全 文 ：香蕉轮作和连作土壤细菌主要类群*
欧阳娴摇 阮小蕾摇 吴摇 超摇 白亭亭摇 李华平**
(华南农业大学资源环境学院, 广州 510642)
摘摇 要摇 香蕉枯萎病是香蕉生产上最主要病害,而利用韭菜轮作能有效防控香蕉枯萎病的发
生.本文直接对香蕉鄄韭菜轮作、香蕉连作的土壤样品抽提总 DNA,并对总 DNA 的细菌 16S
rDNA V3 高变区域序列进行 PCR 扩增,扩增产物经变性梯度凝胶电泳(DGGE)进行分离后,
对两类土壤中主要差异条带进行回收测序,经 NCBI 比对分析来鉴定细菌类群.结果表明:韭
菜轮作地的细菌多样性更为丰富,并且以拟杆菌门、变形菌门、放线菌门、绿湾菌门和酸杆菌
门为主要类群;而香蕉连作地细菌多样性有所减少,但有明显的优势种群出现,以厚壁菌门、
变形菌门、放线菌门和绿湾菌门为主要菌群.
关键词摇 香蕉枯萎病摇 香蕉鄄韭菜轮作摇 细菌多样性摇 变性梯度凝胶电泳
文章编号摇 1001-9332(2011)06-1573-06摇 中图分类号摇 Q939. 96摇 文献标识码摇 A
Main bacterial groups in banana soil under rotated and continuous cropping. OUYANG
Xian, RUAN Xiao鄄lei, WU Chao, BAI Ting鄄ting, LI Hua鄄ping (College of Natural Resources and
Environment, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China) . 鄄Chin. J. Appl.
Ecol. ,2011,22(6): 1573-1578.
Abstract: Banana wilt is the main disease in banana production, while banana鄄leek rotation can ef鄄
fectively control the occurrence of the disease. In order to understand the variations of soil bacterial
groups under banana鄄leek rotation and banana continuous cropping, soil samples under these two
cropping systems were collected to extract crude DNA, and the bacterial 16S rDNA in V3 region
was amplified by PCR. The PCR products were then separated by DGGE, and the main different
bands were sequenced and compared with the records of NCBI to identify the germs. Under banana鄄
leek rotation, soil bacterial diversity was richer, and the main bacterial groups were Bacteroidetes,
Proteobacteria, Actinobacteria, Chloroflexi, and Acidobacteria; while under banana continuous
cropping, the soil bacterial diversity was somewhat decreased, and the main bacterial groups were
Firmicutes, Proteobacteria, Actinobacteria, and Chloroflexi.
Key words: banana wilt; banana鄄leek rotation; bacterial diversity; DGGE.
*国家香蕉产业技术体系建设专项(nycytx鄄33鄄06)资助.
**通讯作者. E鄄mail: huaping@ scau. edu. cn
2010鄄11鄄16 收稿,2011鄄03鄄29 接受.
摇 摇 由古巴尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f. sp.
cubense)引致的香蕉枯萎病是香蕉上一种毁灭性土
传维管束病害,现已蔓延至几乎所有的香蕉种植国
家和地区.尽管目前在田间采用了诸如施用化学药
剂、施加有机肥、添加生物制剂、加强栽培管理等多
种防控方法,但防治效果仍然十分有限,寻求有效防
控方法已成为香蕉生产的当务之急[1-4] . 有报道称
韭菜汁对香蕉枯萎病菌能起到一定的抑制作用[5],
而多年的田间调查和试验也发现,在发病严重的香
蕉地中,通过种植 2 ~ 3 年韭菜后种植香蕉,香蕉枯
萎病发病率则明显降低,一直连作香蕉的地块则病
害发生严重,甚至达到毁园的程度. 许多研究证明,
每种植物都有自己独特的根际微生物区系,而这些
微生物区系直接或间接地影响其他土居微生物的发
生和发展[6-7] .香蕉枯萎病菌作为一种典型的土壤
习居菌,随着种植作物的改变可能也受到较大影响.
限于当前技术水平,土壤中只有 1%的微生物
是可人工培养的,因而采用常规人工培养方法来研
究土壤微生物类群将存在较大困难[8] . 而 PCR鄄
DGGE技术作为研究微生物群落结构的主要分子生
物学方法之一,可对土壤中的微生物进行较为直接
的研究,结合微生物基因片段克隆和核苷酸序列测
定,可以获得与系统生态功能相关的微生物种群的
系统进化信息.
