全 文 ：相的整体化色谱柱应用 ,相对于传统色谱柱十余种
化学修饰基团 ,还不能满足色谱分析的要求。
另一方面 ,尽管有文献[ 7]提及 ,整体化色谱柱
在高流速下对色谱峰的锐化有助于提高分析的灵敏
度 ,但在实验中发现 ,对于紫外 -可见光这种浓度型
检测器 ,高流速下整体化色谱柱的响应会降低 ,仅对
那些因峰展宽而无法分辨的低含量成分 ,才会因为
高流速对色谱峰的锐化作用提高灵敏度。
整体化色谱柱采用的高流速对溶质的洗脱有促
进作用 ———高流速在一定范围内相当于提高了流动
相的洗脱强度———因此 ,那些在颗粒型色谱柱上需
要使用含低含量有机相 、甚至纯水相的流动相才能
分离的成分在整体色谱柱上可能难以分离 。
综上所述 ,整体化色谱柱具有鲜明的技术特征 ,
为在现有仪器设备上实现样品的高通量测定提供了
可能 ,并且具有更好的耐用性和更灵活的使用方法 ,
对于优化 、改进中药特征图谱 /指纹图谱的分析方
法 ,提高工作效率 ,进而提高中药材 、中成药的质量
控制水平 ,具有极大的促进作用 。
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(收稿日期:2010-03-29)
作者简介:闫东旭,女 , 硕士研究生　　研究方向:中药质量控制方法与药动学研究　　＊通讯作者:赵怀清 ,男 ,教授　　研究方向:中药质量
控制方法与药动学研究　Tel:(024)23986250　　E-mail:zhaohq1955@sina.com
RP-HPLC同时测定豨莶草中奇壬醇与豨莶精醇的含量
闫东旭 1 ,王运君 2 ,段琼 1 ,张晓梅 1 ,赵怀清 1＊(1.沈阳药科大学药学院 ,沈阳 110016;2.辽河油田中心医院药剂科 辽宁 盘锦
124010)
摘要:目的　建立 RP-HPLC同时测定豨莶草中奇壬醇与豨莶精醇的含量。 方法　色谱柱为 KromasilC18柱(4.6 mm×200
mm, 5 μm),流动相为乙腈-水溶液 , 梯度洗脱(0 ～ 6 min, 29.5%乙腈 , 6 ～ 10 min, 29.5% ～ 43.5% 乙腈), 流速为 1.0 mL·
min-1 , 柱温 30 ℃,检测波长 215nm。结果　奇壬醇在 0.015 1 ～ 0.302 4 mg· mL-1内线性关系良好 , r=0.999 8,平均回收率
为 101.5%(RSD=1.7%, n=9);豨莶精醇在 0.002 6 ～ 0.052 0mg· mL-1内线性关系良好 , r=0.999 7, 平均回收率为 101.7%
(RSD=2.0%, n=9)。结论　该方法简便快速 , 结果准确可靠 , 重复性良好 , 适于中药豨莶草中奇壬醇与豨莶精醇的同时测
定 , 并应用本方法比较了不同产地豨莶草药材中奇壬醇与豨莶精醇的含量。
关键词:豨莶草;奇壬醇;豨莶精醇;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)12-0945-04
SimultaneousDeterminationofKirenolandDarutigenolinHerbaSiegesbeckiaebyRP-HPLC
YANDong-xu1 , WANGYun-jun2 , DUANQiong1 , ZHANGXiao-mei1 , ZHAOHuai-qing1＊(1.SchoolofPharmacy,
ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China;2.DepartmentofPharmacy, LiaoheYoutianCentralHospital, Panjin
124010, China)
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ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishaRP-HPLCmethodforsimultaneousdeterminationofkirenolanddarutigenolinHerba
Siegesbeckiae.METHODS　TheseparationwasperformedonaKromasi1C18 column(4.6mm×200 mm, 5μm).Acetonitrile-water
wasusedasthemobilephasewithgradientelution(0-6min, 29.5% acetonitrile, 6-10 min, 29.5%-43.5% acetonitrile).The
flowratewas1.0mL· min-1 .Thecolumntemperaturewas30℃andtheUVdetectionwavelengthwas215 nm.RESULTS　Thecal-
ibrationcurvesofkirenolwereingoodlinearityintherangeof0.015 1-0.302 4mg· mL1(r=0.999 8).Theaveragerecoverywas
101.5% (RSD=1.7%, n=9).Thecalibrationcurvesofdarutigenolwereingoodlinearityintherangeof0.002 6 -0.052 mg·
mL-1(r=0.999 7).Theaveragerecoverywas101.7% (RSD=2.0%, n=9).CONCLUSION　Themethodissimple, accurate
andsensitivewithgoodreproducibilityandcouldbeusedforthesimultaneousdeterminationofkirenolanddarutigenolinHerbaSieges-
beckiae.ThecontentsofkirenolanddarutigenolinHerbaSiegesbeckiaefromdifferentplaceswerecomparedbythismethod.
