全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(3)∶303 ～ 305
基金项目:四川省公益性科研院所基本科研业务专项(2013 － 12)
作者简介:高媛(1989—) ，正攻读药剂学专业的硕士学位。Email:1019658254@ qq． com
* 通信作者(Corrsepondent author) ，Email:chaoqun_xu@ sina． com
马甲子叶提取物的抗肿瘤活性研究
高 媛1，2，宋联强1，2，樊 梅1，2，袁志翔2，余 悦2，徐超群2*
(1．成都中医药大学，四川 成都 610075;2．四川省中医药科学院，四川 成都 610041)
摘要:目的 研究马甲子叶提取物的体内外抗肿瘤活性。方法 采用系统溶剂萃取法萃取马甲子叶醇提物，采用 MTT 法分
别检测马甲子叶水提物、醇提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位对人肝癌 HepG － 2、人胃癌 MGC － 803、人宫颈癌
Hela细胞的体外抗肿瘤活性;考察马甲子叶乙酸乙酯部位对 S180荷瘤小鼠的体内抗肿瘤活性。结果 马甲子乙酸乙酯部位对
3 种肿瘤细胞均有明显抑制作用，呈一定量效关系，IC50分别为 23． 68、24． 91、75． 32 μg·mL
－1;乙醇提取物和石油醚部位对 3 种
肿瘤细胞均有一定抑制作用;正丁醇部位和水提物的抑制作用不明显。乙酸乙酯部位对 S180荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用明
显，中剂量的抑瘤效果与环磷酰胺的相当，抑瘤率达 49． 38%。结论 马甲子叶乙酸乙酯部位的抗肿瘤活性最强。
关键词:马甲子叶;提取物;抗肿瘤活性;乙酸乙酯部位;HepG － 2 细胞;MGC －803 细胞;Hela细胞;S180荷瘤小鼠
中图分类号:Ｒ96 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)03 － 0303 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 03． 013
Anti － tumor activity of the extracts from the leaves of Paliurus ramosissimus
GAO Yuan1，2，SONG Lian － qiang1，2，FAN Mei1，2，YUAN Zhi － xiang2，YU Yue2，XU Chao － qun2*
(1． Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，610075 P． Ｒ． China;2． Sichuan Academy of Chinese
Medicine Sciences，Chengdu，Sichuan，610041 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To study the anti － tumor effect of the extracts from the leaves of Paliurus ramosissimus in vitro and in vivo．
METHODS The leaves of P． ramosissimus were extracted by systematic solvents． Combined with the MTT method，the inhibitory
effect of these extracts in vitro，including water extract，ethanol extract，petroleum ether extract，ethyl acetate extract and n － butyl
alcohol extract，to HepG － 2，MGC －803 and Hela were assayed． The mice bearing S180 were treated with ethyl acetate extract and the
inhibitory rate of tumor in vivo was evaluated． ＲESULTS The ethyl acetate extract showed significant inhibition activity on tumor cells
with dose － effect relation． IC50 values were 23． 68，24． 91 and 75． 32 μg·mL
－1，respectively． The ethanol extract and petroleum ether
extract also exhibited certain inhibition activity． No obvious inhibition activities were observed in water extract and n － butyl alcohol
extract． Ethyl acetate extract inhibited the growth of solid tumors of the mice bearing S180 obviously． The inhibitory rate of middle dose
group was 49． 38%，and it has the same efficacy as Cytoxan． CONCLUSION The ethyl acetate extract of P． ramosissimus leaves
showed the obvious anti － tumor effect．
Key words:Leaves of P． ramosissimus;Extracts;Anti － tumor effect;Ethyl acetate extract;HepG － 2 cell;MGC － 803 cell;Hela cell;
Mice bearing S180
CLC number:Ｒ96 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2015)03 － 0303 － 03
鼠李科铜钱属马甲子 Paliurus ramosissimus
(Lour．)Poir 又名铁篱笆、铜钱树，在中国长江流域
