全 文 ：第 5卷 第 1 期
年 3 月
生 物 物 理 学 报 Vo l . 5No。
98 9 ACT B AI OP H Y S I C AS IN I C Ahl ar。 1 98 9
某些物理化学因素对竹红菌甲素敏化
的人红细胞膜乙酞胆碱醋
酶的光失活作用的影响
孙继 山 程 龙 生
(中国弓学院生 ’ ;刃物理研究叮 北京
摘 要
本文以人红细咆摸乙酸胆喊醋酶为作用对象 , 研究 了甲素浓度 、 P H 、 温度等因素对甲素致敏
灼酶光失活的影响 , 序计算了不同条件下的酶夫活速率常数 . 甲素与某些光敏化剂 相比 , 有以
下特点 : ( l) 甲素光敏化效率随着 p H降低拓增加 , ( 2 )光强指数 a > 1 , ( 3 ) 甲素 在 4 。。 n m 一6 o on m
没长范围内均有较 大的光放记牛用 . 活性氧清除剂的试验结果表明 , 乙酞胆碱醋酶的光失活主
要是纂线态氧的作用 , 其它活性氧也有一定作用 .
引 言
竹 i-L 菌甲素 ( h y P o e r e l l i n A ) , 以下简称甲素 ( H A )是从竹红菌 ( H }, P o e r e l l a B a m b u s a c
s a 。 。 . ) 中分离出的一种脂溶性花醒类衍生物 , 临床上对某些皮肤疾病有显著疗效 〔 ” 。 安 静
仪 1 , ’ 、 郑建华 〔 3 〕等人的研究表明敏化性质属于需氧的光动力型 , 此外 , 不龙生 l ` ’等还发现
一未知的长寿 命活性物质参与化学反应 , 但到 目前为止 , 尚无人研究甲素对生物膜上的酶
体系的光敏失活及物理化学因素对这种光敏失活的影响 。 本文利用红细胞膜上典型的膜 内
酶一乙酞胆碱酷酶为靶 目标 , 研究了某些条件下甲素对其失活作用 , 然后 , 就甲素的某些
光动力学性质和 反应机理进行了讨论 。
}
材料与方法
一 、 试剂
甲素由云南微生物所提供 , 配成 2 x 1 0 一 3 M的二甲亚飒溶液置冰箱中备用 。
5 , 5 产一二硫代双 〔2一硝基苯甲酸 〕 , 即 5 , 5 产 一 d i t h i o b i s ( 2 一 n i t r o b e n z o n i e a e i d ) ( D T N B )
是 C a r l R o t h公司产品 。 硫代乙酞胆碱 , A e e t 》 r l t h i o e h o l i n e i o d i d e , 1 , 4偶氮 2 , 2 , 2双 环 辛
烷 , 即一, 4一 d i a z a b i e y e l 。 o e t a n e ( D A B C O )是 F l u k a 公司产品 。 N一对氨基苯甲酞基一 L一谷
氨酸 , 即 N 一 ( p 一 a m i n o b e n z o y l ) 一 L 一 g l u t a m a t i e a e i d ( p A B G A ) 是 S i g m a 公司产品 。 牛过氧
化物歧化酶 (牛 s o D ) 10 万单位 /毫克 , 是上海东风试 剂厂产品。
沁 生 卜刀 物 理 学 报 1 98 9平
其余试剂均为国产分析纯试剂 。
二 、 方法
1
. 红细胞膜制 一备 : 按 G ir r o ti 【弓 ;方法使用 rT si 一 H lc 缓冲液制备及按程龙生 ; 4’ 方法使用磷
酸缓冲液制 一备。
2
, 测乙酞胆减醋酶活力 : 依照 lE l e m a n 〔` :方法在 日立 U 一 3 2 0 0紫外分光光 度计上测量 。
3
. 膜蛋白含量按 aL dn a hl 〔下〕方法测定 。
4
. 光照条件 : 使用 自制的卤索灯光源照光装置 , 用 B Y T 一 8 2 0 4 辐射仪测光强。 除特别
i沱明外 . 中心光强为 1 4 0 o w 厂M 匕 . 膜蛋白浓度为 o . s m 刽 n : l , 溶液 中 二 甲 亚讽浓度不超过