KEYWORDS:HerbaSiegesbeckiae;kirenol;darutigenol;HPLC;determination
　　豨莶草为菊科植物豨莶(Siegesbeckiaorientalis
L.)、腺梗豨莶(Siegesbeckiapubescens)和毛梗豨莶
(SiegesbeckiaglabrescensMakino)的干燥地上部分 ,
味苦性温 、寒 , 入肝 、脾 、肾三经 ,收载于 《中国药典 》
2005年版一部 ,具有祛风湿 ,利关节 ,解毒之功效 ,
临床上主要用于风湿麻痹 ,腰膝酸软 ,四肢麻痹 ,半
身不遂 ,风疹湿疮等症 [ 1] 。主要分布于江苏 、安徽 、
浙江 、江西 、福建 、湖北 、湖南 、广东 、四川 、贵州 、云南
等地。药理实验表明 ,豨莶草在抗血栓 、抗风湿 、抗
炎镇痛 、抗生育 、降压 、免疫系统及改善微循环等方
面具有良好的药理活性 [ 2-4] 。其主要成分为二萜类
化合物 ,三种豨莶中均含有奇壬醇和豨莶精醇 ,二者
结构相似 ,并且均为活性成分[ 2, 5] 。 2005年版《中国
药典》中及有关文献 [ 6]选用活性成分奇壬醇为指标
成分对豨莶草进行质量控制。而中药所含成分复
杂 ,其临床疗效为多种成分的综合作用 ,有时甚至具
有双向调节作用 ,很难确定某一种成分是中医用药
的唯一有效成分 。同时选用多个有效成分作为中药
的定量指标才能更加真实地反映中药的内在质量 。
根据多个有效成分的有无或含量的高低来控制药物
质量的模式 ,是现阶段对中药及其复方的质量控制
方法研究的热点之一 。豨莶精醇也是豨莶草中的有
效成分 ,因此 ,本实验首次建立了 RP-HPLC同时测
定豨莶草中奇壬醇和豨莶精醇的含量 ,进一步完善
了豨莶草的质量控制方法 ,并对不同产地的豨莶草
进行了含量测定 。
1　仪器与试药
LC-10ATVP-UV高效液相色谱仪(日本 Shi-
madzu), SPD-10AVP紫外检测器(日本 Shimad-
zu), ANASTAR色谱工作站(美国 SuntekScience公
司), BS-124S电子分析天平 (北京塞利多斯仪器
系统有限公司)。
奇壬醇对照品(批号:20090104,上海展舒化学
科技有限公司 ,纯度为 99.8%);豨莶精醇对照品
(批号:03-2006, 中药标准化研究中心 , 纯度为
99.8%)。
豨莶草药材 14批 ,均为市售品 ,由沈阳药科大
学孙启时教授鉴定 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色 谱 柱:KromasilC18柱 (4.6 mm×200mm, 5
μm);流 动 相:乙腈(B)-水(A)溶液;梯度洗脱程
序:0 ～ 6 min, 29.5% B, 6 ～ 10 min, 29.5% ～
43.5% B;流速:1.0 mL· min-1;检测波长:215
nm;柱温:30℃;进样量:20 μL。
2.2　溶液的制备
2.2.1　混合对照品溶液的制备　分别精密称取奇
壬醇 、豨莶精醇对照品适量 ,置 10 mL量瓶中 ,用甲
醇溶解稀释至刻度 ,摇匀 ,制得浓度分别 1.26, 0.52