应 用 生 态 学 报摇 2011 年 6 月摇 第 22 卷摇 第 6 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
Chinese Journal of Applied Ecology, Jun. 2011,22(6): 1573-1578
本研究分别采集相邻的轮作 3 年韭菜(香蕉鄄韭
菜 3 年鄄香蕉)的香蕉地和连作 5 年香蕉地的土壤样
品,通过 PCR鄄DGGE和克隆核苷酸序列相结合的方
法,分析土壤细菌主要类群的变化,从而为利用轮作
措施防控香蕉枯萎病害提供科学依据.
1摇 材料和方法
1郾 1摇 供试材料
1郾 1郾 1 土壤样品摇 土壤(赤红壤)样品采集自广东省
广州市番禺区余窝头镇的 2 个相邻香蕉地块. 实行
韭菜(Allium tuberosum)轮作 3 年的香蕉地块枯萎病
发病 率 为 8% (土 壤 性 质: pH 4郾 76, 有 机 质
20郾 7 g·kg-1,全 N 颐 P 颐 K = 1郾 49 颐 0郾 705 颐 23郾 3).
连作 5 年香蕉的地块枯萎病发病率为 82% (土壤性
质:pH 4郾 97,有机质 20郾 6 g·kg-1,全 N 颐 P 颐 K =
1郾 57 颐 1郾 31 颐 23郾 6).每块地按照常规法 5 点取样后
混合作为 1 个标样. 将土壤样品装入无菌塑料袋内
封口,带回实验室 4 益下保存备用.
1郾 1郾 2 试剂 摇 DNA 纯化试剂盒 Wizard DNA Clean鄄
up System购自 Promega公司,引物由北京奥科公司
合成.
1郾 2摇 研究方法
1郾 2郾 1 土壤 DNA的提取摇 采用修改后的 Bead鄄Beat鄄
ing法[9-10] .称取 5 g土样,放入盛有 10 粒无菌玻璃
珠(直径 3 ~ 5 mm)的三角瓶中,加 10 mL 提取缓冲
液(100 mmol·L-1 Tris鄄HCl,100 mmol·L-1 EDTA鄄
Na2, 200 mmol·L-1NaCl,1% PVP,2% CTAB, pH
8郾 0),在 180 rpm 37 益振荡 30 min,加 1郾 5 mL 20%
SDS继续摇 1 ~ 2 h. 65 益水浴 1 h 后6000 r·min-1
离心 10 min,收集上清液,加 0郾 5 倍体积 PEG
(30% )鄄NaCl(1郾 6 mol·L-1 ),混匀后室温下放置
2 h,10000 r·min-1离心 20 min,沉淀用 2 mL TE 重
新悬浮.加入 5 mol·L-1KAc至终浓度0郾 5 mol·L-1,混
匀后冰浴 10 min,用等体积的酚鄄氯仿鄄异戊醇(体积
比,25 颐 24 颐 1)抽提 2 次.在上清液中加入 0郾 1 倍体
积的 3 mol·L-1NaAc(pH 5郾 2),混匀后,加入 0郾 6 倍
体积 异 丙 醇 室 温 沉 淀 DNA 1 h 或 过 夜,
12000 r·min-1室温离心 30 min,沉淀用 70%乙醇洗
涤 1 次,干燥后,200 滋L TE 溶解,用 DNA 纯化试剂
盒 Wizard DNA clean鄄up system 纯化后置于-20 益
保存.
1郾 2郾 2 巢式 PCR摇 第 1 次 PCR:所用引物为细菌 16S
rDNA通用引物 F27(5忆AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
3忆)和 V3 高变区 R518 (5忆ATTACCGCGGCTGCTGG
3忆).反应体系总体积为 25 滋L,10 倍缓冲液 2郾 5 滋L,
MgCl2(25 mmol·L-1)2 滋L,dNTP(2郾 5 mmol·L-1)
1 滋L, F27 ( 10 滋mol · L-1 ) 1 滋L, R518
(10 滋mol·L-1) 1 滋L, Ex Taq DNA 聚 合 酶
(5 u·滋L-1)0郾 1 滋L,模板 DNA 1 滋L,其余由 ddH2O
补足.反应程序为:94 益预变性 5 min,94 益 1 min,
55 益 1 min,72 益 2 min,25个循环,72 益延伸7 min.