工% 。 盛有膜济液烧杯置 一J“冰浴中 , 光照时使用磁力搅 伴 器 不 断 搅 伴 , 不使用任何滤色
片。
单色光照射 : 使用中科院物理 听制作的干涉滤光片 , 中心波长透光率大于 65 % , 半高
宽不超过 1 0 n m 。
三. 甲索荧光偏振度的测量 : 在 日立 一 8 5 。型荧光分光光度计测荧尤强 度 , E 、 = 5汉 n ln ,
E一 6 0 6一 , 按 P = ( ,一 {井`二 ) /(`二 + 一{羚`、 · )计算偏振度 。
结 果
1
.不同浓度甲素对酶活力的影响
庄膜体系中不 加甲索及加甲索并使其终浓吐分 别为 1娜 M , 4娜M时 乙酞胆碱酷酶相对活
力随无照时间的变化如图 ( l) 所示 , 由图 可见 . 当没有甲素时 , 30 分钟的光照和搅动对酶活
0l征
;
5
)
\订` 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 -一二、 二火ō为习咐>闷é。V
日 2 0
孟 1 1
F i g
.
1
.
T h e
5 6 1 几 ( H人 I G`」n孟口 二七二 G n 之孟 m 二
t 1m e e o u r s e
爪 1口
o f t h e F 19
.
2
.
L n一 L n P l o t o f t h e
o n z y m e P h o t o i n a c t i v a t i o n w i t h
H A c o n 。 。 n t r a t i o n a t r 鲜M ( - 一少
4拼 M (一 一 一 、 ; a n d w i t h o u t
f I A (
一
)
。
n a e t i v a t i o a
e n z y ln e v s
·
三a ` “
H A
C O U S t a D t
P h
0 f
0 t o i 一
t h e
e o n e e n t r a t i o n
,
r e
9 r e 、 s i o n l i o e (
- 一
力投有影响 , 另一种对照试验 (未列出数据 )表明 , 2 。户M甲素在黑暗处 对酶 活力也没有影
响 。 蛛而 , 花含 甲索的膜溶液并加光后 , 酶活力随光照时间增加而逐渐下降 。 下降不呈严
格的指数形式 , 但10 分钟内符合的较好 。 因此 , 根据失活百分比在较短的时间间隔内按一
第 1期 某些物理化学因素对竹红菌甲素敏化的人红细胞
膜乙酞胆碱醋酶的光失活作用的影响
级反应动力学公式计算失活速率常数不会带来太大的误差 。
为了研究失活速率与 甲素浓度的关系 , 我们使用四种不 同浓度的甲素 ( 0 . 03 1 , 0 . 1 25 ,
。 . 5 0 。 , 2 . 0 0 。产M ) 。 照射后 , 计算各浓度下的光失活速率常数 , 然后按 k = K 〔H A 〕· 的关系
式取双对数后作图 , 求 出回归直线的斜率 , 即上式中的口值 , 回归直线如图 ( 2) 所示 , 相关
系数 v = 0 . 9 20 , “ 一 0 . 5 2 9 0 。 所以 , 在上述甲素浓度范围内失活速率大致与甲素浓度 的平
方根成正比 , 这个结果与 iG r r o it 【5 ’使用胆红素敏化剂得到的结果相似 。 失活速率不与甲素
浓度成直接正比可能是 由于增加甲素浓度后 , 激发态 甲素通过所谓 “ D一 D ” 机 制 自烨灭水
平增加所致 。
2
. 不同光强的作用
光强调节是通过改变 光源电压实现的 。 为避免 由于电压变化引起卤素灯发光 少价普改变
而带来的复杂因素的影响 , 我们在透镜后面又装了一个与甲素吸收最高峰 (4 70 n m ) 相近
的 , r扣心波长为 4 7 5 n m 的干涉滤光片 。 改变照封时间使各样品的总照光量不变 , (3 60 0 J/
,
。
B l
’
0 0 》
,于“
”
;卜一泞一二厂气二一 百不`
飞 n t e n s 工 t y
F 1 9
.
