全 文 ：中目药师 260 年第 9卷第 9期 hc ina Ph ~ ca si t 2 60 V o l . 9 N o . 9
H P L C 法测定 山绿茶中芦丁的含量
黎霜 , 英蔚明 2 张治军 ’ 刘利敏 ` 卢听 2 廖雪英 , l( . 广西壮族 自治区桂林食品药品检验所 桂林 54 102 ; .2
广西师范大学化学系 )
摘 要 目的 : 建立 山绿茶中的芦丁 H PCL 测定法 。 方法 : 使用 wat er C I。柱 ( 25 0 ~ x 4
.
6
~
,
5 卿 ) , 以 乙 晴 一 2 . 5 % 醋酸
( 14
.
:2 85
.
8 )为流动相 , 浏定波长 : 254 二、 流速 : I inl ·而 n 一 ’ , 柱温 : 40 ℃ 。 结果 : 芦丁在0 . 38 ~ 3 . 82 此 范围内与峰面积呈良
好的线性关系 ( ; 二 0 . 卯9 8 ) , 平均回收率98 . 7 % (月5刀 = 2 . 0% , n = 6 ) 。 结论 : 本方法可用 于山绿茶的质黄拉制 , 方法简便 、 准
确 、 可靠。
关健词 H P LC ; 山绿茶 ; 芦 T
中圈分类号 : 9R 27 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 8 ( 阵9x( 2X( 拓 ) o 刁807 刁3
L随妞 n 刘加 . 廿on 山 e C o n t e nt of R u血 in Sab ul u c b a by H P L C
u 弘 u an g , , M 。 叭 i而心 , z h ans z ihj u n , , u u u m in g , , uL x in , , U ao x u e y in , ( 1 . I sn u ut t e fo r F以泪 an d unr g e o , 1 o f G u iiln ,
uG an 加 , uG i li n 54 1X() 2 , P . R . Chi na ; 2 . eD p a rt m e n t Of Ch e im s lyt Of uG an 脚 NO mr al U n ivesr iyt )
A B S T RA C T O 句忱廿ve : OT es abt il s h an H PCL m e thod for det enr
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.
M e山od : 仆 e wat e r C : s
e o l u mn ( 250 m m
x 4
.
6
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,
5 卜m ) w as us ed . hT e m o b i le p h as e e o n s is ted Of Ae e ot n i itr l e 2 . 5% ac e it e ac i d s o l u t i o n ( 14 . 2 , 85 . 8 ) , hT e
det e e t io n w va
e l e n砂 w as 2 54 n m , n、 aert aws 一 。耐 · 而 n 一 ’ an d e olu mn t e川 pe ar t u r e at 叨 ℃ . R曰川 t : 阮 il aner m n g e of ur it n ~
0
.
38 一 3
.
8 2 卜g ( r = 0 . 9 9 8 ) , th e m e an ecr vo 哪 of R iut n was 98 . 7% (拐S D 二 2 . 0% , n 二 6 ) . C O . d uS 加n : hT i s m e ht od i o s im p l e , ac -
e u r a t e , an d er l iab l
e
.
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e o n tor l ht e 四山yt Of Sh anl u e h a .
