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楝叶、楝枝及楝子4种提取物抑菌活性比较



全 文 :农 药
AGROCHEMICALS
第49卷第12期
2010年12月
Vol. 49, No. 12
Dec. 2010
楝叶、楝枝及楝子4种提取物抑菌活性比较
潘建梅
(淮海工学院, 江苏 连云港 222005)
摘要:采用4种不同溶剂分别对楝树(Melia azedarach L.)叶、楝枝及楝子有效成分进行提取,以牛津杯法比较
了各种提取物对3株细菌的抑菌活性,并用双倍试管稀释法测定了最佳提取物的最小抑菌浓度和最小杀菌质
量浓度。 结果表明:楝叶、楝枝及楝子水提物的抑菌活性最好;楝子水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯
草芽孢杆菌的抑菌作用最强,最小抑菌质量浓度为7.8、125、125 g/L,最小杀菌质量浓度为125、500、500 g/L。
关键词:楝叶;楝枝;楝子;提取物;抑菌活性
中图分类号:S482.2 文献标志码:A 文章编号:1006-0413(2010)12-0930-02
Antibacterial Activities of Melia azedarach L. Leaf Branch and Fruit Extracts
PAN Jian-mei
(Huaihai Institute of Technology, Lianyungang 222005, Jiangsu, China)
Abstract: The bacteriostasis activities of the extracts from Melia azedaeach leaf, branch and fruit, with four different
solvents, were compared by Oxford cup method, and the minimal inhibitory concentration and minimum bactericidal
concentration were tested by double tube dilution method. Results showed that the antibacterial activities of water
extracts are the best and that the antibacterial activities of fruit extracts are the best against Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Bacillus subtilis, and the minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration
were 7.8, 125, 125 g/L; 125, 500, 500 g/L, respectively.
Key words: Melia azedaeach L. leaf; Melia azedaeach L. branch; Melia azedaeach L. fruit; extracts; bacteriostatic action
植物源农药作为生物农药的一个分支,与化学农药相
比,具有低毒、低残留、对非靶标生物及环境安全、靶标生
物不易产生抗药性的优点[1]。 楝树(Melia azedaeach L.)是
楝科楝属植物。 在我国分布很广,具有杀虫作用,我国学
者对苦楝的化学成分、药用机理做了很多研究[2],有关楝树
叶、楝树枝及楝子对细菌的抑菌活性比较未见报道,本文
就楝树叶、楝树枝及楝子的不同溶剂提取物的抑菌活性进
行比较研究,为楝树的综合利用提供一定的理论依据。
1 材料及方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试样品及预处理
试验所用的楝树叶、楝树枝及楝子均采自淮海工学院,
经过洗涤、自然晾干后粉碎,样品粉末用保鲜袋保存备用。
1.1.2 菌种
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )、大肠杆菌
(Escherichla coli )、枯草芽孢杆菌(Bacillus subitilis)由淮海
工学院海洋学院微生物实验室提供。
1.1.3 培养基
牛肉膏蛋白胨固体及液体培养基。
固体培养基:牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、氯化钠5 g、琼
脂15~20 g、自来水1 000 mL,调节pH值7.0~7.2,121 ℃灭
菌20 min。
液体培养基:牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、氯化钠5 g、自来
水500 mL,调节pH值7.0~7.2,121℃灭菌20 min。
1.2 试验方法
1.2.1 提取物的制备
有机溶剂提取液制备[3]:取粉碎后的楝树叶、楝树枝、
楝子样品各20 g,室温下分别用乙醇、乙醚、丙酮提取1 d,过