mg·mL-1的对照品储备液Ⅰ , Ⅱ。分别精密吸取上
述对照品储备液 6 , 2.5mL置同一 10mL量瓶中 ,用
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得混合对照品溶液(每 1
mL含奇壬醇 0.756mg,豨莶精醇 0.130 mg)。
2.2.2　供试品溶液的制备　取豨莶草药材粉末约
1.0 g,精密称定 ,加入甲醇 30mL, 70℃恒温水浴下
回流 1.5h,放冷 ,过滤 ,用少量甲醇洗涤残渣 ,合并
滤液 ,减压蒸干。用 10mL90%甲醇溶液溶解残渣 ,
并转移至分液漏斗中 ,依次用 30, 20, 10 mL石油醚
萃取色素等脂溶性杂质 ,弃去石油醚层。将甲醇溶
液层减压蒸干 , 所得残渣用甲醇溶解并稀释至 10
mL量瓶中 ,摇匀 ,经 0.45 μm滤膜过滤 ,取续滤液 ,
即得 。
2.3　色谱系统适用性实验
在 “2.1”色谱条件下 ,理论板数按奇壬醇 、豨莶
精醇计 ,均不低于 6 000。奇壬醇 、豨莶精醇与相邻
组分峰的分离度均大于 1.5,拖尾因子均在 0.95 ～
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1.05之间。色谱图见图 1。
2.4　标准曲线的绘制
依次精密吸取上述混合对照品溶液 0.1 ,
0.5, 1 , 1.5 , 2.0 mL,分别置 5 mL量瓶中 ,用甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 。精密吸取上述溶液各 20 μL,
进样测定 ,记录峰面积 。以对照品质量浓度 (X,
mg· mL-1)为横坐标 ,峰面积 (Y)为纵坐标绘制
标准曲线并进行回归计算 ,回归方程见表 1。
2.5　精密度实验
取混合对照品溶液 (奇壬醇 0.151 2 mg·
mL-1 ,豨莶精醇 0.026mg·mL-1),在 “2.1”条色谱
条件下 ,连续进样测定 6次 ,计算奇壬醇 、豨莶精醇
色谱峰面积的 RSD分别为 0.51%、0.91%,表明仪
器精密度良好。
2.6　重复性实验
取同一批豨莶草药材粉末(兰州)约 1.0 g,精
密称定 ,按 “ 2.2.2”项下方法操作 ,平行制备供试品
溶液 6份 ,在 “2.1”色谱条件下进样分析测定 ,奇壬
醇 、豨莶精醇含量的 RSD分别为 0.84%、0.94%,结
果表明方法重复性良好。
2.7　稳定性实验
取同一供试品溶液(兰州),室温放置 ,分别于
0、2、4、8、12、24 h按 “2.1”色谱条件测定 ,测得奇壬
醇 、豨莶精醇峰面积的 RSD分别为 1.3%、1.8%,表
明供试品溶液室温放置 24h稳定。
2.8　回收率实验
取同一批(兰州)已知含量的样品约 0.5 g,精
密称定 ,共 9份 ,按低 、中 、高质量浓度分别精密加入
图 1　对照品(A)和豨莶草药材(B)HPLC图谱
Fig.1　HPLCChromatogramsofreferences(A)
表 1　奇壬醇 、豨莶精醇的线性回归方程.n=5
Tab.1　Linearregressionequationofkirenolanddarutigenol.