以南各省均有分布，多生于丘陵林边灌丛中或荒山
草地上。其根、果实、叶均供药用，具解热消肿、活血
止痛、化淤止淤等作用［1］。马甲子醇提物具镇咳祛
痰的功效［2］，马甲子叶甲醇提取物具抗幽门螺旋杆
菌的作用［3］。目前对马甲子的研究主要集中在其
根、茎、果实的化学成分方面，未见到有关马甲子叶
抗肿瘤活性的报道。现对马甲子叶的不同提取部位
进行体内外抗肿瘤活性研究并筛选活性部位，为深
入研究马甲子的药理活性奠定基础。
1 实验部分
1． 1 仪器、试药、细胞与动物
Forma系列 CO2 培养箱(日本 Sanyo) ;550 型酶
联免疫检测仪(美国 Bio － Ｒad)。ＲPMI1640 培养
基、胎牛血清(FBS) (美国 Hyclone) ;3 －(4，5 －二
甲基噻唑 － 2)－ 2，5 －二苯基四氮唑溴盐(MTT)、
青霉素、链霉素(美国 Amresco) ;胰蛋白酶(美国
Gibco) ;环磷酰胺(CTX，江苏恒瑞医药股份有限公
司) ;马甲子叶于 2012 年 6 月采自四川省牧马山，鉴
定为马甲子 P． ramosissimus 的鲜叶，置 4 ℃冰箱中
保存;其余试剂为分析纯。人肝癌 HepG －2、人胃癌
MGC －803、人宫颈癌 Hela细胞(华西药学院张志荣
教授课题组惠赠) ;小鼠 S180肉瘤腹水型细胞株为本
实验室定期腹腔接种传代保种。清洁级昆明小鼠
(四川省中医药科学院 SPF实验动物中心)。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 马甲子叶提取物的制备 称取 500 g 马甲
子鲜叶，用 10 倍量 95%乙醇浸提 3 d，过滤，减压浓
缩，浓缩液冷冻干燥得马甲子叶醇提物;药渣用水浸
提 3 d，过滤，离心，将上清液冷冻干燥得马甲子叶水
提物，置 4 ℃冰箱中保存。取适量马甲子叶醇提物
粉末，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃
取并浓缩，分别得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位。
1． 2． 2 细胞存活率的测定［4］ 取马甲子叶醇提物
和各萃取部位用异丙醇溶解，水提物用磷酸盐缓冲
液(PBS)溶解，离心，用 0． 22 μm 微孔滤膜过滤除
菌，用培养基稀释至所需浓度。按文献［5］复苏人肝
癌 HepG －2、人胃癌 MGC － 803、宫颈癌 Hela 细胞，
常规培养。取对数生长期的细胞制成细胞悬液，接
种于 96 孔板中，每孔 100 μL。培养 24 h 后小心吸
出原培养液，实验组加含有不同浓度马甲子叶各提
取物的培养基，对照组加 ＲPMI1640 培养基(异丙醇
含量≤1%) ;阳性组加入 5 － Fu 注射液 25 μg·
mL －1，每组设 5 个复孔，每孔中总液量为 200 μL，分
别置 37 ℃、5% CO2 培养箱中培养 48 h 后，加入 20
μL MTT溶液，继续培养 4 h，弃上清液，每孔中加入
DMSO 150 μL，振荡 5 min，于 490 nm 处测定吸光
度，重复 3 次，计算细胞抑制率。马甲子叶水提物
0． 05 ～ 5 mg·mL －1对 HepG － 2、MGC － 803、Hela 肿
瘤细胞的体外增殖均无抑制作用(表 1)。由图 1 可
见:马甲子叶醇提物对 HepG － 2、MGC － 803、Hela
细胞的体外增殖均有较强的抑制作用，IC50分别为
96． 0、90． 7、90． 0 μg·mL －1。醇提物不同萃取部位
在相同浓度下对 3 种细胞体外增殖的抑制作用不
同。乙酸乙酯部位的活性最强，IC50分别为 23． 68、
24． 91、75． 32 μg·mL －1;其次是石油醚部位，IC50分
别为 235． 4、160． 3、210． 1 μg·mL －1;正丁醇部位几
乎无抑制作用，仅最高浓度 0． 4 mg·mL －1时对 Hela
细胞有微弱抑制作用。说明抑制肿瘤细胞增殖的有
效成分可能在乙酸乙酯中等极性部位中，且抑制作
用呈量效关系。
表 1 马甲子叶水提物对 3 种肿瘤细胞株体外增殖的抑制作用(珔x ±
s，n =5)
Table 1 Effects of the water extract from the leaves of P． ramosis-
simus on the inhibition of HepG －2，MGC －803 and Hela
cells(珔x ± s，n =5)
Groups Dose /mg·mL －1
Inhibitory rate /%
HepG － 2 MGC － 803 Hela
5 － Fu 0． 025 71． 52 ± 0． 85 70． 44 ± 0． 46 66． 16 ± 0． 7
0． 05 103． 54 ± 1． 22 116． 22 ± 0． 82 119． 61 ± 1． 21
Water extract 0． 25 109． 88 ± 0． 93 115． 93 ± 0． 78 109． 83 ± 0． 98
0． 5 102． 50 ± 0． 96 102． 5 ± 1． 45 100． 74 ± 0． 79
2． 5 107． 26 ± 1． 45 102． 15 ± 1． 32 10284 ± 1． 32
5 109． 19 ± 1． 04 107． 85 ± 0． 94 105． 35 ± 1． 3
图 1 马甲子叶醇提物和石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位对 HepG －2(A)、MGC －803(B)、Hela(C)细胞的体外抑制作用(n =5)
Figure 1 Effects of ethanol extract，petroleum ether extract，ethyl acetate extract and n － butyl alcohol extract from the leaves of P． ramosissi-
mus on the inhibition of HepG －2 (A)，MGC －803 (B)and Hela (C)cells(n =5)
1． 2． 3 乙酸乙酯部位的体内抗肿瘤活性测定［6］
根据体外肿瘤细胞筛选结果，选择抑瘤效果最强的
马甲子叶乙酸乙酯部位对荷 S180小鼠进行体内抗肿
瘤实验。选取接种 S180肉瘤细胞 8 d 后生长良好的
小鼠，于颈椎脱臼处死，用 75%酒精浸泡消毒后置
无菌操作台上，抽取腹水，用无菌生理盐水(1∶4)
