全 文 ：中国药房 2007年第 18卷第 12期 China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.12 · 885·
·中药研究·
黄蜀葵总黄酮抗脑卒中后抑郁作用的研究 Δ
郝吉莉 1* ,周兰兰 1# ,司 力 2 ,江秋虹 1 ,马 颖 1 ,颜海燕 1(1.安徽医科大学药理教研室 ,合肥市 230032;2.
安徽医科大学第一附属医院检验科 ,合肥市 230022)
中图分类号 R285 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)12-0885-03
摘 要 目的:研究黄蜀葵总黄酮(TFA)抗脑卒中后抑郁(PSD)的作用。方法:采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型 ,在此基础
上综合孤养、应激处理复制 PSD 大鼠模型 。观察 TFA 对 PSD 大鼠开野行为 、血液流变学以及脑组织脂质过氧化的影响。结果:
TFA 可增加 PSD大鼠的水平与垂直运动得分;抑制 PSD 大鼠各切变率下全血黏度 、血浆黏度的升高 ,提高红细胞的变形性;提高
脑组织中超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px)的活性 ,降低丙二醛(MDA)含量 。结论:T FA 具有抗 PSD 作
用 ,其机制可能与改善血液流变学 、抗脂质过氧化作用有关 。
关键词 黄蜀葵总黄酮;卒中后抑郁;开野试验;血液流变学;脂质过氧化
Ef fects of Total Flavone of A on Post-stroke Depression in Rats
HAO Jili , ZHOU Lanlan , JIANG Qiuhong , MA Ying , YAN Haiyan(Dept.o f Pha rmacolo gy , Anhui M ed-
ical U nive rsity , Hefei 230032 , China)
SI Li(Dept.of Clinical Laboratories , the First Aff iliated Hospi tal of Anhui Medical Universi ty , Hefei
230022 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:T o study the antidepressant e ffects of total flavone of A(TFA)on post stroke depression(PSD)
in rats.M ETHODS:Middle cereb ral ar te ry occlusion (MCAO)followed by isolation feed and irr itable stim uli was used to in-
duce PSD.Behav iours o f ra ts w ere de tected by open-field test .The effects o f TFA on the indexes o f hemorheology and brain
homogenate lipid peroxidation w ere also tested.RESULTS:TFA could increase the crossing and rearing scores in open-field
test , inhibit the elevation o f w hole blood viscosity as w ell as plasma viscosity at high-middle -low shear ra tes , increase the
ery t hrocy te defo rm ation , enhance the activitie s of Superox ide Dismutase (SOD)and Gluta thione Perox idase (GSH-Px), and
reduce Malondialdehyde (M DA)content in brain homogenate in PSD in rats.CONCLUSIONS:TFA produces an antidepres-
sant -like e ffect in PSD ra ts.This mechanism may be in association w ith attenua ting hemorheolog ical paramete rs and de-
creasing lipid perox idative damage.
KEY WORDS Tota l flavone of A ;Post-st roke depression;Open-field test ;Hemorheo logy ;Lipid perox idation
Δ安徽省科技厅年度重点项目(05021005)