第 2 次 PCR:以第 1 次 PCR 的产物为模板,所
用引物为细菌 16S rDNA V3 高变区 F357鄄CG (5忆
CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCAC鄄
GGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG 3忆) 和 R518. 反
应体系同上,反应程序采用降落 PCR[11]:预变性条
件为 94 益 5 min,前 20 个循环为 94 益 30 s,
65 益 ~55 益 40 s和 72 益 40 s(其中每个循环后复
性温度下降0郾 5 益),后 10 个循环为 94 益 30 s,
55 益 40 s和 72 益 40 s,最后在 72 益延伸 7 min.
1郾 2郾 3 DGGE 电泳 摇 采用 D鄄Code 突变检测系统
( DCode Universal Mutation Detection System, BIO鄄
RAD),对巢式 PCR产物进行 DGGE分析.聚丙烯酰
胺凝胶浓度为 10% . 使用梯度胶混合器,制备变性
剂浓度 50% ~65% (100%的变性剂为 7 mmol·L-1
的尿素和 40%的去离子甲酰胺的混合物),其中变
性剂的浓度从胶的上方向下方依次递增. 待胶完全
凝固后,将胶放入装有 1 伊TAE 电泳缓冲液的装置
中,将 PCR浓缩产物与等量的载样染料混匀加入到
点样孔中.电泳条件:60 益恒温下,电压为 60 V, 电
泳时间为 21 h[12-13] .电泳结束后银染并照相.
1郾 2郾 4 DGGE 电泳图谱的分析 摇 使用 Quantity one
V4郾 6 软件对 DGGE电泳图谱进行分析.采用多样性
指数(H)和物种丰度(S)指标来比较各个样品的细
菌多样性.公式如下[14]:
H =- 移
S
i = 1
P i lnP i
其中:P i 是某个样品中某一条带的强度在该样品中
的所有条带总强度中所占的比率;S 是某个样品中
所有条带数目的总和.
1郾 2郾 5 DGGE 条带的回收和测序摇 从银染的胶上切
下差异条带,放入 1郾 5 mL 的灭菌离心管中,加入
50 滋L灭菌双蒸水洗胶 2 ~ 3 次,后加入 30 滋L 灭菌
双蒸水并用吸头将胶碾碎,于沸水中煮沸 10 min 左
右,冷却后离心收集上清液,直接用于 PCR扩增,反
应条件见巢式第 2 次 PCR[15] . 将 PCR 产物重新经
过 DGGE电泳,验证条带是否能对回原来的位置,
反复几次,可达到纯化条带的目的[13,16] .最后,将位
4751 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 22 卷
置正确的条带回收,并通过克隆测序得到序列信息,
测序结果经 NCBI Blast进行比对分析.
2摇 结果与分析
2郾 1摇 土壤总 DNA 提取和细菌 16S rDNA 片段的扩
增
采用修改后的 Bead鄄Beating 法[9-10]能够较完整
地提取土壤总 DNA,用 DNA 纯化试剂盒 Wizard
DNA Clean鄄up System 纯化粗提的土壤总 DNA 后,
经 1%的琼脂糖凝胶电泳后观察表明(图 1),2 个标
样总 DNA大小都在 23 kb左右,符合进一步试验的
要求.
第 1 次 PCR得到 500 bp 左右的特异性扩增片
段(图 2A).第 2 次 PCR 得到大小为 230 bp 左右的
单一扩增条带(图 2B),2 次 PCR阴性空白对照均没
有明显的 DNA 条带出现,表明 2 次 PCR 均具有较
强专化性,所获 PCR 产物适合下一步的 DGGE
分析.
2郾 2摇 变性梯度凝胶电泳分析
两个土壤样品的扩增产物 DGGE 分析结果见
图 3.由图 3 可见,两个土壤样品都分离得到若干条
带,但带型有所不同.香蕉鄄韭菜轮作地共有 37 条条
带,而香蕉连作地共有 32 条条带,其中共有条带仅
有 5 条,且香蕉连作地的优势条带比较多(如条带
21、34、35、36 ~ 40),而韭菜轮作地土样的优势条带
比较少(如条带 1、11、15 和 20),表明二者在细菌种
群结构上存在明显差别.
图 1摇 香蕉轮作和连作地土壤样品总 DNA电泳
Fig. 1 摇 Agarose gel electrophoresis of total DNA from soils of
rotated and continuously cultivated banana.