,
.
L n 一 L n P 10 t
e t i v a t i o n r a t e e o n s t a n t
叹
U I
t h e Ph o t o i n a -
t h e e n z y m e
v s
.
I i g h t i n t e n s i t y
.
H A = 4拜 M , r e g r e s s i o 刀
11 n e (
- - - 一 ) .
F 19
.
4
.
T h e 1 0 9 P 1 0 t o f P h o t o
-
i n a e t i v a t i o n r a t e e o n s t a n t v s
.
P H
.
T h e e o n d i t i o n s a r e
:
2户 M
H A a n d 3 m i
n i l l u m i n a t i o n
(
- - - 一 ) ;
4拜 M H A a n d s m i n i l l u m i n a t i o n
(— ) ;T a b l e l T h e
t h e
e
f f
e e t o f v a r i o u s l i g h t i
n t e n s i t y o n t h e e n z y m e P h
o t o i n a c t i v a t i
o n a t
s a m e e x P o s u r e
.
L i g h t I n t e n : i t y (拜W / e m ’ )
川 u 二 1 n a t i o n T i l n e ( 二 i n )
3
,
0 0 0
R e l。 t i , e 人 c t i v i t r ( M 士 s . D ) (肠 ) 8 9 . 4 6士 3 . 6 5 9 1 . 1 9土 3 . 2 9 1 9 2 . 8 6士 3 . 3 9 3 . 6 0士 2 . 0 1
M Z )
, 计算及绘图方法同上 , 结果见图 (3 ) , 丫 = 0 . 9 9 8 5 , 。 二 1 . 31 27 。 计算出的 a 值大 于常
见的 a = 1的直接正比关系 。 在总照光量不变的条件下 , 酶失活百分比 随光强增加而增加 ,
结果见表 ( 1 ) 。
5 3 生 物 物 理 学 报 1 9 89年
3
.
p H的影晌
因为在 P H >9时 , 甲素的吸收光谱明显改变 〔” , P H < 4 . 5时 , 膜出现酸性沉淀 , 所 以 ,
实验选取 P H范围是 5 . 0一 8 . 5。 图 ( 4) 为失活速率常数的对数对 P H作图 , 实际上就是失活速
率常数对氢离子浓度作图 。 由图 (4 ) 可见 , P H在了 . 。一 8 . 5间 , p H变化对甲素光敏 化 效率没
有多少影响 ,但 PH在 7 . 0以下时 , 降低 p H可使 失活速率急剧增加 , 在整个试验 p H范围内 , 加甲
索但不照射的乙酸胆碱酷酶活力无显著改变 , 结果见表 ( 2 ) : 我们使用 两 个不同的 甲索浓
度和照光时间 , 趋势是一样的。
T a b l e 2
.
T h e e f f e e t s o f P H o n t h e e n z y
a t i o n
.
( T h e a c t i v i t y a t P H = 8
.
5 w a s d e f i n e d
1l l e
a S
a e t i v i t y w i t h H A a n d w i t h o u t i l l u m i n
-
1 0 0 ; 石)
5
. 臼 5 丁 5 8 . 0 8 . 5
昭粼i , . A兮t 1 v i t了士 S D 八 物 ) 9 1 . 亏4二 弓 . 0 吕 3 8 9下 . 丁3sl J 工 6 . O U 9 8 . 14士 4 . S J 1 0 0 . 6二 3 . S J 1 02 0 6士 3 . s u 1 0 3 . 2 3士 1 . 9 1 洲::
4
. 沮度效应
其它条件都一样 , 仅改变照射时膜溶液的温度 , 酶活力与时间的关系如图 ( s a )所示 ,
、
l
`f甲毛r刀
、
、
、
、
l.工Teseùe
l旅上el,五犯ùT3 。 0 nI k
`丈布谈泛、 、 一、 、、 、 从、 、 、
、粉\ ó滋
口UtU月d一心」
口^问>T习OV
N
,
`头 犷尸一一一 , 人杆一一一 7了 ;。一 3
F i g
.
o a
.
