全 文 ：紫茉莉茎提取物及其萃取物对菜粉蝶幼虫的生物活性
彭跃峰 , 鲁红学 , 刘铁铮　(长江大学农学院 ,湖北荆州 434025)
摘要　用饲喂法 、叶片夹毒法、叶碟法测定了紫茉莉茎的 3种极性溶剂(石油醚、氯仿和乙醇)提取物及萃取物对菜粉蝶幼虫的毒杀活
性、胃毒作用、非选择性拒食活性。结果表明 ,紫茉莉茎氯仿提取物的毒杀与拒食效果最好 ,处理第 5天后的校正死亡率为 89.20%,取
食第 3天与第 5天的拒食率分别为 96.80%与 99.67%;也测定了紫茉莉茎氯仿提取物(简称MSCE)各萃取物(正己烷、氯仿和水萃取物)
对 4龄菜粉蝶幼虫的生物活性。结果表明 ,MSCE的正己烷萃取物第 5天与第 7天的毒杀效果最好 ,其校正死亡率分别为 79.80%与
78.90%;其对 4龄菜粉蝶幼虫的胃毒作用明显的强于其他各萃取物。
关键词　紫茉莉;提取物;萃取物;菜粉蝶;生物活性
中图分类号　Q949.96　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2007)13-03907-02
Bioactivity of Extracts and Fractions from Stem of Mirabilis jalapa L.to Pieris rapae L.
PENG Yue-feng et al　(Agricultural College , Yangtze University , Jingzhou , Hubei 434025)
Abstract　The poison activity , stomach toxicity action and nonselective food refusal activity of extracts and fractions obtained by extracting the stem of
Mirabilis jalapa L against the 4th instar larvae of Pieris rapae L.with 3 polarity solvents(petroleum ether, chloroform and ethanol)were determined by the
methods of feeding , leaf-sandwich and leaf dish.The results showed that the chloroform extracts had the best poison effects and food refusal action, with
the corrected mortality of 89.20% after treatment at 5th day , and the food refusal rates of 96.80% and 99.67% after getting food at 3rd and 5th day re-
spectively.Determination on the bioactivity of 3 fractions(nexane, chloroform and water fraction)of the chloroform fractions from stem of Mirabilis jalapa
L(MSCE)against 4th instar larvae of Pieris rapae L.indicated that the nexane fraction of MSCE possessed the best poison effects , with the corrected