M: 分子量标记 Hind 芋鄄digested 姿DNA marker; 1) 轮作 Rotated culti鄄
vation; 2) 连作 Continuously cultivated. 下同 The same below.
摇 摇 多样性指数和物种丰度分析发现,香蕉鄄韭菜轮
作地和香蕉连作地的细菌多样性指数 H 值及物种
丰度 S 值分别为 3郾 56、37 和 3郾 41、32. 这说明香蕉鄄
韭菜轮作土壤的细菌种群多样性指数和物种丰度均
高于香蕉连作地.
图 2摇 土壤细菌 16S rDNA 通用引物扩增(A)和 16S rDNA
V3 高变区巢式 PCR扩增(B)凝胶电泳
Fig. 2摇 Gel electrophorosis of bacterial 16S rDNA applied with
general primers (A) and variable region of 16S rDNA applied
with nested鄄PCR (B).
M: 分子量标记 DL 2000 marker; CK: 空白对照 Blank control.
图 3摇 香蕉轮作和连作地土壤细菌 16S rDNA V3 区 DGGE
图谱
Fig. 3 摇 DGGE profiles of bacterial 16S rDNA V3 region from
soils of rotated and continuously cultivated banana.
A: 轮作 Rotated cultivation; B: 连作 Continuously cultivated. 图中条带
1 ~40 被分别切胶回收、测序,并对应于表 1 Numbers on gel were bands
that were excised and sequenced and corresponded to the list in Table 1.
57516 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 欧阳娴等: 香蕉轮作和连作土壤细菌主要类群摇 摇 摇 摇 摇
2郾 3摇 DGGE图谱中差异条带的回收和核苷酸序列
分析
对 DGGE 图谱中 40 个差异条带进行测序, 结
果见表 1.有 15 个条带与 GenBank 数据库中的非培
养细菌克隆子相似,目前尚无菌属信息;有 3 个条带
属于 琢鄄变形菌,分别是 Sphingomonas sp. ( 11 )、
Sphingobium sp. (23)和 Methylobacterium sp. (31);
有 6 个条带属于 酌鄄变形菌,分别是 Uncultured
Frateuria sp. (9)、Pantoea sp. (16)、Uncultured Xan鄄
thomonadaceae bacterium clone ( 20、 34 和 36 ) 和
Pseudomonas sp. (32);有 3 个条带属于放线菌,分别
是 Uncultured Actinobacterium clone(12)、Uncultured
Actinomycetales bacterium clone(26)和 Mycobacterium
sp. (38);有 7 个条带属于厚壁菌,分别是 Uncul鄄
tured Staphylococcus sp. (21、24、25 和 29)、Bacillus
sp. (28)、Exiguobacterium sp. (33)和 Uncultured Ba鄄
cillus sp. (40);有 3 个条带属于拟杆菌,分别是 Un鄄
cultured Sphingobacteria(1)、Uncultured Bacteroidetes
bacterium(6)和 Uncultured Flavobacterium sp. (15);
条带 18 和 37 为绿湾菌 Uncultured Chloroflexi bacte鄄
rium clone;条带 8 为酸杆菌 Uncultured Acidobacteria
bacterium.