T h e e f f e e t s o f t e m P e r
-
a t u r e o n t h
e e n z
y m
e
Ph
o t o i n a
-
c it y a it o n
.
2℃ (一 - - -一一 ) ; 1 5 r
(
- -一 ) ; : s f (一 一 ) ; 3了℃ (一一 ) .
F 19 A r r e n i u s P l o t o f
H A
一 s e n s i t i z e d P h o t o i n a e t i v a t i o n
。 f a e e t y l e h o l i n e s t e r a s e . L i g h t
i n t e n s i t y = 2 0 m w /
e m
2 .
H A= 4群入r
r e g r e , s i o n l i n e (
- - - 一 ) .
另一试验是求出不同温度下的K值 ,然后作 rA r o n in us 图并计算活化能 , 如图 ( s b ) ,此外 , 还
观察了温度对膜 内 甲素运 动 的影响 , 方法是测不同温 度下 甲索偏振度的改变 . 结果见图
( 6 )
, 由图 ( s b )求出的活化能为 2 6 . 3 K J /“ m o l . 此值比氧第一单线态 ( ’ 么 g ) 的 92 . I K J / / m 。 l低
许多 , 所 以 , 从热力学 角度 上 ’ △ g 可 以以一定速率参与酶失活过程 。
5
.
S O D
,
P A B G A和 D A B C O 的保护作用
选用。 : 丁歧化酶 s 0 D , · O H悴灭剂 P A B G A和 ` 0 2烨灭剂 D A B C O加入光照体系 , 上 述物质
对乙酞胆碱酷酶没有毒性 。 考虑到牛 S O D可能在 37 ℃下活力最高 , 实验在 37 ℃下进 行 , 并
第l 林月 某些物理化学因素对竹红菌甲素敏化的人红细咆
膜乙酞胆碱醋酶的光失活作用的影响
5 9
2几 r ol r al z a bil it v. \口飞
2 3
. -胜 u机叭
亡 J
沙l u`T .仁 Oó
2 2
认刹 r,!习OV
2 1
之 毛成票之O
2 D 3 0 石 J
t 户 , p户 , 立 t 亡 r 。
找 、 甲 Z J 亡 _ 几三1几几二n i n a 七 i o n 2呈: 二
F 19
.
6
.
T h
e P o l a r i z a b i l i t y
o f H A b o u n d i n h u m a n e r
-
y t五r o e y t e m e m b r a n e a t d i -
f f
e r e n t t e m P e r a t u r e
.
F 19
.
7
.
T h e P r o t e C t i o n o f t h e e n Z y m
e
f r o m P h o t o i n a c t i v a t i o n i n t h e P r e s e n c e
o f f r o m s e a v e n g e r s
.
A
.
C
o n t r o l ( 3 7 oC ) (
-— ) ; B . Z 0 0 0 U /m 1 S O D ( 5 7 ,C ) ( - - - - 一 ) ; C . C o n t r 。 l(一一一 ) ; D . l m M P A B G A (一 - 一 ) ;
E
.
s m M D A B C O (
- 一一 一 ) : r . 5 0二 M
D A B C O (
一
)
.