滤,重复3次,合并3次滤液,滤液经循环水真空泵浓缩后定
容于20 mL具塞刻度试管,使药液质量浓度为1 000 g/L,在
4 ℃冰箱中保存备用。
水提液的制备[4]:取楝树叶、楝枝和楝子粉末各20 g,
分别加200 mL水,浸泡30 min后煎煮,煮沸后用文火
再煮30 min,收集滤液,重复3次,合并3次滤液, 浓缩至
1 000 g/L,置4 ℃冰箱中保存待用。
1.2.2 菌悬液的制备
分别接2~3环斜面菌种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中,
振荡培养过夜,培养好的菌悬液用灭菌的液体培养基稀释
浓度至109 cfu/L。
1.2.3 抑菌试验方法
牛津杯法测各粗提物抑菌效果:在灭菌平皿中倒入
20 mL灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基,凝固后,用移液枪吸
取0.1 mL菌悬液,用无菌涂布棒涂布均匀,并将平板分4区
收稿日期:2010-05-27
作者简介:潘建梅(1978—),女,江苏常州人,实验师,研究生,主要从事微生物研究。 Tel:0518-85895436,E-mail:merpanmer@yahoo.com.cn。
应用技术
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标记,用镊子把无菌的牛津杯轻轻放入培养皿中。 吸
取0.2 mL提取物小心加入牛津杯,其中1个为提取液对照,
每种菌3个平行。 37 ℃培养24 h,观察并用游标卡尺测量
抑菌圈。 结果抑菌直径20 mm为极敏;15~19 mm为高敏;
10~14为中敏;10 mm以下为低敏。
最小抑菌质量浓度的测定:最小抑菌质量浓度(MIC)的
测定采用双倍试管稀释法[5]:取10支无菌试管(其中2支作为
对照)并编号,向前8支试管各加入液体培养基2 mL,再用移
液枪向1号管加入1 000 g/L的药液2 mL,充分混匀后,更换
枪头,从1号管中取出2 mL混合液体放入2号管,以此类推,
最后从8号管中吸出2 mL丢弃,再向前8支管各加入菌液
20 µL。 然后向对照管1加入2 mL液体培养基,向对照管2加
入2 mL液体培养基和菌液20 µL。 置于37 ℃培养箱中培养
24 h,然后取出观察。 凡是药物最高稀释管中无细菌生长
者,该管的质量浓度即为该种药物对该菌的最小抑菌质量
浓度(Minimal Inhibitory Concentration,简称MIC)。
最小杀菌质量浓度(MBC)的测定[6]:在MIC实验基础
上从无明显细菌生长的各管取材分别涂布于相应的牛肉
膏蛋白胨平板,于37 ℃的恒温培养箱培养24~48 h,观察
结果。 琼脂平板上无细菌生长且含药液最少的药液质量
浓度,即为该种药物对该菌的最低杀菌质量浓度(Minimal
Bactericidal Concentration,简称MBC)。
2 结果与分析
2.1 楝树提取物的抑菌作用
选用A(楝树叶)、B(楝枝)、C(楝子)的乙醇、乙醚和丙酮
提取液以及水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽
孢杆菌做抑菌实验,比较各提取物的对上述3种菌的作用。
对照分别为乙醇、乙醚、丙酮及无菌水。
表1 提取物的抑菌效果
试验菌株 乙醇提取物 乙醚提取物 丙酮提取物 水提物 对照
A B C A B C A B C A B C
金黄色葡萄球菌 - - 11.56 - - - - - - - - 22.52 -
大肠杆菌 9.13 10.22 11.98 8.33 8.92 - 8.57 9.04 - 9.51 10.43 12.32 -
枯草芽孢杆菌 - - 8.43 - - - - - - - - 12.16 -
注:-为无明显抑菌圈。
由表1看出:楝树叶乙醇提取物、乙醚提取物、丙酮提
取物及水提物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌无明显
抑制作用,对大肠杆菌有一定抑制作用,抑菌圈直径均不
超过10 mm为低敏。 楝枝的乙醚、丙酮提取物对金黄色
葡萄球菌和枯草芽孢杆菌无明显抑制作用,对大肠杆菌
的抑菌圈小于10 mm,为低敏,楝枝的乙醇提取物及水
提物抑菌作用稍强,为中敏。 楝子的乙醚及丙酮提取物
对3种细菌均无明显抑制作用,而其乙醇提取物及水提
物对3种细菌都有一定的抑制作用,尤其是楝子的水提
物对金黄色葡萄球菌的抑制作用明显,抑菌圈直径超
过20 mm为极敏。
2.2 最小抑菌质量浓度的测定
采用双倍试管稀释法测的最佳粗提物即楝子水提物
的最小抑菌质量浓度见表2。
表2 双倍试管稀释法测定楝子水提物的
最小抑菌质量浓度
试验菌株 500 250 125 62.5 31.3 15.6 7.8 3.9 对照1 对照2
金黄色葡萄球菌 - - - - - - - + - +
大肠杆菌 - - - + + + + + - +
枯草芽孢杆菌 - - - + + + + + - +
注:+为有菌生长;-为无菌生长。
楝子水提物对金黄色葡萄球菌的抑制作用最好,其质
量浓度达到 7.8 g/L就能抑制金黄色葡萄球菌的生长,对大
肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用较弱,MIC为125 g/L。
