量为
50 mg·kg-1) 和 DHKA 单体灌胃药液 (剂量为 20
mg·kg-1)。于给药前 (0 h) 及给药后 0.08、0.17、0.25、
0.50、0.75、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、
36.0 和 48.0 h 经眼球后静脉丛取血 0.25 mL, 置涂有
肝素的离心管中, 离心 (12 000 r·min-1) 8 min, 分离
血浆, 于 -20 ℃保存待测。
采用 Excel 软件进行有关药代动力学参数求算,
并求出各参数的平均值和标准差, 结果以平均值 ± 标
准差 ( x ± s) 表示。tmax、Cmax 为实测值; AUC0-t 采用
梯形法计算; AUC0-∞ = AUC0-t + Ct / ke, ke (末端消除速
率常数) 为对数血药浓度-时间曲线末端 4 个浓度点
直线的斜率; 按 t1/2 = 0.693/ke 求出 t1/2。采用 SPSS 统
计分析软件 (13.0版, 社会科学统计软件包), 对给予
大鼠豨莶草提取物和单体后待测物的药动学参数进
行检验分析, 讨论其在大鼠体内药动学行为的差异。
其中 Cmax、AUC0-t 和 AUC0-∞先进行对数转换, 然后
再进行独立样本 t 检验分析, tmax 和 t1/2 进行非参数检
验 (Mann-Whitney test) 分析[6, 7], 当 P < 0.05 时认为
存在显著性差异。

结果
1 质谱分析
采用电喷雾离子源, 以正负离子方式进行检测。
从一级全扫描质谱图中获得奇任醇、DHKA 和内标蛇
床子素的准分子离子峰分别为 m/z 356.4、m/z 335.3
和 m/z 245.1, 选择性对其进行碰撞诱导解离, 得到峰
强度较高的二级碎片离子分别为 m/z 321.4 (奇任醇)、
m/z 335.3 (DHKA) 和m/z 188.9 (蛇床子素, 内标), 采
用 MRM 扫描方式, 以上述离子转化进行定量分析,
具有较高的专属性。图 1A 为奇任醇的二级全扫描质
谱图, 图 1B 为 DHKA 二级全扫描质谱图, 图 1C 为
内标蛇床子素二级全扫描质谱图。
2 方法学考察
2.1 方法专属性 在本实验所采用的色谱条件下,
奇任醇、DHKA 和内标的保留时间分别为 1.92、2.44
和 3.09 min, 血浆中的内源性物质不干扰待测物和
内标的测定, 表明方法的专属性良好。空白血浆色谱
图见图 2A, 空白血浆加奇任醇及其内标蛇床子素、
DHKA 及其内标蛇床子素 (LLOQ) 的血浆样品色谱
图见图 2B, 大鼠灌胃给予豨莶草提取物 6 h后血浆样
品色谱图见图 2C, 大鼠灌胃给予豨莶草提取物 36 h
后血浆样品色谱图见图 2D。
2.2 线性范围及定量下限 奇任醇和 DHKA 的回归
方程分别为 y = 5.68 × 10-4 x - 8.22 × 10-4 (r = 0.992 9) 和 y
= 2.41 × 10-3 x + 8.50 × 10-3 (r = 0.996 6), 线性范围分别
为 50.0～25 000 ng·mL-1 和 25.0～12 500 ng·mL-1。结
果表明, 奇任醇和DHKA在各自浓度范围内线性关系
良好, 测定奇任醇和 DHKA 的定量下限分别为 50.0
和 25.0 ng·mL-1。


Figure 1 Product ion scan spectra and chemical structures of kirenol (A), DHKA (B) and osthole (C)
殷 玥等: 豨莶草中两种活性二萜成分在大鼠体内的药动学研究 · 635 ·


Figure 2 Representative MRM chromatograms of kirenol (1),
DHKA (2) and osthole (3) in rat plasma. A: Blank plasma; B:
Blank plasma spiked with the two analytes at LLOQ and IS; C:
Plasma sample 6 h after oral administration of Herba Sieges-
beckiae extract; D: Plasma sample 36 h after oral administration
of Herba Siegesbeckiae extract