设置一 同温度对照 。 上述悴灭剂对乙酞胆酷酶的保护作用如图 (7 )所示 , 这 些 物质对该酶
均有不同程度 的保护作用
在可见光 的主频谱 ( 4 0 0一 6 8 0n m )范围同时做了等光强光谱和等光量子波谱 。 因为实验
设计与严格的作用光谱定义不同 , 我们称其为波长效应 而不用作用光谱这个术语以免引起
误解 。 结果如图 ( s a ) 所示 , 与吸 收 光 谱 ( s b) 相比 , 两个光谱 均 较 甲素 的 最 大 吸收峰
( 4 7 0 n m ) 红移 , 其峰值分别位于 5 5 5 n m和 s l s m m左右 。 但总的来看 , 甲素在 4 4 5一 6 0 0 n m范序1
月右
5 0 0 6毛0
甘 a 、 ’ e : e n g t h
概 4 5 0 5 0 0 5 5 0
U a v e l . n 夕t h
6 0 0 6 5 0 幻功
1 9 8 9年
内均有较大作用 ,
生 物 物 理 学 报
这一点与甲素在上述范围内具有较高的吸收系数一致 。
讨 论
乙酞胆碱酷酶 (E C 3 . 1 . 1 。 7) 是胆碱类神经递质传递中关键酶 。 天然状态下 该 酶 通过
二硫键以二聚体形式位于膜上 , 活性基团在膜 外表面并通过 由20 氨基酸组成的疏水片段插
入膜内 ,
在研究中 , 我们首先注意到甲素对酶光 失活进程不 同于 iG r r o it ` 5 ’ 使用胆红素研究所表
明的那样 以较为严格的指数形式下降 。 我们认为至少有两种因素可使失活过程不符合一级
动力学模式 : 工, 甲素 自氧化成为不具光敏活性的过氧化甲索 〔今 ; , 使有效甲素浓度随时间减
少 , 最终严重偏离准一级反应的条件 。 2 , 甲素是脂溶性物质 , 在 膜 溶 液 中位于膜 的疏水
区 , 在冰浴中因膜的流动性下降及 甲素 自身动能下降 , 甲素运动受到限制 。 因为胆红素 白
敌氧化水平较高 , 而 甲素自敏氧化受到种种限制 〔g ’ , 所以可排除第一个因索。 为了验证第
二种可能性 , 我们改变照射体系温度 , 由图 ( s a )可见 , 升高温度后线性关系明显改善 。 为
了进一步验证 ,我们利用 甲素的自身荧光 ,测其不同温度下的偏振度 。 结果表明 (图 6 ) H A 的
旋转扩散确随温度上升而增加 , 相应地 , 侧 向扩散也必然加快 。 虽然失活不符合严格的一
级动力学模式 , 但短时间或小光强照射仍可用一级公式近似地计算失活速率而不会引起太
太误差 。 正是基于这个理 由 , 我们有关计算 k值的试验都尽量采取短时间和 小光强照射 。
光强指数 a > 1的问题 , 可以这样解释 : 因为膜上酶的失活主要通 过 氛 华 酸氧化 , 侧
链基团交联 , 空间结构改变及磷脂过氧化等方式完成 , 在达到不可逆损伤之前 , 要经历一
个可逆阶段 , 即存在恢复与不可逆损伤的竞争 。 比如琉 自由基重新还 原戊琉鉴 , 受损伤的
磷脂被未损伤的磷脂取代等均属于修复 。 在本实验条件下出现 a > 1 的 结 果可能是 在使用
的光照条件下 , 增加光强大大地削弱了失活的修复过程 。
sP ik
e 〔 ’ 。 ’ 在一篇综述中提到 : 除核黄素外 , 所有敏化剂敏化能力均随 p H上升而增加 ,
然而 , 甲素的行为则与这一规律相反 。 我们的对照试验 (表 2) 表明 , 在 PH S . o 至 8 . 5范围
内 , 酶活力变化仅 10 %左右 。 因此 , 酶结构和磷脂在此 p H范围内不会有太大变化 。 所 以 ,
我们推测 : 甲素在酸性条件下对酶光失活作用增强主要不是由于酶和磷脂的结构变化 , 而
是甲素性质所致 。 甲素是一种蓖酿类物质 〔” , 默基与邻近的经基形成分子内氢键 , 并互相
转换 。 在碱性条件下 , 经基解离 , 共振条件破坏 。 刘景瑶 〔“ ’计算出激发 态 甲素 p K 值为
5
.