*硕士研究生。研究方向:神经精神药理学。电话:0551-5161133
#通讯作者:教授。研究方向:神经精神药理学。电话:0551-
5161133。E-mail:LanLZhou@yahoo.com
卒中后抑郁(Post stroke depression , PSD)是脑血管病常
见并发症 , 发病机制目前仍不清楚 , 一般认为与大脑损伤后的
神经生物学改变以及社会和心理因素有关。有研究显示 , 血液
流变学[ 1 ]和脂质过氧化 [2 ]可能参与了抑郁症的发病过程 。
黄蜀葵总黄酮(Total flavone o f A , TFA)是从锦葵科植物
黄蜀葵中提取的一类有效成分 , 其主要活性成分为金丝桃苷
(Hyperin ,Hyp)、槲皮素和槲皮素苷 。研究表明 , T FA 和 Hyp
均具有脑缺血保护作用 [ 3 ～5 ] , 其作用机制与抗脂质过氧化有
关 。本文观察了 TFA 对 PSD模型大鼠开野行为的影响 , 并进
一步研究了 TFA 对血液流变学和脂质过氧化的作用 , 以期深
入探讨 TFA 抗抑郁作用机制。
1 材料
1.1 仪器
R -80锥板型血液流变检测仪 (北京中勤世帝科学仪器
有限公司)。
1.2 试药
TFA(总黄酮含量达 60%以上 ,安徽省医学研究所 ,批号:
20050826);百忧解(礼来(苏州)制药有限公司 ,批号:050616);
超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px)、丙
二醛(MDA)、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程
研究所)。
1.3 动物
SD普通级大鼠 , ♂,250 ～ 290g ·只 -1 ,由安徽医科大学实
验动物中心提供(动物合格证号:皖医实动准字第 01号)。
2 方法
2.1 分组及给药
通过开野实验 , 将水平运动次数加垂直运动次数不足 30
次或超过 120次的大鼠剔除 , 然后按体重随机分为假手术组 、
PSD 模型组 、TFA 低 、中 、高剂量组(分别为 25 、50 、100mg ·
kg
-1)及氟西汀组(1.8mg ·kg -1)。假手术组只分离颈总动脉
(CCA)、颈外动脉(ECA)以及颈内动脉(ICA);其它 5组均施
行脑缺血手术 , 术后开始孤养 , 并从术后第 8天起 , 进行为期
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2w k的应激实验 。用药组均每天灌胃 1次 ,连续 24d(术前给药
3d ,手术当日于术前 1h给药 ,直至术后 21d)。
2.2 局灶性脑缺血(MCAO)大鼠模型的制备
采用改良 Longa法 [6 ] 制备M CAO 模型 。大鼠术前禁食
12h , 用 10%水合氯醛腹腔注射麻醉 , 分离右侧 CCA 、 ICA 和
ECA ,分别置 4-0线备用 。结扎右侧 CCA 和 ECA ,在 ICA 和
ECA 分叉处剪一小口 ,插入头端灼圆 、直径 0.235mm的鱼线 ,
鱼线插入 ICA 的长度距分叉处约 18 ～ 20mm 。结扎 CCA ,缝合
切口 。缺血 1h后 ,拔出鱼线 ,恢复血供 。假手术组除了不插鱼线
外 ,其余步骤均同前 。术后出现左前肢屈曲 ,行走时向左侧转圈
现象即视为造模成功 ,纳入下一步的应激造模 。
2.3 慢性不可预见应激模型的复制
按 Willner 等 [7 ] 方法改进 , 将动物予以高速水平振荡
10min , 振荡速度为 160次 ·min -1;昼夜颠倒 24h;4℃冷刺激
5min;夹尾 1min ;45℃热刺激 5min;禁食 24h;禁水 24h等方
法刺激 。每日随机采取 1种刺激 ,共安排 2w k 。
2.4 开野行为测定 [8]
于实验前 1d ,术后 7 、14 、21d进行开野行为测定 。将大鼠
置于长和宽均为 80cm 、高 40cm 、周壁为黑色 、底面被分成面积
相等的 25块的敞箱里 ,室内隔音。实验时将大鼠放在正中 ,以
大鼠 3爪以上跨入邻格的次数为水平活动得分 , 两前肢离地
1cm 以上的次数为垂直活动得分 。每只大鼠每次测定时间为
3min 。
2.5 血液流变学检查
造模成功后的第 22天 , 以 10%水合氯醛腹腔注射麻醉大
鼠 , 腹主动脉取血 5mL , 肝素钠抗凝 , 用 R-80锥板型血液流
变检测仪测定各切变率下全血黏度 、血浆黏度 、红细胞压积以
及红细胞变形指数 。红细胞变形指数按通用公式计算 , 即红细
胞变形指数=[ηb(200/s)/ηp] 0.4 —1/[ηb(200/s)/ηp] 0.4×
HCT 。其中 ,ηb为全血黏度 ,ηp 为血浆黏度 ,HCT 为红细胞压
积 。
2.6 脑组织 SOD 、GSH-Px活性以及MDA含量的测定
在实验结束后将所有大鼠断头取脑 , 于冰盘上迅速分离大
鼠右侧脑 , 去除嗅球与低位脑干 , 称重 , 制成 10%脑组织匀浆 ,
离心 , 取上清液 , 置 —80℃冰箱备用 。按试剂盒说明书测定
