全 文 ：HAINAN MEDICAL JOURNAL 《海南医学》2011年第22卷第21期Vol.22 No.21 November 2011
腺梗豨莶IIA对深静脉血栓形成大鼠血红素氧合酶-1活性的影响
王发辉，冯起校*，于 斌，林淑媚
(广东医学院附属陈星海医院，广东 中山 528415)
【摘要】 目的 观察腺梗豨莶ⅡA对深静脉血栓形成大鼠血红素氧合酶-1活性的影响。方法 60只SD大
鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阿司匹林组、肝素组、腺梗豨莶ⅡA高剂量组、腺梗豨莶ⅡA低剂量组，采用
环形缩窄下肢股静脉管腔1/2限流，直流电持续电击损伤造下肢深静脉血栓模型，缝合腹壁6 h后重新打开，剥离
静脉取出血栓称湿重及干重，并采用分光光度法检测HO-1活性。结果 腺梗豨莶ⅡA对结扎并电击损伤管壁
造成的股静脉血栓的重量有明显减轻作用并能诱导HO-1活性增加，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
结论 腺梗豨莶ⅡA能诱导HO-1表达，保护血管内皮细胞功能，起到抗血栓的作用。
【关键词】 腺梗豨莶ⅡA；血栓；血红素氧合酶-1；内皮细胞
【中图分类号】 R-332 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350（2011）21—015—03
Effect of siegesbeckia pubescens MakinoⅡA on the activity of heme oxygenase-1 in rats. WANG FA-hui, FENG
Qi-xiao, YU Bin, LIN Shu-mei. Department of Respiratory Medicine, Chenxinghai Hospital Affiliated to Guangdong
Medical College, Zhongshan 528415, Guangdong, CHINA
【Abstract】 Objective To observe the effect of siegesbeckia pubescens Makino ⅡA on the activity of heme
oxygenase-1 and the deep venous thrombosis in rats. Methods Sixty SD rats were randomly divided into the normal
control group, the model control group, the aspirin group, the heparin group, the high siegesbeckia pubescens Makino
ⅡA group and the low siegesbeckia pubescens Makino ⅡA group. The moist weight and dry weight of thrombus
were weighed, and the level of HO-1 activity was measured with the double wavelength scanning by a spectrophotom-
eter. Results Siegesbeckia pubescens Makino ⅡA could markedly decrease the weight of venous thrombus of the
model and induce the expression of heme oxygenase-1, which showed significantly difference with the model control
group (P<0.01). Conclusion Siegesbeckia pubescens MakinoⅡA could protect endothelial cell functions by induct-
ing the expression of heme oxygenase-1, thus playing a role in the prevention of thrombosis.
【Key words】 Siegesbeckia pubescens Makino IIA; Thrombus; Heme oxygenase-1; Endothelial cells
基金项目：广东省科学技术厅社会发展领域科技资助项目(编号：20101096-32)
作者简介：王发辉(1985—)，男，海南省定安县人，在读硕士。
*通讯作者：冯起校。E-mail：cxhfqx@163.com
·实验研究·
血栓性疾病已成为现今威胁人类健康的最主要
杀手之一。尽管近年来对于下肢深静脉血栓的预防、
诊断、治疗有了很大的进步，但是血栓性疾病在老年
人中的发病率仍逐年上升，已经成为我国人口死亡的
主要原因 ,引起医学界的普遍关注。豨签草是中医科
常用草药，首载于《新修本草》，具有化瘀消肿、清热解
毒等功效，常用于治疗血瘀证。本研究选用豨签草抗
血栓活性组分腺梗豨莶ⅡA作为研究对象[1]，通过检
测HO-1活性，探讨其抗血栓机制，以期为预防深静
脉血栓形成提供一种新的思路。
1 材料
1.1 药品和试剂 血晶素购自美国Sigma公司、
NADPH购自Roche公司、余试剂为国产分析纯试剂。
1.2 仪器和器材 YLS-14B小动物血栓生成仪
(济南益延科技发展有限公司)；ES，2100电子天平(上
海天平仪器厂)；常用外科手术器械。
1.3 豨签草抗血栓组分 取腺梗豨莶草，用
70%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收乙醇，