2.3 精密度与准确度 奇任醇和 DHKA 的日内和日
间精密度 RSD 值均不大于 13.9%, 准确度在-10.7%～
10.3% 之内, 均符合生物样品分析方法指导原则的有
关规定[8]。
2.4 提取回收率和基质效应 奇任醇 3 个浓度血浆
样品的提取回收率在 87.4%～93.4% 之间, DHKA 3 个
浓度血浆样品的提取回收率在 90.6%～94.8% 之间,
内标的提取回收率为 (92.7 ± 9.3) %。待测物与内标的
基质效应均在 85%～115% 之间, 不存在明显的基质
效应。
2.5 稳定性 奇任醇和 DHKA 低、高 2 个浓度的
QC 样品处理后经室温放置 4 h; 3 次冻融循环; -20 ℃
放置 20 天; 预处理后 4 ℃下放置 12 h。奇任醇 RE
在 -8.5%～12.3%, DHKA 在 -7.7%～9.9%, RSD 均小
于 11.2%。结果表明, 奇任醇和 DHKA 的血浆样品在
以上条件下稳定性良好。
3 药动学的研究
大鼠分别灌胃给予豨莶草提取物和单体后, 测
得各时间点血浆中奇任醇和 DHKA 的浓度。求算待
测物各时间点血药浓度的平均值和标准差, 绘制两
组分的平均血药浓度-时间曲线, 见图 3。两组分的主
要药动学参数及检验结果见表 2。


Figure 3 The plasma concentration-time curves of kirenol
(A) and DHKA (B) following oral administration of Herba
Siegesbeckiae extract and the single substances. n = 6, x ± s

讨论
本实验建立了准确、灵敏、快速的 LC-MS/MS
法同时测定大鼠血浆中奇任醇和 DHKA 的含量, 并
将该法成功应用于两种活性二萜单体在大鼠体内的
药动学研究。
由于待测的两种二萜极性较小, 本实验优先选
择液液萃取法作为处理方法, 操作简便、成本低, 且
受内源性物质干扰少。实验考察了不同提取试剂的提
取效率。结果表明, 使用乙酸乙酯的提取效率最高,
奇任醇的提取回收率大于 90%, DHKA 的提取回收率

Table 2 Main pharmacokinetic parameters of kirenol and DHKA in rats after oral administration of Herba Siegesbeckiae extract and the
single substances. n = 6, x ± s. *P < 0.05, **P < 0.01 vs Kirenol alone; ΔP < 0.05, ΔΔP < 0.01 vs DHKA alone
Parameter
Kirenol DHKA
Kirenol alone Extract DHKA alone Extract
tmax /h 0.36 ± 0.07 0.28 ± 0.08 0.81 ± 0.63
0.21 ± 0.10ΔΔ
t1/2 /h 0.88 ± 0.21 4.56 ± 1.50** 11.34 ± 1.27 13.77 ± 3.09
Cmax /ng·mL-1 12 354 ± 6 428 562.8 ± 104.9** 5 197 ± 1 214 6 708 ± 2 086
AUC0-t /ng·h·mL-1 20 514 ± 7 173 1 502 ± 245** 145 929 ± 56 169
82 212 ± 22 741Δ
AUC0-∞ /ng·h·mL-1 20 732 ± 7 109 1 758 ± 209** 152 557 ± 57 114
90 083 ± 24 153Δ