K E Y WO R D S H P LC
; Sh a n lu e ha
;
uR
t i n
山绿茶为冬青科植物海南冬青 (刀群 h ia an ~ is从沈e . )干燥叶 , 为广西少数民族民间中草药 ,使用历
史悠久 , 已 收载 于 《广西 中药材标准》 ( 1 990 年
版 )[ ` 〕 , 具有清热解毒 ,消肿止痛 , 活血通脉等作用 ,
用于降血压 , 降血脂 ,降胆固醇 ,冠心病 ,脑血管意外
所致的偏瘫 ,风热感冒 ,肺热咳嗽 ,喉头水肿 ,扁桃体
炎 ,痢疾等 [ ’ , ,〕 。
山绿茶主要化学成分为黄酮类 、三菇昔类 、三掂
酸类及香豆素类等 。 其中芦丁为山绿茶中黄酮类的
主要有效成分之一川 ,芦丁具有较强的生理 、药理
活性 〔’ .s] 。 阂知大等 4[] 从山绿茶叶中分离得到一个
△ 12 一齐墩果烷的三菇酷昔 , 其昔元结构为齐墩果
烷一 12 一烯一 3 a , 28 p一二酸一 p , 16 一二 经基 ( ol e an 一12 -
e n e 2 3 a
,
2 8 p
一
d ioc a e id一 p , 16 一d ihy d or x y l , 1 1 ) , 昔为
1 1 的 p一 D 一葡萄糖 ( l * 2 8 )醋 ( p一 D 一gl u e o p yr an o s y l ( l
斗2 8 ) e s te r of 1 1 ) ,命名为海南冬青昔 ( h ia n an e sn id e
,
1 1 )
。 文东旭等阎从山绿茶叶中分离得到乌索
酸 ,冬青素 A ,冬青皂昔 A l 和胡萝 卜昔 。 本文首次
采用 H P CL 法测定了山绿茶中的有效成分芦丁的含
量 ,为完善山绿茶这一广西特有药材的质量标准提
供了可靠的依据 。
作者简介 :黎霜 ,女 ,副主任药师 , 研究方向为中药的研究与开发 。 eT l : 130 7 7 6 5 05 8 E一m ia l : li sh u an 即5 8 @ os h u . e o m
在对多种色谱体系进行筛选的基础上建立的左氧氟
沙星有关物质与含量的分析方法简便 、专属性强 、准
确可靠 ,可作为左氧氟沙星原料与制剂有关物质质
量控制的分析方法 。 同时建议对左氧氟沙星各类原
料与制剂的质量标准加以统一 , 以便检验与质量控
制 。
参 考 文 献
山` 决心决止决心汤止盛心汤心汤心决心汤止 J心决心场止场止决止 月冲毛汤止场止决心汤止汤心
.
国家药品监替管理局 国家药品标准〔s] . W S 4 35 ( X一 63 )屯0 0 2
国家药品监甘管理局 国家药品标准「5] . Y B H良06 82以抖
国家食品药品监督管理局 国家药品标准祈药转正标准第 29 开
[ S ]
.
2X() 3
,
7 : 一56 一 15 8
中国药典〔S」、 2 X( X) 年版 、 2 X( 只 年增补本 , 2以科 . 36 菊
杨亚莉 ,胡昌勤 , 金少鸿 . 四种喳诺酮类抗生素水溶液的光稳定性
研究【J] . 药物分析杂志 , 2仪” , 24 ( 1 ) : 71 夕 4
胡昌勤 . 高效液相 色语法在杭生素质控分析 中的 应 用 ( 下 开 )
【M 〕. 北京 :气象出版社 , 2X() 1 . 1肠一 108
( 2 0 0 5
一
1 一 2 收稿 2 X( 拓扬 2 7 修回 )
卫生部药品标准 [ S ] . W S习 13 ( X刃 12 )刀 8
J Z 7
w w w
·
z
yg . s
o gr 研究抢文
2
.
7 重复性试验
取同批山绿茶药材粗粉 (过三号筛 ) 5份 , 每份
1 9
,精密称定 , 依法制成供试品溶液 , 进样操作测
定 ,计算芦丁含量为0 . 05 % ( n 二 5 ) 沐SD 为0 . 9% 。
2
.
8 加样 回收试验
取上述已测定含量的山绿茶粗粉 (过三号筛 )
0
.
5 9
, 精密称定 , 用校正过的分度吸管各精密加人
芦 T 对照品溶液 (浓度为0 . 4 0 2 m g · m l 一 ` ) 0 . 5 耐 ,
0
.