总提取物经乙醇乙酯，洗脱，再经活性炭脱色得到豨
莶草抗血栓活性组分(腺梗豨莶ⅡA部分，简称ⅡA)，
得率为0.63%。以上由上海中医药大学中药研究所 c
侴桂新研究员提供。
1.4 实验动物 SD雄性大鼠，平均体重 250~
300 g (广东医学院实验动物中心提供)，动物正常光
照，自由饮食，适应性喂养 1周，室温控制在 18℃~
22℃。
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2 实验方法
2.1 动物分组及模型建立 将60只SD雄性大鼠
随机分成正常对照组、模型对照组、腺梗豨莶 IIA低剂
量组(80 mg/kg)、腺梗豨莶 IIA高剂量组(160 mg/kg)，
同时设两种阳性对照组：阿司匹林组（200 mg/kg）、肝
素组（400 U/kg）。每组 10只动物。正常对照组及模
型对照组给予等容量生理盐水。腺梗豨莶ⅡA高剂
量、低剂量组、阿司匹林组分别给予灌胃，肝素组则给
予腹腔注射，均于晨起一次性给药，1次/d，连续 7 d。
第8天行股静脉造栓。大鼠禁食8 h，自由饮水，称重
后10%水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉动物，待麻
醉充分后动物仰卧位固定手术操作台上；在一侧股区
(左侧)剃毛，碘伏皮肤消毒，按照文献方法[2]，取股内侧
纵向切口，剪开皮肤、皮下筋膜，显露股动、静脉。分
别游离动、静脉主干长约1.5 cm，以6-0尼龙缝线于股
静脉近心端处不全结扎，环形缩窄静脉管腔1/2限流，
并将股动脉牵向外侧。然后立即将分离好的股静脉
置于YLS-14B小动物血栓生成仪的探测接头内，启动
血栓生成仪，用恒流直流电(1.5 mA)持续刺激 5 min，
缝合腹膜。通过减慢血液流速、损伤血管内皮建立深
静脉血栓形成动物模型。动物模型建立情况：60只受
试大鼠中，麻醉过量死亡1只，手术中损伤股动脉致出
血性休克死亡2只，其他57只受试大鼠造模成功。
2.2 血栓栓子重量的检测 造模 6 h后重新打
开大鼠腹腔，在结扎线下方 2 cm处用止血钳夹闭血
管，纵向剪开股静脉管腔，用滤纸条仔细吸去血管内
血液并观察有无血栓形成。若已形成血栓，则小心取
出，立即称质量为血栓湿量。将该段管腔内的血液吸
尽，然后纵行剪开管腔，将血栓取出，然后滤去表面浮
血称湿重，再置60℃干燥箱烤2 h，冷却后称干重。
2.3 HO-1活性测定 根据HO-1降解血红素生
成胆红素和CO原理，以样品反应物中胆红素生成量
代表HO-1活性。血清20 μl中加入2 mmol/L血晶素
40 μl、4.5 mmol/L还原型辅酶Ⅱ(NADPH) 40 μl，同一
只健康豚鼠的肝组织匀浆上清液20 μl (作为胆绿素还
原酶的来源)、0.1 mol/L的KH2PO4缓冲液(pH 7.4) 1.8
ml，避光置37℃、10 min，将反应物棕色小瓶置于冰上
终止反应。不含NADPH的样品作空白对照，样品与
空白均做双份，在分光光度计上用 464 nm和 530 nm
双波长测定胆红素生成量(胆红素摩尔吸光系数：
0.025 nmol/cm)，以每小时每升血清生成胆红素量
[nmol/(h·L)]为单位。
2.4 统计学处理 计量资料采用平均数±标准
差(x-±s)表示，采用SPSS13.00软件系统进行方差分析
处理，两两比较采用LSD-t检验。
3 结 果
腺梗豨莶ⅡA组可减轻大鼠静脉血栓的湿重和
干重，呈剂量依赖关系，随着剂量增大，血栓湿重和干
重减轻更加明显，说明梗豨莶ⅡA具有抗静脉血栓形
成。各组HO-1活性水平比正常组升高，提示HO-1
参与了血栓形成的发病过程。腺梗豨莶ⅡA高剂量
组、腺梗豨莶ⅡA低剂量组与肝素组、阿司匹林组、模
型对照组比较，活性水平明显升高(P<0.01)，表明腺
梗豨莶ⅡA能诱导HO-1表达，见表1和表2。
4 讨 论
4.1 腺梗豨莶ⅡA对大鼠静脉血栓形成的影响 血
栓按照发生的部位分为静脉血栓和动脉血栓。Vir-
chow理论认为静脉血栓形成主要由以下3个因素引
起：静脉血流迟缓，使血液中的细胞成分粘附于血管
壁；静脉内膜损伤，使管壁粗糙，利于血小板、纤维蛋
白凝集；血液高凝状态[3]。本实验采用环形缩窄下肢
股静脉管腔1/2限流，直流电持续电击损伤法造下肢
深静脉血栓模型，以血栓湿重和干重的变化反映药物
的抗血栓作用，较好的模拟了血栓形成的高危因素。
4.2 腺梗豨莶ⅡA对血红素氧合酶-1活性的影
响 血红素氧合酶(Heme oxygenase，HO)是一种血红
素降解的催化酶，是热休克蛋白家族中的一个成员，
在NADPH和细胞色素 P-450还原酶及分子氧作用
下，可分解血红素生成等摩尔数的胆红素、一氧化碳
和铁。HO在体内有 HO-1、HO-2、HO-3三种同工
酶，分别由不同基因编码[4]。近来发现，HO-1与及酶
解产物胆红素、CO共同发挥着抗炎、抗氧化、抗增生、
抑制细胞凋亡、改善组织微循环等作用 [5]。平时在
HO-1大多数组织内呈低水平表达，然而其容易被多
表1 各组大鼠血栓重量比较(x-±s)
组别
模型对照组
肝素组
阿司匹林组
腺梗豨莶ⅡA低剂量组
腺梗豨莶ⅡA高剂量组
例数(只)
8
10
9
10
10
湿重(mg)
5.94±1.30
3.84±0.64▲
3.75±0.55▲
4.12±1.29▲
2.20±0.73▲
干重(mg)
1.96±0.42
1.29±0.20▲
1.27±0.18▲
1.36±0.43▲
0.72±0.25▲
注：与模型对照组比较，▲P<0.01。
表2 各组大鼠HO-l活性比较(x-±s)
组别
正常对照组
模型对照组
肝素组
阿司匹林组
腺梗豨莶ⅡA低剂量组
腺梗豨莶ⅡA高剂量组
例数(只)
10
8
10
9
10
10
HO-l活性[nmol/(h·L)]
1.29±0.22
2.29±0.25▲