mortality of 79.80% and 78.90% after treatment at 5th and 7th day respectively.Its stomach poison action was remarkably higher than other fractions.
Key words　Mirabilis jalapa L.;Extract;Fraction;Pieris rapae L.;Bioactivity
　　菜粉蝶(Pieris rapae L.)是蔬菜上的重要害虫。近年来 ,
其抗药性迅速增强 ,很多化学农药对其无能为力[ 1] 。同时 ,
菜青虫(菜粉蝶的幼虫)防治中大量使用毒性较高的化学农
药 ,造成蔬菜污染严重 ,影响人们的身体健康 。因此 ,寻找对
害虫防效好 、对作物安全的无公害农药势在必行 。植物源农
药作为生物农药的重要组成部分 ,因其来源广 、对害虫作用
机制独特 、不易产生抗性 、与环境的兼容性好且又易与其他
农药相混配等优点而倍受全世界农药研究及应用部门的广
泛重视 , 已成为新一代农药开发与研究的热点[ 2-3] 。
紫茉莉具有生态适应广 、生长速度快 、繁殖力强和抗氯
气等特性 ,我国大部分地区均有栽培。该植物易采收 、活性
成分的提取方法简单 、粗提物收获率高 、病虫害危害较少 ,符
合植物源农药研究与开发的要求。目前对紫茉莉的研究还
较少 ,离开发应用还有相当大的距离。为此 ,笔者就紫茉莉
植物茎提取物及萃取物对菜青虫的杀虫活性进行初步研究 ,
旨在开发出新的植物源杀虫剂。
1　材料与方法
1.1　植物材料　紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)为盛花期从长江
大学植物园采集 ,阴干后置于 50 ℃烘箱内鼓风吹干至发脆 ,
再用微型植物试样粉碎机粉碎称重 ,装入棕色瓶贮存备用。
1.2　供试昆虫　菜粉蝶幼虫(Pieris rapae L.),由长江大学农
学院养虫室提供。
1.3　方法
1.3.1　紫茉莉茎提取物的制备。称取 50 g植物茎干粉 ,用
滤纸包好后 ,置于索氏提取器内 ,加入干粉重 5～ 6倍的溶
剂 ,回流 24 h ,每份提取液过滤 3次 ,然后用旋转蒸发器减压
浓缩至稠膏状并称重。再将稠膏用丙酮定容至 1 g DW/ml
(DW为植物干粉重)的原液后 ,装入棕色细口瓶内备用。试
基金项目　长江大学科学基金项目(HNIDI200303)。
作者简介　彭跃峰(1975-),女 ,山西右玉人 ,硕士,讲师 ,从事植物源农
药的研究工作。
收稿日期　2007-01-21
验时量取 2 ml 提取物原液并用清水(98 ml)稀释至 2
g DW/ml ,对照仅为丙酮水溶液(丙酮∶水=2∶98)。
1.3.2　紫茉莉茎氯仿提取物(简称 MSCE)各萃取物的制备 。
准确称取紫茉莉茎干粉 2 000 g ,分 4等份 ,分别装入广口瓶
中 ,加入 5倍量的氯仿溶剂 ,置于 50 ℃的恒温箱中进行浸泡
提取;每次浸泡 3～ 5 d ,重复 3～ 5次 ,合并浸提液 ,抽滤 、减压
浓缩至稠膏并称重后 ,装入棕色细口瓶内备用。
试验时称取茎氯仿浸提稠膏 15 g ,用 1 500 ml含 10%甲
醇的水溶液搅拌后 ,装入分液漏斗中 。依次用正己烷 、氯仿
萃取 3 ～ 5次 ,将 2种萃取液以及氯仿萃取后的水相分别减压
浓缩至稠膏并称重。
1.3.3　毒杀活性测定。采用饲喂法测定毒杀活性 。参照汪
文陆的方法[ 4]略有改动。将甘蓝叶片用圆形打孔器打成直
径为3 cm的叶碟 ,在待测药液或对照丙酮水溶液(丙酮∶水=
2∶98)中浸渍 2～ 3 s ,取出晾干后 ,置于垫有滤纸的 9 cm 培养
皿中 ,每培养皿放入 4片处理叶碟 ,接入饥饿 4 h的菜粉蝶 4
龄幼虫 ,每处理设 3次重复 ,每重复 10头试虫。第 5天记载
死亡情况 ,每天更换新鲜处理叶碟 ,按下面的公式计算死亡
率和校正死亡率。