SOD 、GSH-Px 活性以及 MDA 含量;考马斯亮兰法进行脑组
织蛋白质含量测定 。
2.7 统计学方法
采用 S PSS 10.0统计软件进行统计分析 , 所有实验数据
以x ±s表示 ,经方差齐性检验后 , 采用方差分析 , 组间比较采
用 LSD检验 。
3 结果
3.1 对开野行为的影响
实验前各组大鼠水平运动和垂直运动次数无显著性差异
(P>0.05)。术后 7d ,与假手术组比较 ,其余 5组大鼠水平运动
和垂直运动次数均有减少趋势;术后 14d(即应激 7d),与 PSD
模型组比较 , TFA 高剂量组大鼠垂直运动次数明显增多(P<
0.05);术后 21d(即应激 14d),与 PSD 模型组比较 , TFA 中 、高
剂量组以及氟西汀组水平运动和垂直运动次数明显增多(P <
0.05 , P <0.01),详见表 1 、表 2。
表 1 TFA对 PSD模型大鼠水平运动得分的影响(x ±s , n=8)
Tab 1 Effects of TFA on crossing scores in PSD rats(x ±s , n=8)
组别 剂量/mg· kg -1 实验前1d M CAO术后
7d 14d 21d
假手术组 - 46.25±14.08 29.50±10.76 28.5±10.49 27.75±14.12
PSD模型组 - 48.88±10.23 13.38±6.96* 12.88±5.74* 8.50±3.34*
氟西汀组 1.8 50.25±14.10 15.13±6.27 16.38±9.58 15.25±5.8#
T FA低剂量组 25 44.5±13.46 13.75±4.50 13.25±9.50 13.13±6.42
T FA中剂量组 50 52.50±14.12 15.75±6.96 15.38±5.73 15.13±5.36#
T FA高剂量组 100 44.13±12.80 16.75±7.07 16.50±7.65 16.38±6.63##
与假手术组比较:*P<0.01;与 PSD 模型组比较:#P<0.05, ##P<0.01
vs.sham-operat ion group:*P<0.01;vs.PSD model group:#P<0.05 , ##P<0.01
3.2 对血液流变学的影响
与假手术组比较 , PSD 模型组大鼠各切变率下全血黏度 、血
浆黏度均显著增加(P <0.01),红细胞变形性显著降低(P <
0.01), 而红细胞压积差异不显著。与 PSD 模型组比较 , TFA
高剂量组和氟西汀组能抑制PSD大鼠各切变率下全血黏度 、血浆
黏度的升高 ,并能显著提高红细胞的变形性(P <0.05 ,P<0.01);
TFA 中剂量组能抑制 PSD 大鼠中 、高切变率下全血黏度的升
高 ,并能提高红细胞的变形性(P <0.05),详见表 3。
3.3 对 PSD大鼠脑组织中 SOD 、GSH-Px活性以及MDA含
量的影响
与假手术组比较 , PSD 模型组 SOD 、GSH-Px 活力显著
降低 , MDA 含量显著升高 (P<0.01);与 PSD模型组比较 ,
表 2 TFA对 PSD模型大鼠垂直运动得分的影响(x ±s , n=8)
Tab 2 Effects of TFA on rearing scores in PSD rats(x ±s , n=8)
组别 剂量/mg· kg -1 实验前1d M CAO术后
7d 14d 21d假手术组 - 15.75±5.5 9.88±3.27 8.50±2.62 8.00±3.55
PSD模型组 - 16.00±4.38 8.25±4.13 3.38±2.72* 2.88±1.73*
氟西汀组 1.8 20.75±7.89 6.75±3.24 6.13±2.95 6.00±2.45#
T FA低剂量组 25 17.13±3.44 6.00±4.57 5.25±3.15 4.13±3.04
T FA中剂量组 50 18.00±4.96 6.25±4.03 5.75±3.54 5.63±3.16#
T FA高剂量组 100 16.88±2.36 7.50±4.21 7.00±3.65# 6.75±2.60##
与假手术组比较:*P<0.01;与 PSD 模型组比较:#P<0.05, ##P<0.01
vs.sham-operat ion group:*P<0.01;vs.PSD model group:#P<0.05 , ##P<0.01
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表 3 TFA对 PSD模型大鼠血液流变学的影响(x ±s , n=8)
Tab 3 Effects of TFA on the hemorrheology in PSD rats(x ±s , n=8)
组别 剂量/mg · kg -1 全血黏度 血浆黏度 红细胞压积/ % 红细胞变形指数
200/mPa· s-1 30/mPa· s-1 5/mPa· s-1假手术组 - 4.68±0.40 6.54±0.59 11.66±1.64 1.18±0.10 43.00±3.02 0.88±0.09