· 636 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2016, 51 (4): 631-636

大于 70%。考虑到 DHKA 结构中含有羧基基团, 加
入酸化试剂冰醋酸以提高其提取回收率。实验发现,
虽然加入冰醋酸后奇任醇的提取回收率略有下降 ,
但 DHKA 的提取回收率明显增大。同时考察了加入
冰醋酸对提取回收率的影响。研究表明, 加入 1% 冰
醋酸时, DHKA 酸化较完全, 两待测物的提取回收率
稳定且均大于 85%; 继续增大冰醋酸的浓度时, 奇任
醇的回收率明显下降。
本实验初期考察了不同比例的乙腈-水、甲醇-水
系统, 结果表明待测物在甲醇-水系统中的响应明显
好于其在乙腈-水系统中, 且以 80% 的甲醇为最佳。考
察了在水中添加甲酸和醋酸铵对分离的影响, 发现
加入醋酸铵后, 奇任醇能够形成稳定的 m/z 356.4 的
前体离子[M+NH4]+和产物离子 m/z 321.4, 而在其他
色谱系统中奇任醇所形成的其他前体离子均未能形
成特征碎片离子, 因此选择水相中添加醋酸铵以提
高奇任醇的选择性。进一步考察了醋酸铵浓度的
影响, 当醋酸铵浓度为 5 mmol·L-1 时, 待测物峰形和
响应均较好, 且添加剂的加入对 DHKA 的色谱行为
及质谱行为几乎无影响, 故最终确定流动相系统为
甲醇 - 5 mmol·L-1 醋酸铵水溶液 (80∶20)。本实验中
待测物在等度洗脱条件下能够获得良好的峰形, 且
等度洗脱能够缩短分析时间, 该方法总的分析时间
为 4 min, 适合高通量的体内样品分析。
本实验分别测定了灌胃给予大鼠豨莶草药材提
取物和等剂量两种活性二萜单体后的药动学参数。结
果表明, 奇任醇在大鼠体内吸收迅速, 在 25 min内血
药浓度快速升高达峰后又迅速消除, 8 h 后在血浆中
基本检测不到奇任醇。大鼠灌胃给予豨莶草药材提取
物后, 与灌胃给予奇任醇单体相比, 奇任醇的 Cmax、
AUC0-t 和 AUC0-∞均显著降低, t1/2 显著增加。表明灌
胃给予豨莶草药材提取物后, 大鼠对奇任醇的吸收
明显降低, 但消除速度有所减慢。
DHKA 在大鼠体内的药动学行为具有吸收快和
消除慢的特点。与奇任醇比较, 该化合物的 AUC 高,
表明其在大鼠体内生物利用度高。大鼠灌胃给予豨
莶草药材提取物后, 与灌胃给予 DHKA 单体相比,
DHKA 的 AUC0-t和 AUC0-∞均明显降低, tmax也显著降
低。表明灌胃给予豨莶草药材提取物后, 虽然大鼠对
DHKA 的吸收有所降低, 但吸收速率显著增加。
对于待测物在灌胃给予大鼠豨莶草提取物和单
体后药动学行为产生差异的原因, 推测可能是由于
提取物中多种化学成分的相互作用, 影响了待测物
的药动学行为。作用机制有待进一步研究。
References
[1] Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the
People’s Republic of China (中华人民共和国药典) [S]. Part
1. 2010 ed. Beijing: China Medical Science Press, 2010.
[2] Wang ZM, Zhu SG, Wu ZW, et al. Kirenol upregulates
nuclear Annexin-1 which interacts with NF-κB to attenuate
synovial inflammation of collagen-induced arthritis in rats [J].
J Ethnopharmacol, 2011, 137: 774-782.
[3] Lu Y, Xiao J, Wu ZW, et al. Kirenol exerts a potent anti-
arthritic effect in collagen-induced arthritis by modifying the T
cells balance [J]. Phytomedicine, 2012, 19: 882-889.
[4] Wang JP, Xu HX, Wu YX, et al. Ent-16β,17-dihydroxy-
kauran-19-oic acid, a kaurane diterpene acid from Siegesbeckia
pubescens, presents antiplatelet and antithrombotic effects in
rats [J]. Phytomedicine, 2011, 18: 873-878.
[5] Sung SH, Park SH, Song SY, et al. Epidermal regeneration
by ent-16α,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid isolated from
Siegesbeckia pubescens [J]. Cell Prolif, 2011, 44: 527-536.
[6] Di B, Feng NP, Liu WY. Pharmacokinetic comparisons of
Shuang-Huang-Lian with the different combinations of its
constitutional herbs [J]. J Ethnopharmacol, 2006, 107: 401-
405.
[7] Zhao JJ, Han X, Zhao X, et al. A sensitive liquid chroma-
tographic–mass spectrometric method for simultaneous deter-
mination of dehydroevodiamine and limonin from Evodia
rutaecarpa in rat plasma [J]. Anal Bioanal Chem, 2011, 401:
289-296.
[8] FDA. Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation
[S/OL]. 2001-05 [2011-11-18]. http://www.fda.gov/downloads/
Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/
UCM070107.pdf 2001-05.