死亡率=死亡虫数供试虫数×100
校正死亡率=处理死亡率-对照死亡率
1-对照死亡率 ×100
1.3.4　胃毒作用的测定 。采用叶片夹毒法测定胃毒作用 。
用打孔器将甘蓝叶片打成均匀的 ,直径为 0.5 cm的叶碟 150
片 ,将各萃取物配制成不同浓度(1、2 、4 、6、8 μg/ml)的丙酮溶
液 ,各浓度处理 30片叶碟 ,用微量进样器依次吸取 5 μl不同
浓度(浓度由低到高)的各萃取物丙酮溶液 ,均匀涂布到叶碟
的一面上 ,各浓度处理 15片叶碟 ,待丙酮挥发后 ,另取 15片
叶碟涂抹面粉糊 ,并与涂药的各浓度叶碟小心的对合 ,制成
夹毒叶片。将无药叶片作底面 ,在直径为 5 cm的培养皿内
放入 1片(垫有湿滤纸保湿)夹毒叶片。每培养皿接入 1头
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2007, 35(13):3907-3908, 3937　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　陈娟　责任校对　胡先祥
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.13.073
饥饿 4 h的菜粉蝶幼虫 ,待其取食完夹毒叶片后 ,更换新鲜无
毒叶碟 ,每浓度以 5头为一组 , 3次重复 ,共 15头虫 ,空白对
照叶碟仅涂与药液等量的丙酮溶剂 ,分别于试验后第 5天与
第 7天调查结果 ,计算死亡率与校正死亡率 ,求出各萃取物
的线性回归方程以及胃毒 LD50 。
1.3.5　非选择性拒食活性测定。采用叶碟法。将新鲜甘蓝
叶片用打孔器打成直径为 2 cm的叶碟 ,在药液中浸渍 2 ～ 3
s ,待叶碟晾干后 ,置于垫有滤纸的 9 cm培养皿中。每培养皿
放入 4片处理叶碟 ,接入饥饿 4 h的菜粉蝶 4龄幼虫 ,对照组
用丙酮水处理叶碟。每处理设 10次重复 ,每重复 1头试虫。
第 1、3 、5天分别用坐标方格纸测定取食或剩余面积 ,每天更
换新鲜处理叶碟 ,按下式计算非选择性拒食率。
非选择性拒食率=对照取食面积-处理取食面积对照取食面积 ×100
2　结果与分析
2.1　紫茉莉提取物对 4龄菜粉蝶幼虫的毒杀作用　由表 1
可知 ,4龄菜粉蝶幼虫在取食经紫茉莉茎各提取物处理的甘
蓝叶碟第 5天后 ,各个紫茉莉提取物对 4龄菜粉蝶幼虫均有
不同程度的毒杀作用 ,其中以紫茉莉的茎氯仿提取物毒杀效
果最好 ,校正死亡率为 89.20%。
　　表 1 紫茉莉茎提取物对 4龄菜粉蝶幼虫的毒杀作用
茎提取物 供试虫数头
死亡虫数
头
平均死亡率
%
校正死亡率
%
石油醚提取物 30 17 　　56.60 53.50 a
氯仿提取物 30 27 90.00 89.20 c
乙醇提取物 30 19 63.30 60.70 b
对照 30 2 6.60
　注:供试茎提取物浓度为 2 g DW/ml;同列数据后的字母相同者表示
DMRT 法检测差异不显著(P>0.05)。下同。
2.2　紫茉莉提取物对 4龄菜粉蝶幼虫的非选择性拒食作用
　表 2表明 ,处理 1 d后 ,供试紫茉莉茎的不同极性溶剂提取
物对 4龄菜粉蝶幼虫均有显著的非选择性拒食活性。其中
紫茉莉茎乙醇提取物具有较强的拒食作用 ,拒食率为
93.22%;其次为茎氯仿提取物 ,拒食效果为 75.37%。处理第
3天与第 5天氯仿提取物对 4龄菜粉蝶幼虫均表现出极强的
拒食活性 ,拒食率分别为 96.80%与 99.67%,而乙醇提取物
的拒食率则下降为 70.70%与 65.71%。
　　表 2　　紫茉莉茎提取物对 4龄菜粉蝶幼虫的非选择性拒食作用
茎提取物　　
处理第 1 天
取食面积
mm
2/头
拒食率
%
处理第 3天
取食面积
mm
2/头
拒食率
%
处理第 5 天
取食面积