PSD模型组 - 5.81±0.48* 8.24±0.73* 15.10±1.72* 1.40±0.12* 49.13±4.94* 0.99±0.05*
氟西汀组 1.8 5.01±0.33## 7.04±0.66## 13.11±1.86# 1.24±0.11# 43.63±4.07 0.89±0.08# #
T FA低剂量组 25 5.34±0.60 7.39±0.98 14.19±2.08 1.39±0.13 44.13±3.00 0.95±0.08
T FA中剂量组 50 5.13±0.62# 7.15±0.90# 13.25±2.03 1.32±0.06 45.50±3.3 0.93±0.05#
T FA高剂量组 100 5.03±0.52## 7.08±0.77## 13.15±1.79# 1.27±0.07# 43.27±3.11 0.90±0.05# #
与假手术组比较:*P<0.01;与 PSD 模型组比较:#P<0.05, ##P<0.01
vs.sham-operat ion group:*P<0.01;vs.PSD model group:#P<0.05 , ##P<0.01
TFA 中 、高剂量组以及氟西汀组可提高 SOD 和 GSH-Px 活
性以及降低MDA 含量(P <0.05 , P <0.01);TFA 低剂量组
可提高 SOD 活性(P <0.05),详见表 4。
4 讨论
表 4 TFA对 PSD模型大鼠脑组织中 SOD 、GSH-Px的活性及 MDA含量的影响(x ±s , n=8)
Tab 4 Effects of TFA on SOD ,GSH-Px act ivity and MDA content in brain of PSD rats(x ±s , n=8)
组别 剂量/mg· kg -1 SOD/U ·mppro t-1 GSH-P x/ act ivi ty un it MDA/ nmol ·mgpro t-1
假手术组 - 119.89±16.39## 23.15±6.63## 1.48±0.28##
PSD模型组 - 87.79±17.54* 14.07±3.37* 3.01±0.57*
氟西汀组 1.8 105.54±12.94# 21.92±4.66## 2.16±0.77#
T FA低剂量组 25 104.42±12.14# 17.11±7.12 2.46±0.75
T FA中剂量组 50 112.82±14.92## 18.14±3.77# 2.21±0.54#
T FA高剂量组 100 106.20±13.10# 19.56±3.33## 1.93±0.67##
与假手术组比较:*P<0.01;与 PSD 模型组比较:#P<0.05, ##P<0.01
vs.sham-operat ion group:*P<0.01;vs.PSD model group:#P<0.05 , ##P<0.01
本研究采用线栓法制备大鼠MCAO 模型 , 在此基础上综
合孤养 、应激处理复制 PSD大鼠模型 。开野行为检测大鼠在新
鲜环境中的活动度 、探究行为和紧张恐惧状态 , 其中水平运动
反映了动物的活动度 , 垂直运动反映了动物对环境的好奇程
度 。在术后 21d , PSD 模型组大鼠的水平和垂直运动次数显著
减少 , 而 T FA 中 、高剂量组能不同程度地增加 PSD 模型大鼠
水平运动和垂直运动次数 , 表明 TFA 能改善 PSD 大鼠的抑郁
行为 。
抑郁症患者血液流变学异常的原因尚未明了 。 1981年 ,
Zadar 和 Dintenfass 对精神分裂症及其他精神疾病患者的血
液流变学指标作了对照研究 ,发现焦虑 、抑郁 、神经和精神分裂
症患者的血液流变学指标有所改变 , 从而提出精神血液流变学
的概念 。本研究发现 , PSD 模型大鼠全血黏度 、血浆黏度及红
细胞变形指数均显著高于假手术组 。与 PSD 模型组比较 ,
TFA 高剂量组能抑制 PSD 大鼠各切变率下全血黏度 、血浆黏
度的升高 ,并能显著提高红细胞的变形性;T FA 中剂量组能抑
制 PSD大鼠中 、高切变率下全血黏度的升高 ,并能提高红细胞
的变形性 ,说明 T FA 可有效改善 PSD大鼠血液流变学 。
近年来 , 国外报道自由基与抗氧化酶防御系统功能的改变与
抑郁症的发病有一定关系 ,重症抑郁患者存在脂质过氧化 [2 ,9 ] 。但
脂质过氧化是否与 PSD 的发病有关尚未见文献报道 。本文对
PSD 大鼠脑组织中 SOD 、GSH -Px 活性以及M DA 含量进行
了研究 , 结果表明 , TFA 中 、高剂量组可不同程度地提高 PSD
大鼠脑组织中 SOD 和 GSH -Px 活性并降低 MDA 含量 ,
TFA 低剂量组可提高 PSD 大鼠脑组织中 SOD 活性 , 提示
TFA 具有抗脂质过氧化作用 。TFA 抗 PSD作用的机制还有待
进一步探讨。
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(收稿日期:2006-09-05 修回日期:2006-11-05)