6 耐 , 0 . 7 耐 , 照 “ 2 . 3 ” 项下方法制成供试品溶液 ,
测定 ,计算回收率 , 结果见表 1。
表 1 山绿茶中芦丁回收试脸结果
序 取样 t
号 ( g )
样品中含
芦丁含量
( m g )
加人芦丁 测得芦丁 回收率 平均回收率 况叨
量 (叱 ) 量 ( m g ) (% ) (% ) (% )
10 0
1田 . 0
95
.
8 98
.
7 2
.
0
10
.
0
10 0
96 4
452785100002400
1 仪器与试药
S h im a d z u SC L
一
10 AVT P 高效液相色谱仪 , S P D -
10 AV P 紫外检测器 , C LA S 一V P 5 . 0液相色谱工作站
( s h i m ad
z u
)
,
AB s 2 6 5 D电子分析天平 (瑞士 ) ; 乙睛
为色谱纯 (德国 M e kr 公司 ) ;水为三重蒸溜水 ,其余
试剂 、试药均为分析纯 ;芦丁对照品 , 批号为 080 -
93 03
,供含量测定用 , 购自中国药品生物制品检定
所 。 山绿茶样品购自广西上林 ,经中国科学院广西
植物研究所李光照研究员鉴定为 几群 ha ian en sn is
从论 e . 的叶 。
2 方法和结果 6[]
2
.
1 色谱条件
色谱柱 : w at e r OD S C ,: 柱 ( 2 5 0 m m x 4 . 6 un
,
5
卜m ) , 流动相 : 乙腊 一 2 . 5% 醋酸溶液 ( 14 . :2 85 . 8 ) ;
流速 : l . o m l · m i n ; 检测波长 : 2 5 4 n m 。
2
.
2 对照品溶液的制备
精密称取在 12 0 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照
品2 3 . 86 m g ,置 25 iln 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 。 摇匀 ,备用 。 即得每 1 m l 中含 0 . 9 5 4 4 m g 的
溶液 。
2
.
3 供试品溶液制备方法
取山绿茶粗粉 (过三号筛 ) 1 9 , 精密称定 ,加甲
醇 50 ml ,加热回流 l h , 滤过 ,用甲醇适量分次洗涤
容器与滤渣 ,洗液以同一滤器滤过 ,滤液合并 ,蒸干 ,
残渣用甲醇溶解并定量转移至 5 耐 量瓶中 ,加甲醇
至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜 ( 0 . 45 卜m )滤过 , 取续滤
液 ,即得 。
2
.
4 线性关系考察
分别精密量取上述对照品溶液 0 . 2 , 0 . 6 , 1 . 0 ,
1
.
4
,
1
.
8
,
2
.
0 耐 ,置 10 血 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇
匀 。 分别精密吸取上述溶液各 20 闪 ,注人液相色谱
仪中 ,在上述色谱条件下测定芦丁峰面积 , 以对照品
进样量为横坐标 , 芦丁峰面积为纵坐标 , 经线性回
归 , 回归方程为 :通 二 3 . 6 7 x 10 , e + 1 . 7 5 x 10 4 , r =
0
.
9 9 9 8
。 结果表明 ,芦丁在0 . 3 8 一 3 . 8 2 林g 范围内 ,
与峰面积呈 良好线性相关 。
2
.
5 精密度试验
取同批山绿茶制成的供试品溶液 ,在上述色谱
条件下 ,连续进样 5 次 , 每次 20 闪 , 测定芦丁峰面
积沐 5刀 二 1 . 0% 。
2
.
6 稳定性试验
精密吸取同批山绿茶制成的供试品溶液 20 闪 ,
每隔一定时间注入液相色谱仪 ,测定芦丁峰面积 ,直
至 24 h ,其五5刀为 1 . 8% ,表明芦丁在 24 h 内稳定性
良好 。
次叹尹
1 0
.
50 12
2 0
.
5X() 8
3 0
. 呜95 6
4 0
. 礴卯 2
5 0
.