n=5
Component Regressionequation r
Linearrange
/mg· mL-1
Kirenol Y=4.171×106X+3.511×103 0.999 8 0.015 1 ～ 0.302 4
Darutigenol Y=4.000×106X+3.762×102 0.999 7 0.002 6 ～ 0.052 0
奇壬醇 、豨莶精醇对照品储备液适量(分别相当于
药材原有含量的 50%、100%、150%),按 “ 2.2.2”供
试品溶液的制备项下方法操作 ,制备每一质量浓度
的溶液各 3份 ,按 “2.1”色谱条件测定 。奇壬醇与
豨莶精醇平均回收率分别为 101.5%, RSD=1.7%
(n=9),和 101.7%, RSD=2.0%(n=9)。
2.9　样品测定
称取 14个产地的豨莶草药材粉末 1.0 g,精密
称定 ,按 “ 2.2.2”供试品溶液制备项下方法操作 ,制
备供试品溶液 ,在 “ 2.1”色谱条件下进样分析 ,记录
色谱峰面积 ,外标一点法计算豨莶草中奇壬醇和豨
莶精醇的含量 。结果见表 2。
3　讨　论
3.1　检测波长的选择
据 2005年版 《中国药典 》及相关文献 [ 1] 报
道[ 6] ,奇壬醇最大吸收波长在 215 nm处 ,豨莶精醇
与奇壬醇结构相似 ,故选用 215 nm作为测定波长。
3.2　流动相条件的选择
实验中曾尝试等度洗脱 ,但分析时间过长且样
品峰与杂质峰分离效果不好 ,故最终采用梯度洗脱 ,
分析时间相对较短 ,且奇壬醇 、豨莶精醇与杂质峰达
到基线分离 。实验中考察了甲醇-水系统 ,乙腈-水
系统 ,由于检测波长较低 ,接近甲醇的末端吸收 ,在
进行梯度洗脱时 ,基线漂移很严重 ,故选用乙腈-水
作为流动相系统。实验中曾考察过不同梯度程序 ,
如:0 ～ 5 min, 29%(乙腈), 5 ～ 10 min, 29% ～ 50%;
0 ～ 5 min, 34% ～ 50%(乙腈);0 ～ 6 min, 29.5%
　　
表 2　豨莶草样品中奇壬醇和豨莶精醇的含量 .n=2
Tab.2　Contentsofkirenolanddarutigenolinsiegesbeckiae.
n=2
No. Source Kirenol/% Darutigenol/%
1 Jiangxi 0.065 0.011
2 Changchun 0.100 0.029
3 Hunan 0.092 0.023
4 Lanzhou 0.120 0.022
5 Anhui 0.054 0.007
6 Jiangsu 0.082 0.039
7 Hebei 0.150 0.009
8 Henan 0.057 0.018
9 Hubei1 0.015 0.026
10 Sichuan 0.016 0.018
11 Hubei2 0.019 0.014
12 Zhejiang 0.052 0.019
13 Hubei3 0.080 0.008
14 Yantai 0.110 0.003
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(乙腈), 6 ～ 10 min, 29.5% ～ 43.5%(乙腈)等 。结
果表明 , 0 ～ 6 min, 29.5% (乙腈 ), 6 ～ 10 min,
29.5% ～ 43.5%(乙腈)梯度程序使两待测成分与
杂质达到基线分离 ,且分析时间较短 ,两个组分的保
留时间适宜 ,故采用此梯度洗脱程序 。
3.3　提取方法
3.3.1　提取溶剂的选择　对甲醇 、无水乙醇两种溶
剂进行了考察 ,结果甲醇的提取效率高于无水乙醇 。
在此基础上又考察了体积分数为 50%、70%、90%、
