全 文 ：收稿日期:2014-09-22
作者简介:黄涛阳(1967-)，男，副主任药师，研究方向:医院药学;Tel:020-88654690，E-mail:yang185191@ 163. com。
* 通讯作者:翁燕君，Tel:020-88654690，E-mail:yanjunpig@ 126. com。
血清 HPLC指纹图谱法研究榕树叶药效部位
黄涛阳1，李 健1，黄 洋2，王 晖3，黄 和1，陈龙浩1，翁燕君1*
(1. 广州军区广州总医院，广东 广州 510010;2. 广东药学院，广东 广州 510006;3. 广州军区联勤部药品
仪器检验所，广东 广州 510500)
摘要 目的:研究榕树叶入血成分的指纹图谱与药效的相关性。方法:采用 HPLC 法建立榕树叶体外指纹图
谱以及大鼠血清色谱指纹图谱;通过对比体内外指纹图谱，分析入血成分。结果:含药血清指纹图谱中显示出 7 个
入血成分，大致确定其入血成分的极性部位主要在乙酸乙酯层，正丁醇层也有 5 个入血成分。结论:榕树叶入血成
分群极性部位的确定为其体内药效物质的研究奠定基础。
关键词 榕树叶;指纹图谱;血清
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)05-0995-02
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 05. 027
Study on Effective Parts of Ficus microcarpa Leaves by Serum HPLC Fingerprint
HUANG Tao-yang1，LI Jian1，HUANG Yang2，WANG Hui3，HUANG He1，CHEN Long-hao1，WENG Yan-jun1
(1. Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command，Guangzhou 510010，China;2. Guangdong Pharmaceutical Universi-
ty，Guangzhou 510006，China;3. Guangzhou Military Logistics Department Institute for Drug and Instrument Control，Guangzhou
510500，China)
Abstract Objective:To study the relevance between the drug effects and serum HPLC fingerprint of chemical constituents in
blood from Ficus microcarpa leaves. Methods:Fingerprints of the preparation and drug-containing serum of rats were established by
HPLC. Based on the fingerprints，chemical constituents in blood were investigated. Ｒesults:There were seven common peaks in the
HPLC fingerprints of drug-containing serum of rats. Polarity fraction of the chemical constituents in blood existed in the ethyl acetate ex-
tract，and five fingerprint peaks of serum HPLC fingerprint existed in n-butanol extract. Conclusion:Determination of the component
groups in blood provides some data on material basis study in vivo for Ficus microcarpa leaves.
Key words Ficus microcarpa L. f. leaves;Fingerprint;Serum
榕树叶是桑科榕属植物榕树 Ficus microcarpa
L. f. 的干燥叶，具有清热发表、解毒消肿、祛湿止痛
的功效〔1〕。临床上常将榕树叶浸膏用于咳嗽、哮喘
等多种疾病的治疗〔2〕。榕树叶水提物干浸膏作为
主成分的咳特灵胶囊收载于《中华人民共和国卫生
部药品标准》(中药成方制剂第十四分册)中。其中
有些药用成分对治疗心血管疾病、抗炎、抑菌等方面
都有显著效果〔1〕。中药血清药化是以血液中的有
效成分为研究对象，探讨中药药效物质基础。该方
法能够直观分析中药口服后在血液中的形态表现，
很大程度上简化了中药成分研究的复杂性，与此同
时，也极大地排除了非有效成分对生物活性测定的
影响。本文试图通过采用血清指纹图谱方法对榕树
叶逐渐引入以药效为导向的中药化学成分研究，跟
踪进行成分的分离，以期为后期的化学成分研究及
明确药效部位提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪(美国安
捷伦科技有限公司);HH-S 型恒温水浴锅(巩义市
予华仪器有限公司);80-2 型离心沉淀机(巩义市予
华仪器有限公司);IEC MICＲOMAX Microcentrifuge
(Thermo ELECTＲON COＲPOＲATION) ;AUW220D
型十万分之一电子天平(日本岛津公司);涡旋混合
器(天津药典标准仪器厂)。水为超纯水;磷酸、乙
醚为分析纯;95%乙醇为食用级;甲醇、乙腈为色谱
纯。
1. 2 材料 实验用榕树叶采自广州大学城穗石
村，经广东药学院中药学院生药学教研室刘基柱教
授鉴定为桑科榕属植物榕树 Ficus microcarpa L. f.