2.3 最小杀菌质量浓度的测定
采用双倍试管稀释法测的最佳粗提物即楝子水提物
的最小杀菌质量浓度见表3。
表3 双倍试管稀释法测定楝子水提物的
最小杀菌质量浓度
试验菌株 500 250 125 62.5 31.3 15.6 7.8 3.9 对照
金黄色葡萄球菌 - - - + + + + + -
大肠杆菌 - + + + + + + + -
枯草芽孢杆菌 - + + + + + + + -
注:+为有菌生长;-为无菌生长。
楝子水提物对金黄色葡萄球菌杀菌质量浓度最小,其
质量浓度达到125 g/L就能杀灭金黄色葡萄球菌,对大肠杆
菌和枯草芽孢杆菌的杀菌质量浓度达到500 g/L。
3 讨论
试验表明:楝叶、楝枝及楝子用水煮法提取时提取物
抑菌效果最好,并且楝子水提物比楝叶和楝枝水提物的抑
菌效果好,这与姜萍等[7]在苦楝对真菌抑制作用的研究结
果基本一致;楝子水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及
枯草芽孢杆菌都有较明显抑制作用,其中楝子水提物对金
黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度为7.8 g/L,最小杀菌质
量浓度为125 g/L,可见楝子中的化学成分具有抑菌作用,
是一种天然的抑菌剂,其抑菌机制和对植物有害菌的抑杀
作用值得进一步研究。 参
(抑菌圈直径mm)
(g/L)
(g/L)
(下转第934页)
潘建梅:楝叶、楝枝及楝子4种提取物抑菌活性比较
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成绩,不同程度上影响了队伍的稳定。
3.3 例行监测的范围还有待于进一步扩大
农产品质量安全例行监测是深入推进“无公害食品行
动计划”的重要内容,也是提高农产品质量安全水平的重
要措施。 但由于检验检测费用相对较高,目前广西组织开
展例行监测还仅限于蔬菜,水果、茶叶等其他农产品的例
行监测都还没有开展,委托检测还很少。
4 思考与探讨
进一步加强农产品农药残留监测是保障农产品质
量安全、维护公众健康、促进农业和农村经济发展的迫
切需要。
4.1 提高认识,加快完善农产品质量安全检验检测体系
建设
农产品质量安全检验检测体系机构的建设是开展农
产品农药残留监测的重要保障。 最近几年的中央1号文件
中,对农产品质量安全检验检测体系建设有部署、有要求。
各级部门需提高认识,认真学习领会、贯彻落实中央1号文
件精神,加快完善农产品质量安全检验检测体系建设。
完善农产品质量安全检验检测体系建设,要按照检验
检测机构技术性、事业性、公益性和非营利性的功能定位,
明确足够人员编制,将农产品质量安全经费列入当地政府
财政预算,让工作开展没有“后顾之忧”。
4.2 进一步加强检验检测队伍建设
先进的仪器设备还得由熟练的技术人员去操作,检测
数据还需要技术人员进行统计分析。 进一步加强队伍建
设要在检验检测人员上岗培训上下功夫,在稳定队伍的体
制机制上想办法,让检验检测人员在工作中不断积累经验,
不断提高水平,成为检验检测的技术权威,对农产品生产
和农产品质量安全实施科学、公正的监测、鉴定、评价。
4.3 逐步扩大农产品质量安全例行监测范围
增加经费投入,在蔬菜质量安全例行监测的基础上,
扩大农产品例行监测范围,逐步开展水果、茶叶等例行监
测。 同时,在目前蔬菜例行监测农药品种数量的基础上,
研究增加监测的农药品种。
参考文献:
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责任编辑:李新
参考文献:考文献
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究[J]. 林产化学与工业, 2004, 24(4): 23-27.
责任编辑:赵平
(上接第931页)
“专业工程设计资质信息发布会”成功举行
11月6日,“上海索维化工设计院获化工石化医药行业(化工工程)专业工程设计资质信息发布会”于九时三十分在长城假日酒店隆重拉开
帷幕。
此次认证,标志着索维今后能够独立承担化工工程当中的无机化工(如:尿素、硫酸、烧碱、磷肥等)、有机化工(如:乙烯、醋酸、聚酯、ABS、橡
胶等)、合成材料及加工(如:油漆与涂料、树脂成型加工、高效低毒农药、精细化工、化纤等)在内的建设工程项目的主体工程及其配套工程的
设计业务,并能从事资质证书许可范围内相应的建设工程总承包业务以及项目管理和相关的技术与管理服务。
本次发布会邀请了行业内的资深杂志媒体、网络媒体、展会媒体、五十多家OEM制造供应商,其中包括釜类容器制造供应商、给料设备制
造供应商、分散设备制造供应商、压力容器设备供应商、搅拌设备供应商、研磨设备供应商、自控工程供应商、乳化设备制造供应商、成套设备
供应商等莅临参加。
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最后,索维化工设计院将携手各方媒体,将最大限度地实现E(设计)、P(采购)、C(施工)各环节的衔接,并尽可能地融合E(设计)、P(采
购)、C(施工)各方优势,发挥总承包商的集成管理优势,为社会提供一流的服务,奉献更多的精品工程,为早日成为化工行业甲级资质企
业继续奋斗。