100%甲醇 ,结果表明 , 90%甲醇与 100%甲醇提取
效率高且接近。鉴于 100%甲醇提取后极性大的杂
质少 ,因此 ,选用 100%甲醇作为提取溶剂。实验中
还考察了甲醇的用量 , 10, 20, 30, 40, 50 mL。结果表
明 , 30 mL甲醇即可提取完全 ,故最终选用 30 mL作
为甲醇溶剂的用量。
3.3.2　提取方法的选择　比较了超声提取法和回
流提取法 ,实验结果表明 ,回流提取方法提取效率明
显优于超声提取 ,故采用回流提取法 。
3.3.3　回流时间　考察了甲醇回流 1, 1.5, 2 , 2.5 ,
3 h。结果表明 , 1.5 h即可将两种成分提取完全 ,故
选用甲醇回流 1.5 h。
3.3.4　色素等脂溶性杂质的去除方法　实验中曾
尝试不经石油醚脱脂直接用甲醇回流提取 ,但是有
些产地药材经提取后样品颜色呈墨绿色 ,进样后柱
压明显增高 ,污染色谱柱 。后尝试了药典中的脱脂
方法即用石油醚索氏回流脱脂 3 h的方法 ,经处理
后 ,有的产地的样品颜色仍旧很深 ,故本实验又考察
了活性炭除去色素 ,醇提水沉及石油醚萃取脱色的
　　
方法 。用活性炭脱色时 ,室温下效果不好 ,后尝试超
声 ,加热等方法 ,结果表明 ,加热时可除去大部分色
素 ,但经高效液相色谱分析 ,两种成分被活性炭吸附
较多 ,含量损失很大。醇提水沉效果也不明显。在用
石油醚萃取杂质时 ,甲醇与石油醚部分互溶 ,经实验
可知 , 90%甲醇溶液与石油醚即可完全分层 ,实验表
明 ,此方法无论是在石油醚用量还是提取时间以及最
终除杂效果都较药典中的提取方法有所改进。
3.4　不同产地含量比较
从实验结果中可以看出 ,各产地豨莶草中奇壬
醇和豨莶精醇的含量均存在一定差异 ,其中河北产
地样品中的奇壬醇含量最高 ,江苏产地样品中豨莶
精醇含量最高 。
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(收稿日期:2009-11-10)
《中国药学杂志 》 2010年肉苁蓉专刊组稿通知
中医药是祖国医药宝库中的瑰宝 ,肉苁蓉为列当科多年生寄生植物肉苁蓉(CistanchedeserticolaY.C.Ma)和管花肉苁蓉
[ C.tubulosa(Schenk)R.Wight]的干燥肉质茎 , 具有补肾阳 、益精血 、润肠 、通便的功效 ,为我国著名的补益中药。其入药较
早 , 距今已有两千多年的历史 , 《神农本草经》中列为 “上品”之药。主产内蒙古 、甘肃 、新疆 、青海等地。为展示近年来肉苁蓉
的相关研究成果 , 进一步开发利用肉苁蓉植物资源 , 本刊将于 2010年 11 ～ 12月(具体刊期待定)出版 “肉苁蓉专刊 ”
(重点号)。
1　主题　与肉苁蓉有关的研究 、开发与应用。
2　内容　包括肉苁蓉属植物的资源 、栽培 、采收加工 、病虫害防治及与肉苁蓉属植物有关的化学 、质量分析 、制剂 、药理 、药动 、
临床等方面的研究 、应用。
3　征文要求与注意事项　稿件内容应属未在国内外公开刊物发表过的研究成果。请首先填写组稿表 , 并于 2010年 6月 10
日前寄给下述联系人(电子邮件)。稿件请登录 www.zgyxzz.com.cn进行网上注册投稿 , 格式按照《中国药学杂志》 2010年稿
约的要求 , 标明 “肉苁蓉专刊征稿” ,以便于及时进行稿件处理。
4　联系人 　姜勇:电话:010-82802719;E-mail:yongjiang@bjmu.edu.cn;黄石麟:电话:010-586992778-827;E-mail:h@
cpa.org.cn。
5　截稿日期　2010年 8月 15日。 [本刊讯 ]
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