表 1摇 DGGE差异条带的核苷酸序列在 GenBank中的比对结果
Table 1摇 Closest match in GenBank database to band sequences extracted from a DGGE gel
克隆条带
Cloned band
V3 区片段长度
Length of
V3 region
最相似序列近缘菌株
Strain of most identity sequence
GenBank登陆号
Accession number
in GenBank
相似度
Identity
(% )
1 189 Uncultured Sphingobacteria HM238164郾 1 99
2 189 Uncultured bacterium clone EU133767郾 1 96
3 169 Uncultured soil bacterium clone EF540418郾 1 98
4 169 Uncultured bacterium clone GQ502258郾 1 97
5 189 Uncultured bacterium FM200927郾 1 96
6 189 Uncultured Bacteroidetes bacterium DQ295336郾 1 95
7 169 Uncultured bacterium clone HQ011677郾 1 100
8 195 Uncultured Acidobacteria bacterium AM936860郾 1 99
9 195 Uncultured Frateuria sp. EF072183郾 1 98
10 169 Uncultured bacterium clone EU134576郾 1 99
11 169 Sphingomonas sp. AB453305郾 1 99
12 174 Uncultured Actinobacterium clone GQ504248郾 1 99
13 169 Uncultured bacterium clone GQ476506郾 1 100
14 169 Uncultured bacterium clone EU527167郾 1 95
15 188 Uncultured Flavobacterium sp. GU245911郾 1 96
16 194 Pantoea sp. GU120659郾 1 100
17 170 Uncultured bacterium clone FJ905656郾 1 93
18 169 Uncultured Chloroflexi bacterium clone AY922118郾 1 98
19 194 Uncultured bacterium AB212894郾 1 97
20 194 Uncultured Xanthomonadaceae bacterium clone FJ889338郾 1 98
21 194 Uncultured Staphylococcus sp. HM076915郾 1 100
22 195 Uncultured bacterium clone HM334264郾 1 100
23 169 Sphingobium sp. HM748834郾 1 98
24 194 Uncultured Staphylococcus sp. HM076396郾 1 100
25 194 Uncultured Staphylococcus sp. HM076028郾 1 100
26 175 Uncultured Actinomycetales bacterium clone HM077093郾 1 100
27 194 Uncultured bacterium clone EU488076郾 1 96
28 195 Bacillus sp. HM151701郾 1 98
29 194 Uncultured Staphylococcus sp. HM074878郾 1 100
30 188 Uncultured bacterium clone EU133770郾 1 100
31 169 Methylobacterium sp. FN868961郾 1 100
32 194 Pseudomonas sp. HQ105014郾 1 100
33 194 Exiguobacterium sp. HM854020郾 1 100
34 194 Uncultured Xanthomonadaceae bacterium FJ536886郾 1 96
35 194 Uncultured bacterium clone HM125361郾 1 96
36 194 Uncultured Xanthomonadaceae bacterium clone FJ889338郾 1 97
37 172 Uncultured Chloroflexi bacterium clone EF018775郾 1 94
38 188 Mycobacterium sp. AY163337郾 1 98
39 194 Uncultured bacterium AB212894郾 1 97
40 195 Uncultured Bacillus sp. HQ179148郾 1 100
6751 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 22 卷
摇 摇 其中,香蕉连作地优势种群的条带 21、34、35、
36、37、38、39 和 40 大多属于厚壁菌、酌鄄变形菌、绿湾
菌和放线菌. 对于香蕉鄄韭菜轮作地而言,优势条带
1、11、15 和 20 属于拟杆菌、琢鄄变形菌和 酌鄄变形菌.
总体来说,测序结果表明,香蕉鄄韭菜轮作地和
香蕉连作地的主要菌群构成有所差异,除共有菌群
外,香蕉鄄韭菜轮作地尚有拟杆菌门和酸杆菌门为主
要菌群,而香蕉连作地则尚有厚壁菌门为主要菌群.
3摇 讨摇 摇 论
韭菜作为一种大众蔬菜在香蕉产区有一定面积
的种植,而作为一种有效控制香蕉枯萎病的轮作作
物则只在近几年才发现.尽管韭菜本身(韭菜汁)对
香蕉枯萎病菌[5]和其他一些微生物[17]有一定的直
接抑制作用,但对于作为轮作作物对土壤微生物有
何影响、特别是轮作后为何能有效降低香蕉枯萎病
发生,尚未见任何相关研究报道.
本试验采用 PCR鄄DGGE 法对韭菜轮作及香蕉
连作土壤中的细菌主要类群进行分析表明,二者中
的土壤细菌主要类群存在明显差异,这些差异理论
上而言,应该对作为土居真菌的香蕉枯萎病菌产生
重要影响[18-20] .从本文 DGGE 图谱中还可以发现,
香蕉鄄韭菜轮作地比香蕉连作地的微生物多样性要
高,这可能意味着韭菜轮作提高了土壤细菌多样性.
蔡燕飞等[21]在研究番茄青枯病时发现,丰富的土壤
微生物多样性可显著降低土壤中青枯病菌的发生和
危害.因此,韭菜轮作能减少香蕉枯萎病的发生,除
韭菜根系的分泌物对土居香蕉枯萎病菌产生了一定
的影响[17]外,韭菜轮作导致土壤主要细菌类群的不
同、以及丰富的土壤细菌多样性也可能是影响病害
发生的一个重要因素. 至于土壤中各主要细菌类群
与枯萎病菌的确切互作关系,有待今后进一步深入
研究.
