全 文 ：第 30 卷 第 7 期
2 0 1 2 年 7 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 30 No． 7
Jul． 2 0 1 2
中
华
中
医
药
1610
学
刊
凤尾草提取物对不同肿瘤细胞生长抑制作用研究
陈岩1，杨丽杰1，黄智坤1，王智勇2
(1．哈尔滨医科大学第一附属医院药学部，黑龙江 哈尔滨 150001;
2．哈尔滨医科大学第二附属医院静脉药物配制中心，黑龙江 哈尔滨 150086)
摘 要:目的:研究凤尾草提取物对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法及 Trypan Blue拒染法
检测凤尾草提取物对体外培养的人肝癌细胞株 BLE － 7402、小鼠黑色素瘤细胞株 B16 － BL6、人白血病细胞株 HL
－ 60 细胞增殖的抑制作用。结果:凤尾草提取物在 5 ～ 80 μg·mL －1剂量的范围内对上述 3 种细胞株均有明显的
抑制作用。结论:凤尾草提取物在体外对多种肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用。
关键词:凤尾草;提取物;抗肿瘤
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)07 － 1610 － 02
Study on the Inhibition of Pteris multifida Extracts on the
Growth of Different Tumor
CHEN Yan1，YANG Li-jie1，HUANG Zhi-kun1，WANG Zhi-yong2
(1． Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University，Harbin 150001，Heilongjiang，China;
2． Center of Intravenous Pharmacy Admixture Services，Second Affiliated Hospital of
Harbin Medical University，Harbin 150086，Heilongjiang，China)
Abstract:Objective:To research the inhibition of Pteris multifida extracts on the growth of different tumor cell in
vitro． Methods:This experiment was adopted with MTT assay and Trypan Blue exclusion assay for the inhibition of Pteris
multifida extracts on the growth of BLE － 7402，B16 － BL6 and HL － 60． Results:The effects of Pteris multifida extracts
on the growth of all tumor cells were obviously inhibited by dose range of 5 ～ 80μg·mL － 1． Conclusion:The results
show that Pteris multifida extracts can obviously exert an effective influence on cytotoxicity from a variety of the tumor
cells in vitro．
Key words:Pteris multifida;extract;anti － tumor
收稿日期:2012 － 02 － 04
基金项目:黑龙江省卫生厅资助项目(2009 － 088)
作者简介:陈岩(1980 －) ，女，山东郓城人，主管药师，硕士，研究方
向:中药质量评价、药理学。
凤尾草(Pteris multifida Poi r)为凤尾属蕨类植物，作
为一种中草药使用已经有很久的历史，始载于唐朝陈藏品
的《本草拾遗》。现代药理研究表明凤尾草具有清热利湿、
抗菌消炎、消肿止痛的作用，其根茎用于治疗糖尿病、抗肿
瘤［1］。我国常把凤尾草与其他中草药制成配方，治疗肝炎
和各种癌症如食管癌、直肠癌和妇科肿瘤等［2］，但其单味