50 16
6 0
.
5仪为
0
. 加
0
.
20
0
.
24
0
.
24
0
.
2 8
0
.
2 8
2
.
9 样品的浏定
收集不同批号 ,不同采集时间的山绿茶样品 9
批 ,照 “ 2 . 3 ” 项下方法制备供试液 。 分别取供试液
及 “ 2 . 4 ” 项下对照品溶液各 20 闪注人液相色谱仪 ,
记录色谱图 , 以外标峰面积法计算 。 同时另取本品
粗粉测定水分 ,按干燥品计算含量 , 结果见表 2 , 图
l
。
表 2 9 批山绿茶药材的芦丁含 , 测定结果 (% )
批 次 含量 (% ) 1 批 次 含量 (% )
05606
,犷口UO
056o
nùn0,且,`飞曰月呀户」
A
. 芦丁对照品 B . 山绿茶
圈 1 H P LC 色讲圈
3 讨论
3
.
1 刚定波长的选择
取芦丁对照品适量加甲醇制成每 l ml 含0 . 0 5
m g 的溶液 ,用分光光度法测定溶液在 254 与 358 n m
的波长处有最大吸收 。 在高效液相色谱仪上采用双
中目药师2 以拓 年第9 卷第9 期C h i n ah P n a刀e ai stZ 以拓 .V o l.9 No .9
波长检测器检测 , 当检测波长为 254 n m 时 ,峰面积
较大 ,故以 2 5 4 n m 为检测波长 。 见图 2 。
闷加刀 《回 )
3
.
2 流动相选择
根据芦丁的极性大小 , 并参考有关文献 〔’间 , 选
择甲醇一水 一冰醋酸 ( 40 , 57 . 5 : 2 . 5 ) , 甲醇 一乙睛 一水一冰
醋酸 ( 3 0 , 10 : 5 7 . 5 : 2 . 5 ) , 乙睛 一 2 . 5% 冰醋酸 ( 14 . 3
: 85
.
7 ) 三种不同的流动相体系在相同的色谱条件
下测定山绿茶的样品溶液 。 在乙睛 一 2 . 5% 冰醋酸
( 16
,
84 )为流动相时芦丁主峰的对称性 , 理论塔板
数及样品的分离度均明显优于其他两个体系 。 理论
塔板数达到 12 9 17 ,分离度为 1 . 6 。
3
.
3 芦丁溶于热甲醇及乙醇中 ,为选择合适的提取
溶媒与提取方法 , 取同批山绿茶药材粗粉 (过三号
筛 ) 1 9 ,精密称定 , 共取四份 , 两份分别加 甲醇 50
m l
,另两份分别加乙醇 50 耐 ,置锥形瓶中 , 分别按照
回流 、超声提取方法提取 , 按照样品溶液制备方法操
作 ,进行测定 。 结果表明 , 甲醇提取所得结果高于乙
醇提取 ,而且 ,热回流提取结果比超声提取结果高 ,
因此 , 选择甲醇作为提取溶剂 ,加热回流提取制备供
试品溶液 。 为选择合适的提取时间 , 同上述方法 ,分
别加甲醇后提取 3 0 m i n , l , 1 . 5 , Z h , 依照样品溶液
制备方法操作 , 并进行测定 。 结果甲醇回流 l h 可
基本将样品中的芦丁提尽 。
3
.