由于 PCR鄄DGGE 法是从土壤中直接提取微生
物的总 DNA,避免了在传统培养过程中的筛选和富
集作用,能够更加直接地反映土壤中的微生物多样
性及种群分布情况,因而更能全面反映土壤中微生
物类群状况.通过这种研究方法,大约有 90%以上
的从直接抽提的土壤总 DNA 中发现的菌种是以前
未被分离到或者未经充分研究的[22-23] . 黄珍等[24]
通过构建香蕉园土壤中细菌 16S rDNA 文库发现,
正常香蕉种植区的土壤样品的细菌多样性较为丰
富,以变形菌门、厚壁菌门、酸杆菌门为主要细菌类
群;而香蕉枯萎病发生地土壤以放线菌门和厚壁菌
门为主要细菌类群.本文的结果与黄珍等[24]的研究
结果一致,但获得的细菌类群更多,并且能判别出土
壤的优势种群.尽管本文在进行 PCR鄄DGGE 法研究
香蕉土壤中的细菌类群时,采用的细菌通用引物所
获得的 16S rDNA 片段较短,无法确切判断条带所
对应的微生物的分类地位,但对于了解土壤微生物
的种群分布仍是有帮助的,而且可以获得传统培养
方法无法得到的菌种信息. 如果能够进一步改进
PCR的引物,获得更长的 16S rDNA 片段,则可以更
有效地确定微生物的分类地位. 如将该方法与其他
的分子生物学方法以及传统培养方法联用[25],则可
获得更全面的微生物群落结构信息.
参考文献
[1]摇 Xiao A鄄P (肖爱萍), You C鄄P (游春平). Advances
on control of banana vascular wilt. Jiangxi Plant Protec鄄
tion (江西植保), 2005, 28(2): 67-69 (in Chinese)
[2]摇 Wang Z鄄Z (王振中). Research progress of banana Fu鄄
sarium wilt disease and its control. Plant Quarantine
(植物检疫), 2006, 20(3): 198-200 (in Chinese)
[3]摇 Li Y鄄J (黎永坚), Yu L (于摇 莉). The study on the
pathogenesis and control of banana vascular wilt. Chi鄄
nese Agricultural Science Bulletin (中国农学通报),
2006, 22(8): 515-519 (in Chinese)
[4]摇 Yan D鄄P (严定平), Liu X鄄L (柳晓磊), Tang H (汤
华). Advances in banana Fusarium wilt disease and its
resistance breeding. Natural Science Journal of Hainan
University (海南大学学报·自然科学版), 2008, 26
(3): 290-295 (in Chinese)
[5]摇 Feng Y (冯 摇 岩), Yang J鄄M (杨静美), Wang X鄄R
(王晓容), et al. Inhibitory effects of Allium tuberosum
and Allium fistulosum juice on Fusarium oxysporum f.
sp. cubense. Journal of Huazhong Agricultural University
(华中农业大学学报), 2010, 29(3): 292-294 ( in
Chinese)
[6]摇 Li H鄄L (李洪连), Wang S鄄Z (王守正). Relationship
between rhizosphere microbe and plant disease. Journal
of Henan Agricultural University (河南农业大学学
报), 1989, 23(4): 401-408 (in Chinese)
[7]摇 Wu M鄄N (吴敏娜), Zhang H鄄W (张惠文), Li X鄄Y
(李新宇), et al. Relationship between soil fungi stasis
and bacterial community structure. Chinese Journal of
Applied Ecology (应用生态学报), 2008, 19 (7):
1574-1578 (in Chinese)
[8]摇 Brock TD. The study of microorganisms in situ: Progress
and problems. Symposia of the Society for General Mi鄄
crobiology, Midsion, 1987: 1-17
[9]摇 Yeates C, Gilling MR. Methods for microbial DNA ex鄄
traction from soil for PCR amplification. Biological Pro鄄
cedures Online, 1998, 1: 40-47
[10]摇 Long L鄄K (龙良鲲), Yang S鄄Z (羊宋贞), Yao Q (姚
青), et al. DNA extraction from arbuscular mycrorrhizal
fungi and analysis by PCR鄄DGGE. Mycosystema (菌物
77516 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 欧阳娴等: 香蕉轮作和连作土壤细菌主要类群摇 摇 摇 摇 摇
学报), 2005, 24(4): 564-569 (in Chinese)
[11]摇 Luo H鄄F (罗海峰), Qi H鄄Y (齐鸿雁), Xue K (薛摇
凯), et al. A preliminary application of PCR鄄DGGE to
study microbial diversity in soil. Acta Ecologica Sinica
(生态学报), 2003, 23(8): 1570-1575 (in Chinese)
[12]摇 Muyzer G, Smalla K. Application of denaturing gradient
gel electrophoresis ( DGGE) and temperature gradient
gel electrophoresis ( TGGE) in microbial ecology. An鄄
tonie Van Leeuwenhoek, 1998, 73: 127-141
[13]摇 Morimoto S, Ogawa N, Hasebe A, et al. Isolation of ef鄄
fective 3鄄chlorobenzoate鄄degraders in soil using commu鄄
nity analyses by PCR鄄DGGE. Microbes and Environ鄄
ments, 2008, 23: 285-292
[14]摇 Andreoni V, Cavalca L, Rao MA, et al. Bacteria com鄄
munities and enzyme activities of PAHs polluted soil.