mm
2/头
拒食率
%
石油醚提取物 102.71 55.36 a 591.40 40.83 a 473.30 47.43 a
氯仿提取物　 56.67 75.37 b 32.00 96.80 c 3.00 99.67 c
乙醇提取物　 15.60 93.22 c 292.90 70.70 b 308.70 65.71 b
对照　　　　 230.11 999.50 900.30
2.3　MSCE不同溶剂萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫的毒杀作用
　表 3表明 ,各萃取物在不同时间段对 4龄菜粉蝶幼虫毒杀
作用不同。以正己烷萃取物饲喂第 5天与第 7天的毒杀效
果最好 ,其中正己烷萃取物饲喂的校正死亡率分别为
79.80%与 78.90%。这表明对 4龄菜粉蝶幼虫起毒杀作用的
活性成分主要为紫茉莉茎中的非极性物质 。
2.4　MSCE不同溶剂萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫的非选择拒
食作用　表 4表明 ,各萃取物处理甘蓝叶碟不同时间对 4龄
菜粉蝶幼虫均有显著的非选择拒食作用。但 4龄菜粉蝶幼
虫仅对正己烷萃取物处理 48 h的叶碟具有较好的拒食活性 ,
拒食率为61.10%。
　　表3　　　MSCE的各萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫的毒杀作用
处理 死亡率∥%
24 h 48 h 72 h 5 d 7 d
校正死亡率∥%
24 h 48 h 72 h 5 d 7 d
正己烷萃取物 0 10 30 80 80 0 a 　5.3 a 26.3 c 79.8 c 78.9 d
氯仿萃取物　 0 20 20 20 20 0 a 15.8 b 15.8 b 15.8 b 26.3 c
水萃取物　　 0 20 20 20 20 0 a 15.8 b 15.8 b 15.8 b 15.8 b
对照　　　　 0 5 5 5 5 0 a 0 a 0 a 0 a 0 a
　注:处理及对照浓度为 8μg/ml。下同。
　　表4　　　萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫非选择拒食活性
处理 取食面积∥cm
2/头
24 h 48 h 72 h 5 d
拒食率∥%
24 h 48 h 72 h 5 d
正己烷萃取物 1.74 3.85 9.81 16.57 11.70 d 61.10 d 48.10 b 50.80 b
氯仿萃取物　 1.86 8.62 18.51 30.13 5.60 c 13.00 c 2.20 c 10.50 c
水萃取物　　 1.51 4.81 9.60 15.34 23.70 b 51.40 b 49.30 b 54.40 b
对照　　　　 1.97 9.92 18.92 33.67 0 a 0 a 0 a 0 a
2.5　MSCE不同溶剂萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫的胃毒作用
　采用叶片夹毒法就MSCE不同溶剂萃取物对 4龄菜粉蝶幼
虫进行胃毒作用测定 ,采用对半稀释法测定其在不同处理时
间段的LC50 ,结果见表 5。表 5表明 ,MSCE正己烷萃取物对 4
龄菜粉蝶幼虫的胃毒作用均明显强于其他萃取物 ,其处理第
5天与第 7天后的 LC50分别为 4.359 2与 2.487 8 μg/ml 。这
表明MSCE正己烷萃取物为 4龄菜粉蝶幼虫胃毒作用的有效
萃取物。MSCE氯仿萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫处理 5与 7 d
后的胃毒作用仅次于MSCE 正己烷萃取物 ,其 LC50分别为