药的抗肿瘤作用及其作用机制尚不清楚。本实验对凤尾草
提取物的提取、体外抗肿瘤作用的初步筛选及对不同肿瘤
细胞增殖的抑制作用的进行了研究，为下一步探讨凤尾草
抗肿瘤作用机制研究提供科学依据。
1 材 料
1． 1 凤尾草提取物 取凤尾草原药材，用 95%乙醇回流
提取 3 次，过滤，浓缩药液，弃去药渣，药液浓缩成浸膏后，
用乙酸乙酯反复进行超声提取，得到提取物的浓缩部分，备
用。
1． 2 实验细胞株 人肝癌细胞株 BLE － 7402、小鼠黑色素
瘤细胞株 B16 － BL6、人白血病细胞株 HL － 60，由哈尔滨医
科大学附属第一医院中心实验室提供。
1． 3 试剂 MTT(四甲基噻唑蓝)、DMSO(二甲基亚砜)购
自 Sigma 公司;超级无支原体胚胎牛血清购自杭州四季青
生物材料有限公司;RPMI1640 培养基购自美国 Hyclone 公
司;Trypsin(胰蛋白酶)购自北京天象人公司;5 － Fu注射液
(10 mL /支)购自上海旭东海普药业有限公司。其余试剂
均为国产分析纯。
2 方 法
2． 1 细胞培养 BLE － 7402、B16 － BL6、HL － 60 细胞培养
于含 10 % 胎牛血清，100 kU·L － 1 青霉素和 100 mg·L
－ 1 链霉素的 RPM I － 1640 培养液中，37℃ 5% CO2 饱和
湿度细胞培养箱培养，取对数生长期细胞用于实验。其中，
BLE － 7402、B16 － BL6 细胞用 0． 25%胰蛋白酶消化。
2． 2 MTT法 取对数生长期的 BLE － 7402、B16 － BL6 细
胞，在 96 孔培养板中每孔加入 20 μL 细胞液(含有 5000
个 /mL细胞) ，置 37℃ 5 %二氧化碳培养箱中培养 24 h，实
0161
DOI：10.13193/j.archtcm.2012.07.172.cheny.045
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CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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验组分别加入凤尾草提取物终浓度为 5、20、80 μg·mL －1
的培养液，同时设置空白及 5 － Fu 阳性对照孔，对照组加
入等浓度体积溶液的培养液，每组 4 孔，置 37℃ 5%二氧化
碳培养箱培养 24 h后，弃去上清液，加入 200 μL /孔新鲜配
制的含 0． 2 mg·mL －1MTT 的无血清培养液。37℃继续培
养 4h，弃上清液，加入 200 μL DMSO，振荡 15min 后，立即
在酶标仪主波长 570nm，参比波长 630nm处测定 OD值，比
色以空白孔调零，按下式计算药物对肿瘤细胞增殖的抑制
率。
肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1 － 实验组平均 OD值 /
对照组平均 OD值)× 100%
2． 3 Trypan B lue拒染法 选取对数生长期的 HL － 60 细
胞，在 24 孔培养板中每孔加入 450 μL细胞液，使每孔的细
胞数为 2 × 105 个，置 37℃ 5 %二氧化碳培养箱中培养 24
h，实验组分别加入凤尾草提取物终浓度为 5 、20、80 μg·
mL －1的培养液，同时设置空白及 5 － Fu 阳性对照孔，对照
组加入等浓度体积溶液的培养液，每组 4 孔，置 37℃ 5%二
氧化碳培养箱培养 24 h 后每孔加入 50 μL 0． 4% T rypan
Blue溶液染色。镜下计数，检测活细胞数，按下列公式计算
药物对细胞增殖的抑制率。
肿瘤细胞增殖抑制率(%)=(1 －实验组平均活细胞
数 /对照组平均活细胞数)× 100%
2． 4 统计学处理 以 SPSS 10． 0 统计软件分析，两组间的
均数比较采用 t检验。
3 结 果
3． 1 凤尾草提取物对人肝癌 BEL － 7402 细胞增殖的抑制
作用 凤尾草提取物作用于该细胞 24 h，对其增殖有明显
的抑制作用，且呈剂量依赖关系。结果见表 1。
表 1 凤尾草提取物对 BEL － 7402 细胞增殖的抑制作用
组别 平均 OD值 抑制率(%)
空白组 0． 803 －
5 － Fu 10 μg·mL －1 0． 551＊＊ 31． 38