4 芦丁中含有多个经基 , 是一个具有酸解离基团
的化合物 , 为抑制其解离以减少色谱峰拖尾 , 故在流
动相中加人适量的酸抑制剂 。 分离黄酮化合物的实
验中多采用磷酸 ,但磷酸影响柱子的稳定性 , 为延长
色谱柱的使用寿命 , 在保证样品分离度情况下选用
冰醋酸缓冲液 。
参 考 文 献
广 西药材标准〔 S〕. 南宁 : 广西科学技术出版社 , 1夕喇】. 加一 1 ,
1 37
一
13 8
季宇彬 . 中草药有效成分药理与应用 〔M ] . 哈尔滨 :黑龙江科学技
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陈一 山 . 绿茶的降压作用 [ J」. 中草药 , 19 8 3 , 14 ( 4 ) 2 7一 0
阂知大 , 军开活 . 海南冬青 中的一个新三菇贰【J 〕. 药学学报 ,
19 8 4
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文东旭 , 郑学忠 ,井上谦一郎 ,等 . 海南冬青的化学成分研究【J] .
中国中药杂志 , 19 9 , 24 ( 4 ) : 2 23一 25
赵登飞 . HP L C 测定山绿茶胶囊中芦丁的含量【J 〕. 中成药 . 2仪双 ,
24 ( 9 )
: 7 2 4一2 5
( 2X() 5
一
12 一 收稿 2仪拓习3一 1 修回 )
丙卡特罗治疗儿童持续咳嗽多中心对照研究
洪建国 李臻 ( 上海交通大学附属第一人民医院儿科
儿科 ) 王立波 ( 上海复旦大学附属儿科医院 ) 曹兰芳
上海 2以洲〕80 ) 李云珠 邵洁 ( 上海交通大学附属瑞金医院
( 上海交通大学附属仁济医院儿科 )
摘 要 目的 : 观察盐酸丙卡特罗对小儿持续性咳嗽的临床疗效及安全性 。 方法 : 58 例患儿随机分为治 疗组犯 例 ,服盐酸
丙卡特罗口服液 ;对照组 26 例 ,服复方氛化按糖浆 ,总疗程 3 周 。 取治疗前 、 治疗第 6 , 13 , 20 d 四个观察 .饭 ,对 日 、 夜间症状评
分 ,并进行两两比较 。 结果 : 试脸组 自身比较 , 日间 、 夜间症状评分均有统计学差异。 时照组各观察点比较 , 日间 、 夜间症状评
分 , 治疗前与治疗第 13 , 20 d 相比较 ,尸 < 0 . 05 。 试验组和对照组治疗 13 , 20 d 的 日间 、 夜间症状评分有统计学差异。 两组患儿
在整个疗程中峰流速 ( P E )F 的变异率均小于 10 % , 两组在治疗前 、 治疗第 6 , 13 , 20 天分别进行组内、 组间两两比较 , p > 0 . 05 ;
提示在整个疗程中PE F 变异率的检浏无意义 。 在整个服药观察期 , 两组患儿均无不 良反应 。 结论 : 盐酸丙卡特罗治疗儿童持
续性咳嗽 , 可显著改善患儿的咳嗽症状 ,具有良好的安全性 ,依从性好 。
关健词 丙卡特罗 ;咳嗽 ; 儿童 ; 多中心对照研究
中圈分类号 : 9R 74 ` . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 8供 g X (2以拓 ) o 刁8的供
C l i川回 S t u d y on P r o c a et olr 恤 山 e Taer h n e nt of C bU dr e n P e sr is et nt C O哪少 : A M ul it c e n et r aR n d o m肠de
C o n t r o llde S tU d y
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e n t of Pe d la itr
e s , A币l iaet d F政 P e o p le ’ 5 H o s p ialt , Shan gh ia Ji ao t o n g Uin vesr i ty , Sh a n g h ia Z(】洲)80 ,
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( A价 il at e d uR 订in H o叩 i alt , S han gh ia Jia o t o邓 Uin v e o iyt ) ; Wan g U bo ( A价l ia t e d C h i lder n H o s Pi -
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,
Shan g h ia F
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v e sr i yt )
; C ao l月 n af n g ( A if li at e d R e nj i H o s p ialt , Ji ao ot n g U n i v e sr it y )
作者简介 :洪建国 ,男 ,教授 , 主任医师 , 主要从事呼吸急救和变态反应性疾病的研究 。
J多罗