全 文 :黄蜀葵中活性成分含量测定
李 永,葛兆宏*,段琼辉,于生兰,李勇军,谈祥宇,王 丹
(江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州225300)
摘 要:目的:测定黄蜀葵中主要活性成分的含量。方法:采用硫酸-苯酚法测定多糖的含量,采用分光
光度法测定总黄酮的含量,采用 HPLC法测定槲皮素和金丝桃苷的含量。结果:黄蜀葵中多糖含量为
5.68%,总黄酮含量为1.577 5%,金丝桃苷和槲皮素含量分别为1.102%、0.404 1%。结论:黄蜀葵中
多糖、总黄酮、金丝桃苷、槲皮素等活性成分含量较高,所选的相应测定方法简便,结果可靠,可作为其质
量控制参考。
关键词:黄蜀葵;活性成分;含量测定;金丝桃苷;槲皮素;多糖;总黄酮
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1673-2197(2014)22-0016-03
收稿日期:2014-09-17
基金项目:江苏农牧科技职业学院大学生实践创新训练计划项目(201312806023X,201412806028X)
作者简介:李永(1980-),男,江苏农牧科技职业学院讲师,研究方向为中药学教育教学与科研。
通讯作者:葛兆宏(1954-),男,江苏农牧科技职业学院教授。
Content Determination of Active Constituents in Abelmoschi Corola
Li Yong,Ge Zhaohong,Duan Qionghui,Yu Shenglan,Li Yongjun,Tan Xiangyu,Wang Dan
(Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational Colege,Taizhou 225300,China)
Abstract:To determine the content of active constituents in Abelmoschi corola.Methods:The phenolμsulfuric acid method was em-
ployed to determine the content of polysaccharide,the method of spectrophotometry was employed to determine the content of total
flavonoids and the HPLC was used to determine the content of hyperfine and quercetin.Results:The content of polysaccharide in
Abelmoschi corola.is 5.68%,The content of total flavonoids in Abelmoschi corola.is 1.577 5%,The content of hyperfine in Abel-
moschi corola.is 1.102%,The content of quercetin in Abelmoschi corola.is 0.4041%.Conclusions:The content of active constitu-
ents in Abelmoschi corola.is higher.The methods are simple and can be adopted for the quality control of Abelmoschi corola.
Key Words:Abelmoschi Corola;Active Constituents;Content Determination;Hyperfine;Quercetin;Polysaccharide;Total Flavonoids
黄蜀葵始载于《嘉佑本草》,资源丰富,药用历史十分悠 久,在民间常用于治疗疔疮、腮腺炎、肺热咳嗽等,其根、茎
、
(3)流动相系统选择:本实验共考察了甲醇-水、
甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸等度和梯度洗脱,结果
表明采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱时分离效果较好。
综上所述,本研究建立的同时测定松塔中槲皮素与山
奈酚含量方法结果准确,重复性良好,对云南产几种松塔药
材的质量控制有实际应用价值,为进一步制定松塔药材的
质量标准提供了科学依据。
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(责任编辑:尹晨茹)
—61—
叶、花及种子等均可入药,药用最多的部位为花[1]。黄蜀葵
花为锦葵科植物黄蜀葵Abelmoschus manihot(L.)Medic.