2.73±0.48▲**
2.77±0.41▲**
5.86±0.63▲**
7.96±0.31▲**
注：与正常对照组比较，▲P <0.01，与模型对照组比较**▲P <0.01。
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HAINAN MEDICAL JOURNAL 《海南医学》2011年第22卷第21期Vol.22 No.21 November 2011
种刺激诱导，这些刺激都有引起氧化应激的特点。这
些刺激包括：细胞因子、紫外线、血红素、低氧血症、热
休克、内毒素、过氧化氢、重金属等，因此可以减轻细
胞损伤、脂质过氧化及蛋白质氧化，减轻血管紧张素
Ⅱ引起的内皮细胞损伤，对血管损伤的修复有潜在保
护作用。国外学者用三氯化铁作表面灌注以诱导小
鼠的微血管血栓形成，观察用血红素诱导HO-1表达
对该过程的影响，结果发现HO-1表达的增加使微血
管中的血栓形成明显延迟，并认为HO-1的这种抗血
栓的作用机制可能是其催化的代谢产物CO和胆红素
共同调节 P-选择素对血管内皮细胞作用的结果 [6]。
Tracz等 [7]敲除小鼠HO-1基因后，血栓形成速度加
快，血管壁炎症加重，可能是其基因缺失导致核转录
因子激活，上调了组织因子、选择素及炎性因子，基质
金属蛋白酶-9引起。
综上所述，腺梗豨莶ⅡA能诱导HO-1表达，保护
血管内皮细胞功能，从而起到抗血栓的作用。
参考文献
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sis [J]. Am J Pathol, 2008, 173(6): 1882-1890.
(收稿日期：2011-06-10)
生长抑素联合应用黄芪对裸鼠结肠移植瘤的影响
樊占兵
(滦县人民医院普外一科，河北 滦县 063700)
【摘要】 目的 探讨生长抑素联合应用黄芪对裸鼠结肠原位移植瘤生长和转移的作用及其作用机制。
方法 建立裸鼠结肠原位移植瘤模型80个，随机分为生长抑素联合黄芪组、生长抑素组、黄芪组、生理盐水组，每组
20只，分别腹腔注射对应药物。处死实验裸鼠后测量瘤体体积并称重，计算各组的抑瘤率和相对肿瘤增值率，比较
各组的肝、肺、腹膜转移率和腹水发生率。结果 生长抑素联合黄芪组、生长抑素组、黄芪组、生理盐水组的移植瘤
瘤体积分别为(1 061±165) mm3、(1 361±251)mm3、(1 392±326) mm3、(1 698±435) mm3，肝、肺或腹膜转移率分别为
10%、35%、40%、90%，腹水发生率分别为10%、40%、34%、90%。生长抑素联合黄芪组、生长抑素组、黄芪组的抑瘤
率分别为(89.34±3.45)%、(60.31±6.81）%、(61.52+5.21)%；相对肿瘤增殖率分别为(25.62±6.94)%、(53.61±12.36)%、
(63.95±15.92)%。生长抑素联合黄芪组与生长抑素组、黄芪组的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 生长抑素
联合应用黄芪比单独应用生长抑素或黄芪更能显著抑制裸鼠结肠原位移植瘤的生长和转移。
【关键词】 生长抑素；黄芪；裸鼠结肠原位移植瘤
【中图分类号】 R-332 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350（2011）21—017—03
Effect of somatostatin combined with astragalus on the in situ transplantation model of colorectal carcinoma in
nude mice. FAN Zhan-bing. The First Department of General Surgery, The peoples Hospital of Luan County, Luanxian
063700, Hebei, CHINA
【Abstract】 Objective To evaluate the effect of somatostatin combined with astragalus on the in situ transplanta-
tion model of colorectal carcinoma in nude mice. Methods Eighty orthotopic colon tumor model in nude mice were es-
tablished and randomly divided into four groups: group A (intraperitoneal injection with somatostatin combined with as-
tragalus, n=20), group B (intraperitoneal injection with somatostatin singly, n=20), group C (intraperitoneal injection
with astragalus singly, n=20), group D (intraperitoneal injection with saline, n=20). All the mices were killed and then
measured for volume and weight of the tumor. The tumor inhibition rate, the relative tumor proliferation rate, the liver,
作者简介：樊占兵(1972—)，男，河北省滦县人，主治医师，本科。
·实验研究·
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