Chemosphere, 2004, 57: 401-412
[15] 摇 Chen L鄄M (陈亮明), Zhang D鄄L (张冬林), Li Z鄄H
(李志辉), et al. Improvement on PAGE silver staining
and band recovering. Journal of Central South University
of Forestry and Technology (中南林业科技大学学
报), 2007, 27(6): 163-165 (in Chinese)
[16]摇 Dong XL, Reddy GB. Soil bacterial communities in con鄄
structed wetlands treated with swine wastewater using
PCR鄄DGGE technique. Bioresource Technology, 2009,
101: 1175-1182
[17]摇 Sun Z鄄Y (孙志勇), Ning M (宁摇 明), Wei K鄄D (韦
坤德), et al. Study on the external antibacterial activity
on pathogenic bacterium of Chinese chives juice. Acta
Academiae Medicinae Zunyi (遵义医学院学报 ),
2008, 31(6): 584-586 (in Chinese)
[18]摇 Bacon CW, Hinton DM. Endophytic and biological con鄄
trol potential of Bacillus mojavensis and related species.
Biological Control, 2002, 23: 274-284
[19]摇 Brooks DS, Gonzalez CF, Apple DN, et al. Evaluation
of endophytic bacteria as potential biological control
agents for oak wilt. Biological Control, 1994, 4: 373-
381
[20] 摇 Cheng L (程 摇 亮), You C鄄P (游春平), Xiao A鄄P
(肖爱萍). Advance in the study on antagonistic bacte鄄
ria. Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis (江西农
业大学学报), 2003, 25(5): 732-737 (in Chinese)
[21] 摇 Cai Y鄄F (蔡燕飞), Liao Z鄄W (廖宗文), Zhang J鄄E
(章家恩), et al. Effect of ecological organic fertilizer
on tomato bacterial wilt and soil microbial diversities.
Chinese Journal of Applied Ecology (应用生态学报),
2003, 14(3): 349-353 (in Chinese)
[22]摇 Chen H (陈摇 灏), Tang X鄄S (唐小树), Lin H (林摇
浩), et al. Community constitute and phylogenetic
analysis on soil uncultured microorganism. Acta Microbi鄄
ologica Sinica (微生物学报), 2002, 42(4): 478-483
(in Chinese)
[23]摇 Wu F鄄Z (吴凤芝), Wang S (王 摇 澍), Yang Y (杨
阳). Effects of rotation and intercropping on bacterial
communities in rhizosphere soil of cucumber. Chinese
Journal of Applied Ecology (应用生态学报), 2008, 19
(12): 2717-2722 (in Chinese)
[24]摇 Huang Z (黄 摇 珍), Tan Z鄄Q (谭志琼), Ruan Y鄄Z
(阮云泽). Phylogenetic diversity of bacteria in banana
soils determined with 16S rDNA library analysis. Chi鄄
nese Journal of Tropical Crops (热带作物学报), 2010,
31(6): 989-993 (in Chinese)
[25]摇 Zhong W鄄H (钟文辉), Cai Z鄄C (蔡祖聪). Methods
for studying soil microbial diversity. Chinese Journal of
Applied Ecology (应用生态学报), 2004, 15(5): 899
-904 (in Chinese)
作者简介摇 欧阳娴,女,1985 年生,硕士研究生.主要从事农
业微生物研究. E鄄mail: ouyangxian1985@ 126. com
责任编辑摇 肖摇 红
8751 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 22 卷