13.264 0与 11.758 5μg/ml。
　　表5　　　MSCE的各萃取物对 4龄菜粉蝶幼虫胃毒作用
处理 处理时间∥d 回归直线方程 相关系数 r
LC50
μg/ml
正己烷萃取物 5 Y =4.121 9+1.373 3x 0.975 4 　 4.359 2
7 Y =4.272 4+1.838 2x 0.980 8 2.487 8
氯仿萃取物　 5 Y =4.663 1+0.655 7x 0.933 3 13.264 0
7 Y =4.136 9+0.806 5x 0.991 0 11.758 5
水萃取物　　 5 Y =3.778 6+0.769 1x 0.937 8 38.733 7
7 Y =3.914 8+0.695 3x 0.980 2 36.371 8
3　小结与讨论
紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)为紫茉莉科紫茉莉属 1年生
草本植物[ 5] ,具有很高的药用价值 ,其根 、茎 、叶 、花及种子均
可入药。药理研究证明 ,紫茉莉的根有抗癌 、抑菌成分 ,叶有
利尿成分 ,种子有避孕 、溶血和凝血成分[ 6] 。目前国内外对
其药用成分和药理的研究较多 ,而对其在害虫防治上的研究
甚少。徐汉虹曾提到紫茉莉花含有生物碱(有效成分为
trigonelline)可驱避和麻醉蚊虫 ,制成蚊香[ 3] 。该试验研究发
现 ,紫茉莉茎提取物对 4龄菜粉蝶幼虫的活性与提取溶剂有
直接关系。紫茉莉茎氯仿提取物对 4龄菜粉蝶幼虫具有较
好的拒食活性与毒杀活性 ,这说明氯仿为提取紫茉莉茎活性
成分的适宜溶剂 。为进一步研究紫茉莉的活性成分 ,采用活
性追踪的方法 ,对紫茉莉茎氯仿提取物作进一步的萃取分离
并进行了生物测定 ,结果发现 , 4龄菜粉蝶幼虫在取食经紫
(下转第 3937页)
3908 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2007年
～ 3kg个体的绝对怀卵量为 3.33万 ～ 6.07万粒 ,初次性成熟
的个体怀卵量只有几千粒。怀卵量随个体的大小而有差
异[ 2] 。人工饲养与天然水体中亲鱼成熟个体有较大差异。
人工饲养 4龄鱼个体可达 1.25 ～ 1.56 kg ,而天然水体中的 4
龄鱼体重为 0.65 ～ 0.73 kg ,其怀卵量也有明显的差异 。人工
饲养的 4龄鱼怀卵量为 4.5万粒 ,而天然水体中的 4龄鱼怀
卵量仅为 2.7万粒。5龄鱼的怀卵量差异更大。人工饲养的
亲鱼怀卵量为 11.3万粒 ,天然水体中的亲鱼怀卵量为 5.1万
粒。亲鱼的怀卵量随着体重增长而增加。
1.4.4　产卵特点。在长江水系中岩原鲤的产卵场所大多分
布于干支流与上游水流急滩下江段 ,在底质为砾石的流水处
产卵。产卵处流速常见为 1m/s左右[ 3] 。岩原鲤成熟卵粒淡
黄色 ,粘性较强 ,成熟卵的卵径为 1.5～ 1.8mm ,卵膜间隙较
小 ,吸水膨胀系数较低 ,吸水膨胀后卵膜的直径为 2.3 ～ 2.5
mm 。岩原鲤属于多次产卵类型的鱼 ,其一次性产卵量 4 000
～ 10 000粒/ kg。产卵季节为每年的 3 ～ 4月 ,产卵水温为 18
～ 26 ℃,最佳产卵水温为 20～ 24 ℃。水温超过 26.5 ℃以上
时 ,出现畸形或胚胎发育停止而死亡;在水温 14～ 16 ℃时 ,岩
原鲤也可产卵 ,但产卵率 、孵化率均较低。
2　人工繁殖与苗种培育
2.1　人工催产　在繁殖季节 ,选择体质健壮 、发育情况较好
的亲鱼进行催产 。轻压雄鱼后腹 ,有乳白色精液流出 ,遇水
即散。雌鱼生殖孔红肿 ,腹部略显卵巢轮廓。利用室内产卵
池遮光催产 ,并保持微流水。每千克雌鱼用催产药物 LRH-