76
, 我们的结果是在 PH < 7时 , 失活速率随氢离子浓度线性增加。 显然 , 共振 条件有利
于甲素发挥作用 , 而经基解离则使甲素致敏能力下降 。 王家珍 〔“ 等研究在 P H S至 7范围内 ,
荧光量子产率随 P H下降而下 降 , 这意味着其它途径的能量传递增加 , 这一点与 我 们 的 结
果吻合 。
陈远腾等人 (内部资料 ) 使用未经校正的硅光 电池测得在 4 0 ~ 6 30 n m范围内甲素杀死
革兰氏阳性菌的作用光谱近乎一直线 , 而 D o ub t ’ “ ’使用一种与 甲素结构极为相似的花 醒衍
生物一尾抱素 ( eC r c o s P o r in) 测得杀死烟草培养细胞的作用光谱与该物质吸收 光 i绮相似 。
甲素的结果则是波形相似 , 峰值红移 。 张曼华 `“ ,在研究甲素 自敏氧化时发现 , 当入射光波
长小于 5 1 0n m 时 , 激发态甲素和基态氧生成氧化甲素 , 后者是不具活性的 【` ’ 。 我们的等光
量子光谱峰值红移到 5 1 5n m左右可能是 由于吸收主峰 ( 4 7 0 0 m ) 处甲素可发生 自敏光氧化 ,
准 1期 某些物理化学因素对竹红菌甲素敏尤的 ) 、红细脸
膜 乙酸胆碱醋酶的光失活作用的影呐
降低了 有 效 甲素数量 , 从而使效率下降 。 另外 , 甲素在 4 7 0n m 和 5 4 0 刀 m的吸收属于不同的
电子跃迁态 `川 , 5 1 5n m掺有一定的 54 0 n m跃迁态而使峰值红移也是有可能的 。 关于等光强
光谱进 一步红移至 5 5 5 n m 左右 , 除子在等能时长波光子数多于短波光子数及不 同的跃迁态
这两个因素外 , 还可能有一些未知因素 , 现有的数据尚难以解释 。 由图 (8 a ) , 无 论哪一类
光谱在 4 O0n m 至 6 0 0 n m均有较高效率 , 甲素这一优点为治疗中选择光源提供了方便 。
最后讨论 甲素使酶失活的机理 。 使用 S O D作用不大 , 说明直接电子转 移可能性不大 ,
这一点与大多数光敏化刘的光动力学机制相同 〔 ’ “ ’ , 但本实验结果不能排除甲素对 s o D的光
敏失活和歧化产物 H 2 0 2及其分解产物继续作用的可能性 。 D A B CO 比较 专 一 地悴灭溶液中
的 `0 : , s o m M D A B c O可悴灭溶液中 6。夕石的 ’ 0 。 l ’ 弓’ , 如果假设酶失活全了邓由’ 0 2引起 , 则加入
5 0m M D A B C o 后 , 失活速率下降 5 0乡` , 即 k / ` k D A B C O = 2 , 实测值为 1 . 7 9 , 这说 明 除 ` 0 2在
酶失活中起重要作用外 , 还有其它活性物质参与 。 加入 · 。 H较专一悴灭剂 P A B G A也有一定
保护作用 ,程龙生等 (待发丧 ) 的 自旋捕捉实验证 明溶液中确有 · O H与 自旋捕捉齐lJ加 合物了J
在 。
参 考 文 献
〔 一 〕 万象仪 . 陈远腾 : 《 科学通报 , (英文 版 ) , 2 6 ( 1 1 ) , 1 9 5 1 , 1 0 4 0 .
〔 少二 安静仪 , 张曼华等 : 《 中国科学 》 ( B辑 ) , 生l , 1 9肠 , 9 7 5 .
〔 3 〕 郑建华 , 程龙生等 : 《 生物物理学报 》 , 2 ( 4 ) 1 98 6 . 3 ! 2 .
〔4 〕 程龙生 , 王家珍 《实验生物学报 》 . 1 8 ( 1 ) 一9 8 5 . 3 9
〔 5 〕 A . W . G i r r o t i : P h o t o 。 h e m . P b o t o b i 。 1 . 2 4 , 1 9了0 , 5 2 5 .
L 6 〕 E I l e , a n o t . a l . : B i 。 。五 e n l . P h a r m a 。 . ; ( 2 ) , 1 9 0 1 , 3 0 .
〔 7 〕 p . L o n d a h l : B i o e h i m . B i o P h y , . A e t a . 3 7 9 ( 2 ) , 1 9 7 5 , 3 。碍 .