提取物 5 μg·mL －1 0． 691* 13． 95
提取物 20 μg·mL －1 0． 548＊＊ 31． 76
提取物 80 μg·mL －1 0． 412＊＊ 48． 69
注:与空白组比较，＊＊ P ＜ 0． 001。
3． 2 凤尾草提取物对小鼠黑色素瘤细胞株 B16 － BL6 增
殖的抑制作用 凤尾草提取物作用于该细胞 24 h，对其增
殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖关系。结果见表 2。
表 2 凤尾草提取物对 B16 － BL6 细胞增殖的抑制作用
组别 平均 OD值 抑制率(%)
空白组 0． 782 －
5 － Fu 10 μg·mL －1 0． 523＊＊ 33． 12
提取物 5 μg·mL －1 0． 677* 13． 43
提取物 20 μg·mL －1 0． 514＊＊ 34． 27
提取物 80 μg·mL －1 0． 395＊＊ 49． 49
注:与空白组比较，＊＊ P ＜ 0． 001。
3． 3 凤尾草提取物对人白血病 HL － 60 细胞增殖的抑制
作用 凤尾草提取物作用于该细胞 24 h，能明显地抑制其
增殖，且呈剂量依赖关系。与阳性对照药 5 － Fu相比，抑制
作用更为明显。说明凤尾草提取物对某些药物敏感的肿瘤
细胞有明显的抑制作用。结果见表 3。
表 3 凤尾草提取物对 BEL － 7402 细胞生长的抑制作用
组别 平均活细胞数(× 104) 抑制率(%)
空白组 72． 31 ± 13． 53 －
5 － Fu 10 μg·mL －1 50． 10 ± 4． 87＊＊ 20． 71
提取物 5 μg·mL －1 48． 56 ± 5． 26＊＊ 32． 84
提取物 20 μg·mL －1 32． 45 ± 4． 77＊＊ 55． 12
提取物 80 μg·mL －1 21． 13 ± 4． 28＊＊ 70． 78
注:与空白组比较，＊＊ P ＜ 0． 001。
4 讨 论
目前，已开发应用于临床的抗肿瘤药物大多数属于化
学合成药或微生物代谢产物，且多具有特异选择性差、不良
反应大、效果不理想等不足。近年来，从天然植物中寻找新
的抗肿瘤药物己成为新药研究的主要发展方向之一。而传
统中草药因其药用历史悠久、作用原理独特、效果明显，有
别于上述两类药物，因此从中草药中，提取高效低毒的抗肿
瘤药物已成为天然药物研究与开发的重要方向。
从本次实验结果可以看出，凤尾草乙酸乙酯提取物对
BLE － 7402、B16 － BL6、HL － 60 等 3 种肿瘤细胞增殖均有
明显的抑制作用，且抑制率随着药物浓度增加而相应增高，
在提取物浓度为 80 μg·mL －1时，抑制作用均优于阳性对
照药 5 － Fu。其中，对人白血病细胞 HL － 60 细胞增殖的抑
制作用尤为显著，说明该凤尾草乙酸乙酯提取物含有值得
深入研究和有望开发的抗肿瘤活性物质。
参考文献
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草(第二册)
［M］． 上海:上海科学技术出版社，1999．
［2］ 欧莉． 中药凤尾草的研究进展［J］． 中医药导报，2008，14
(3) :
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
92 － 93．
含氨基葡萄糖的营养品勿与
香豆素抗凝齐同用
德国联邦风险评估研究所近日说，一些营养补充剂中
含有氨基葡萄糖，而这一成分可能给服用抗凝药物“香豆
素抗凝齐”的患者带来健康风险，该结论已得到欧洲食品
安全局确认。
一些营养品生产商提出，在营养品中添加氨基葡萄糖
有利于保持关节的灵活性。风险评估研究所则提，氨基葡
萄糖不仅给糖尿病、心血管疾病患者带来潜在风险，对服用
“香豆素抗凝剂”的患者同样具有健康风险。
风险评估研究所主席安德烈亚斯·享泽尔博士说，氨
基葡萄可增强“香豆素抗凝齐”的药理作用，严重时可致不
同脏器出血甚至脑出血，这一结论已经得到欧洲食品安全
局的确认。
氨基葡萄糖是葡萄糖的一个羟基被氨基取代后的化合
物，常被用于骨关节炎治疗，有时也因其药理作用被用于营
养补充齐中。
风险评估研究所说，含有氨基葡萄糖的营养补充剂今
后在德国以及欧盟都将附有各种“健康声明”，含有误导性
说明的营养品将不得销售。
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