A2 5μg 、HCG 1 000 IU 、PG 2 mg ,分 2次注射 ,第 1次注射总剂
量的 20%,第 2次注射剩余剂量 ,间隔时间为 12 h。雄鱼在
雌鱼注射末针时一次注射 ,剂量减半。
2.2　人工授精　采用人工干法授精。挤压雌鱼腹部 ,将卵
挤入瓷盘中 ,再挤入精液 ,混合并搅拌 ,使其充分接触 ,脱粘
后移入孵化槽 ,23 ℃恒温孵化。孵化时 ,注意水质 、水温的变
化 ,并及时清除坏卵 。出苗后 ,及时将仔鱼移入鱼苗培育箱
中培育。
2.3　胚胎发育　岩原鲤卵粒呈淡黄色 ,粘性较强。受精后 ,
在 17.4 ～ 23 ℃水中孵化 ,1.50h后胚盘隆起 ,1.83 h后开始卵
裂 ,9.30 h到囊胚期 ,12.50 h到原肠期 , 27.42 h到神经胚期 ,
32.17 h后出现体节 , 64.25 h后心跳开始 ,受精后 90.57 h胚
胎尾部剧烈摆动 ,少数由尾部先破卵膜而孵出。大量出膜发
生在受精 118 h后 ,仍有少数尚未孵出 ,有明显的“宕延孵出”
现象。在不良环境条件下(如低温 、缺氧),提前出膜的初孵
仔鱼畸形率高达 50%。
2.4　仔 、稚鱼发育　初孵仔鱼体长 5.1～ 7.8mm ,肌节数 44
～ 46对 ,卵黄囊梨形 ,体淡黄色透明 ,头稍微抬起。刚出膜仔
鱼常侧卧水底 ,运动能力不强 ,很少窜游活动 ,当受到振动时
游至水中上层 ,尔后又迅速地垂直下沉 ,静卧水底。在 21 ～
27 ℃自然水温中 ,幼鱼发育经历早期仔鱼 、晚期仔鱼和稚鱼
期 3个阶段 ,历时 82 d。出膜 7.87 h后 ,胸鳍上翘;10h后 ,血
液呈淡红色;26.81 h后 ,口凹形成;3 d后 ,鳔 1室并充气;出
膜 4 d后 ,下颌形成;5 d后 ,前后肠管贯通并进食;9 d后 ,卵
黄物质耗尽;16 d后 ,鳔前室已充气;22 d后 ,侧线出现;22 ～
23 d后 ,鳞片出现;74 d 后 ,须出现;82 d后 ,鳞片覆盖完成 。
出膜 3～ 4昼夜的仔鱼 ,游动能力逐渐增强 ,主要为直线向前
运动 ,营集群底栖生活;6 ～ 7 d ,游动能力增强 ,仍平游 ,分散
在水体的底层;9～ 11 d ,开始形成明显的趋光性 ,活动能力变
强 ,可做各种运动;18～ 19日龄仔鱼 ,感觉灵敏 ,游动迅速 ,多
在水体中下层活动 ,可上窜。稚鱼阶段形成负趋光性 ,夜间
均匀分散各处觅食 ,游泳速度加快 ,反应更加敏捷 。
2.5　苗种培育　仔鱼开口饵料主要为丰年虫 、打成浆的水
蚯蚓 ,可将蛋黄 、枝角类 、桡足类 、轮虫经过 40目的网布过滤
后投喂。鱼苗长 2 cm以上时 ,除摄食饵料生物以外 ,可摄食
人工配合饲料(含蛋白质 42%～ 43%),每天早 、晚各投饵一
次。投饵量为幼鱼体重的 5%～ 10%,放养密度 1 000～ 1 200
尾/m3。当鱼苗生长到 3 cm以上时 ,进行池塘的大规格鱼种
培育 ,保持水源充足 ,水深应在 1.5 m左右 ,放养密度为 6万
～ 7.15万尾/hm2。培育池要求池底 、池壁四周光滑 ,长期有
微流水 ,培育池应放置于室内或用遮阳布遮盖。稚 、幼鱼阶
段易感染小瓜虫等病害 ,因此池底一角最好放置适量石块和
鹅卵石 ,早 、晚喂食后应及时清理食物残渣 ,保持鱼池清洁 。
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(上接第 3908页)
茉莉茎各萃取物处理的甘蓝叶碟的第 5天后 ,其正己烷萃
取物对 4龄菜粉蝶幼虫具有较明显的胃毒与毒杀作用 。由
此可推测 ,氯仿提取物对 4 龄菜粉蝶幼虫的毒杀作用属于
非神经毒杀作用 ,也即生长发育干扰作用。
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393735卷 13期　　　　　　　　　　　　　　　　　　庹 云　岩原鲤的人工繁殖技术