的叶。健康 SD 大鼠 33 只，体质量(400 ± 20)g，广
州中医药大学动物饲养中心提供，生产许可证号:
SCXK(粤)2008-0020。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Merck C18(250 mm × 4. 6
mm，5 μm)，Guard Column:XB-C18(5 μm，Welch Ma-
terials);流动相:0. 2%磷酸溶液(A)-乙腈(B)，梯度
·599·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 5 期 2015 年 5 月
洗脱(0 ～ 30 min，95% A;30 min，94% A;70 min，
93% A;90 min，92% A;100 min，91% A;110 min，
89% A;130 min，87% A;160 min，82% A;200 min，
80% A;205 min，95%A);流速:1. 0 mL /min;检测波
长:270 nm;柱温:35℃;进样量:20 μL。
2. 2 灌胃样品的处理 取新鲜阴干后榕树叶适
量，剪碎后水提，液料比 20∶ 1，回流提取 2 次，每次 2
h，浓缩至适当的相对密度后，静置冷却，按部颁标准
用 95%乙醇浓缩至含醇量为 80% ～ 85%，慢加快
搅，静置 24 h，抽滤，回收乙醇，称取浸膏量 20 g，用
0. 4% CMC-Na定容至 40 mL。供灌胃用。
2. 3 榕树叶水提物不同萃取层的制备 榕树叶水
提物 10 mL，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃
取，萃取液分别减压浓缩得到石油醚部位、乙酸乙酯
部位、正丁醇部位和水部位，分别用甲醇溶解并定容
至 10 mL，摇匀，作为储备液。
2. 4 受试大鼠给药方案以及时间点的采集 取 SD
大鼠，禁食不禁水 12 h，按照 1. 5 mL /100 g 体重，灌
胃榕树叶的水提物，分别于给药后 0 min、15 min、30
min、45 min、60 min、90 min、120 min、4 h、8 h、12 h、
24 h大鼠眼眦静脉丛取血。每 3 只大鼠每个时间点
取血 1 mL，合并 3 只大鼠的血清。将每次采集的血
样立刻转入小型用肝素润过的离心管中，在 4 000
r /min下离心 20 min，取上清液于 4 ℃保存，备用。
2. 5 血清样品处理 取含药血清 900 μL，加入 3
mL色谱甲醇，涡旋振荡器混合 1 min，混合液在 12
000 r /min下离心 15 min，吸取上清液，氮气吹干，残
渣加入 100 μL色谱甲醇复溶，涡旋 1 min，混合液于
12 000 r /min离心 15 min，取上清液作为含药血清
供试品，供 HPLC进样分析;同法操作制得空白血清
供试品。
2. 6 样品测定 取灌胃榕树叶水提物后 11 个时
间点的大鼠血清样品，进行 HPLC 分析检测。在同
一色谱条件下，各时间点血清的高效液相图谱见图
1，通过比较血清样品图谱中色谱峰发现 30 min 的
血清图谱中显示的峰数较多，峰值较高，故选择重复
多次灌胃后 30 min为最佳采血时间点。
2. 7 血清图谱分析 含药血清供试品图谱与榕树
叶原方以及各萃取层图谱比较结果见图 2，部分含
量高的药物成分吸收入血率较低，通过对比空白血
清，发现 7 个入血成分，在同一色谱条件下图谱显
示，入血成分在乙酸乙酯层均有，但是在正丁醇、水
层也有部分入血成分。入血成分可能为榕树叶的药
效成分，而正丁醇与乙酸乙酯的入血成分基本相似，
这也与陈艳芬等〔3〕研究的正丁醇与乙酸乙酯层均
有相同的镇咳、祛痰的作用一致，在这也可得到合理
的解释。
图 1 各时间点给药血清供试品的 HPLC图谱
S1. 空白血清 S2. 15 min S3. 30 min S4. 45 min S5. 60
min S6. 90 min S7. 120 min S8. 4 h S9. 8 h S10. 12 h
S11. 24 h
图 2 含药血清供试品、榕树叶总提物
以及各萃取层的 HPLC图谱
S1. 榕树叶总提物 S2. 石油醚层 S3. 乙酸乙酯层 S4.
正丁醇层 S5. 水层 S6. 30 min血清
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 预试验对比了两种波长
270、330 nm的吸收情况，结果 270 nm 下峰信号较
多且相对较强，故作为最适波长。
3. 2 色谱条件的选择与优化 为了获得较多的峰
数量和信号强度，预试验比较了甲醇-水、乙腈-水、
甲醇-乙腈-水、乙腈-磷酸溶液条件下色谱分离情况，
结果选择乙腈-磷酸溶液的梯度洗脱，通过反复摸索
和优化，在此条件下获得了较多的峰数和较好的峰
型。
参 考 文 献
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草
［M］．第二册 . 上海:上海科学技术出版社，1999:496-
497.
［2］韦锦斌，黄仁彬，林军，等 . 小叶榕水提物和醇提物止咳
平喘作用的比较研究［J］．广西中医药，2006，29(4):58-
59.
［3］陈艳芬，江涛，唐春萍，等 . 小叶榕不同提取物镇咳祛痰
作用的比较研究［J］．中医药导报，2010，16(7):98-99.
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