稀释，配制成瘤细胞悬液 1 × 107·mL －1，经右腋皮下
接种 0． 2 mL，建立移植性荷瘤小鼠模型。将 60 只
接种小鼠按体重随机均分为模型组、阳性(CTX 20
mg·kg －1)组、乙酸乙酯部位低、中、高剂量(0． 4、
0. 8、1． 6 g·kg －1)组。造模 2 h 后，模型组和给药组
分别 ig给予蒸馏水和乙酸乙酯部位提取物，qd，连
续 14 d;阳性组 ip CTX，隔日 1 次，共 7 次。末次给
药 24 h后于颈椎脱臼处死小鼠，剥离瘤块，称重，并
计算抑瘤率(表 2)。马甲子叶乙酸乙酯部位低、中、
高剂量均可抑制 S180在小鼠体内的生长。中剂量的
抑瘤效果与 CTX的相近，抑瘤率达 49． 38%，与模型
组的比较均有显著性差异，说明马甲子叶乙酸乙酯
403 华 西 药 学 杂 志 第 30 卷
华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(3)∶305 ～ 307
部位具较好的体内抗肿瘤活性。
表 2 乙酸乙酯部位对小鼠 S180实体瘤生长的影响(珔x ± s，n =12)
Table 2 Effects on S180 solid tumor growth in the mice by ethyl ac-
etate extract(珔x ± s，n =12)
Groups Dose /g·kg － 1 Tumor weight /g Inhibitory rate /%
Model － 2． 46 ± 0． 94 －
CTX 0． 02 1． 27 ± 0． 77＊＊ 48． 31
Ethyl acetate extract 0． 4 1． 66 ± 0． 96 32． 77
0． 8 1． 25 ± 1． 10＊＊ 49． 38
1． 6 1． 35 ± 0． 84* 45． 22
Compared with model group:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01
1． 2． 4 统计学处理 用 SPSS17． 0 软件进行统计分
析。数据用 珋x ± s 表示，各组间均数比较采用单因素
方差分析，P ＜ 0. 05 有统计学意义。
2 讨论
马甲子叶不同提取物能明显抑制 HepG － 2、
MGC －803、Hela细胞的体外增殖，马甲子叶水提物
基本无抗肿瘤活性，乙酸乙酯部位对 3 种肿瘤细胞
均具显著抗肿瘤活性，抑瘤效果呈明显浓度依赖性，
体内实验也证实了抗肿瘤效果。
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收稿日期:2014 － 05 － 04
作者简介:曾明辉(1964—) ，男，主任药师，从事医院药学工作。Email:zengyaoshi168@ 163． com
5 种中药制剂对急性肺损伤小鼠的保护作用
曾明辉1，谭正怀2
(1．四川省邛崃市医疗中心医院药学部，四川 邛崃 611530;2．四川省中医药科学院，四川 成都 610041)
摘要:目的 研究 5 种中药制剂对急性肺损伤小鼠的保护作用。方法 以地塞米松磷酸钠注射液为阳性药，研究双黄连冻干
粉针、鱼腥草注射液、注射用灯盏花素、苦参素注射液、注射用甘草酸二胺等 5 种中药制剂对油酸致小鼠急性肺损伤的保护作
用;检测各组小鼠的肺脏器指数，肺组织中 GSH、MDA的水平，并观察肺组织的病理变化。结果 与模型组比较，双黄连冻干
粉针可显著降低小鼠的肺脏器指数;鱼腥草注射液可对抗油酸诱导小鼠肺损伤的作用，显著降低肺组织中的 MDA水平;两者
均可显著改善小鼠的肺组织结构;注射用灯盏花素有降低小鼠肺脏器指数的作用，但与模型组比较无统计学差异。结论 双
黄连冻干粉针及鱼腥草注射液对油酸诱导的小鼠肺损伤具一定的保护作用，这可能与其抗氧化作用有关。
关键词:急性肺损伤;双黄连;鱼腥草;灯盏花素;苦参素;甘草酸二胺;中药制剂;油酸;抗氧化
中图分类号:Ｒ96 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)03 － 0305 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 03． 014
Protective effects of five kinds of traditional Chinese medicine preparation on the acute lung
injury mice
ZENG Ming － hui1，TAN Zheng － huai2
(1． Deptment of Pharmacy of Qionglai Municipal Medical Center Hospital of Sichuan Province，Qionglai，Sichuan，611530 P． Ｒ． China;
2． Sichuan Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，610041 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To study the protective effects of five kinds of traditional Chinese medicine preparation on the acute lung
injury mice．METHODS The protection effects of Shuanghuanglian lyophilized powder，Heartleaf houttuynia herb injection，Breviscap-
ine for injection，Kushenin for injection and Diammonium glycyrrhizinate for injection on the acute lung injury mice induced by oleic
acid were studied． Dexamethasone was used as the positive control． The lung organ index，GSH and MDA level in the lung tissue were
detected and the histopathological changes of lung tissue was observed． ＲESULTS Compared with the model group，Shuanghuanglian