〔 8 〕 王家珍 , 程龙生 : 《 生物物理学报 》 , 3 ( 1 ) , 198 了, 仪
二9 〕 张曼华 , 安静仪等 : 《 科学通报 》 , 2 9 ( ! 8 ) , 四别 , 1 1 1了 .
二I f 二 J . D . S P i k , : A n n . R e , i 。 , . B i o o h 。 。 , 3 6 , 2 9 6 了 , 选。 9 .
〔 1` 刘景瑶 : 《科学通报 》 , 3。 ( ! 4 ) , 1 9肠 . , 。万
二: 2二 、 1 . E . D a u 了、 : p h y t o p h a t h o l o 吕y , 7 2 ( 4 ) , 1 9 82 , 3丁,
〔 1 3 〕 e . S . F 。 。 t , : S 。 i o n e 。 , 2 2 6 ( 2 9 ) , ! 9 0 5 , ,。 3
〔 1 4二 B . H i l l i w e l l e t . a t . : F r e e r a d i e a l , i n b i o l o g y a n j m ” d i e l n e , o x f o r d U n i v e : , i t 、 p r e s , . N , Y
1 9 8 5
,
P p 50
.
本文于 1 9 88年 3月2 6日收到 ,
2 6生 物 物 理 学 报 1 98 9年
T HF F E E E CT OF S O MP EH Y S I C O CH E M I CL A
F A CTR O S ON H YP O CR L L E IN A
一
S EN ST I ID Z E
P H OT O IN AT C IV T A ION OF A C ETL Y CH O
-
L IN ET S ER A S E IN H U入 I ANR ET Y -
HR O C YT E M E MR B AN E
5 un J i, h a n
,
C h e n g L o n g s h e n g
( I
, s t ` t o t e o f B i o p h y s i e s
,
A e a d e o i a S f , i e 。
,
B
e i j
o g
,
C h i n a )
A b s t r a e t
: T h e e f f e e t s o f P h o t o s e n s i t i z e r ( h y P o e
r e l l i n A ) e o n
e e n t r a t i o n ,
1 i g h t i n t e n s i t y , m e d i u m PH a n d t e m P e r a t u r e o n t h e P h o t o i n a e t i v a t i o n o f a e e
-
t y l e h o ]i n e s t e r a s e i n h u m a n e r y t h r o c y t e nI e m b r a n e h a 、 e b e e n i n T e s t i g a t e d i n
t h i s w o r k
。
T h e r a t e e o n s t a n t s o f i n a e t i v a t i o n o f t h e e n z y m e w e r e d e t e r m i n e d
.
T h e u n i q u e n e s s o f H y P o e r e l l i n A ( HA )
一
i n d u e e d i n a e t i v a t i o n , a s e o m P a r e d w i t h
t h o , e o f o t h e r P h o t o s e n s i t i z e r s , 1 5 r e V e a l e d b y f o l l o w i n g P h e n o m e n a : ( 1 ) t h e
P h o t o s e n : i t i z a t i o n e f f i e i e n e y o f H A i n e r e a s e s a s t h e p H d e e r e a s e ; ( 2 ) t h e l i g h t
i n t e n s i t ) e x P o n e n t o f t h e f i r s t
一 o r d e r r a t e e q u a t i o n 1 5 g r e a t e r t }l a n l ; a n d ( 3 )
H A h a s a b r o a b e r P h o t o s e n s i t i z a t i o n s P e e t r u m 一 r a n g e ( 4 0 0 n m
一
6 0 0 n m )
。
T h e r e o u
-
1 t s o f a c t i v e o x g y e n
一
q u c n c h i n g e x P e r i m e n t s s h o 、丫 t h a t P h o t o i n a e t i v a t i o n n f t h e
C n Z V n l e 1 5
a 15 0 P l a y a
m a i n l y e a 、一s e d b y o i n g l e t o x y g e n , 、` h i l e o t h e r f o r rn 二 o f a e t i v e o x y g e n
n l
1
n 0 r r 0 1e 1 n i t
。