的干燥花冠,夏、秋两季花开时采摘,及时干燥即得。其性
甘、寒,归肾、膀胱经,具有清利湿热、消肿解毒的功效,临床
用于湿热壅遏、淋浊水等症的治疗,外治痈疽肿毒、水火烫
伤等[2]。现代研究表明,黄蜀葵的主要化学成分为金丝桃
苷等黄酮类和多糖类成分,对肾炎、心肌损伤、脑缺血损伤
等具有较好的治疗效果[3-5]。江苏苏中药业集团股份有限公
司以黄蜀葵花为主要原料,生产研制的三类新药“黄葵胶
囊”已经上市,用于治疗肾炎、类风湿性关节炎等疾病。该
药疗效确切,市场前景看好,大力促进了江苏省泰州市黄蜀
葵种植业的蓬勃发展,目前在泰州市兴化、泰兴、姜堰、高港
等不同地区均有农户种植。为合理科学地评价黄蜀葵药材
的质量,笔者分别采用分光光度法和高效液相色谱法对泰
州市黄蜀葵花中的活性成分含量进行了测定,以期为该药
材的质量控制方法提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪:LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津,
SPD-21A型紫外检测器,N2000色谱工作站);UNIC 3802
双波长紫外-可见分光光度计;IKA HB10旋转蒸发仪;
HH-4数显恒温水浴锅;TDZ5台式低速离心机;BP211D电
子天平。
1.2 试药
硫酸、苯酚、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、磷酸、乙醇等
试剂均为分析纯;市售金丝桃苷(批号:111521-201205)对照
品、槲皮素(100081-200907)对照品;无水葡萄糖(批号:
110833-201205);芦丁(CEGP-4L70)购自中国食品药品检定
研究院;高效液相所用乙腈为色谱纯,水为超纯水(自制)。
黄蜀葵花药材采收自泰州地区黄蜀葵种植户,经江苏
农牧科技职业学院李勇军副教授鉴定为锦葵科植物黄蜀葵
Abelmoschus manihot(L.)Medic.的干燥花冠和花萼。药
材经低温干燥后,粉碎,过筛,得干燥粉末,备用。
2 方法与结果
2.1 黄蜀葵花中多糖含量测定[6]
2.1.1 葡萄糖标准曲线 精确称取标准葡萄糖溶液
(0.1mg/mL)0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL及1.0mL置于
容量瓶内,加入相应量的蒸馏水补至2.0mL,然后加入
50g/L苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL,迅速摇匀,置于沸水浴
中5min,后取出冷却至室温。于485nm 波长下测定吸光
值,以2.0mL水按同样显色操作作为空白。以葡萄糖浓度
为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,得多糖标准
曲线为Y=15.63X-0.006,r=0.999 5。结果表明葡萄糖
在0.01~0.05mg/mL浓度范围内与其吸光度值呈良好的
线性关系。
2.1.2 样品溶液制备 称取黄蜀葵花粉末适量,置于
50mL容量瓶中,加水40mL左右,于沸水浴上加热2h,冷却
至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余
下滤液供沉淀多糖用。准确吸取滤液5mL,至于50mL离
心管中,加无水乙醇20mL,混匀,静置5min,以3 000r/min
离心20min。弃去上清液,残渣用水溶解并定容至25mL,即
得。
2.1.3 样品含量测定 取0.5mL样品溶液置于容量瓶
中,以蒸馏水补至2.0mL,然后加入50g/L苯酚1.0mL及
浓硫酸5.0mL,迅速摇匀,置于沸水浴中5min,取出后流水
中冷却5min至室温。于485nm波长处测定吸光值,将吸光
度值代入葡萄糖标准曲线,得出黄蜀葵花中多糖含量为
5.68%。
2.2 黄蜀葵花中总黄酮含量测定[7]
2.2.1 芦丁标准曲线 精密量取芦丁标准液1mL、
2mL、3mL、4mL、5mL,置于试管中,加水至6mL,加1mL
5%NaNO2溶液,摇匀静置6min,再加1mL 10%Al(NO3)3
溶液,摇匀静置6min,加氢氧化钠试液10mL,加水定容至
25mL。以相应试剂为空白,静置15min后于510nm处测定
吸光值 A,以吸光值 A 为纵坐标,对照品质量浓度 C
(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。得芦丁标准曲线Y=
3.495X-0.016,r=0.999。结果表明芦丁在0.036 17~
0.180 83mg/mL质量浓度范围内与其峰面积积分呈良好的
线性关系。
2.2.2 样品溶液制备 称取黄蜀葵药材样品约1g,加
75%甲醇50mL,超声提取30min,过滤,残渣重复提取1次,
过滤,合并两次滤液置于水浴上蒸干,用甲醇溶解定容至
25mL,过滤,备用。
2.2.3 样品含量测定 准确吸取样品溶液2mL,按上述
硝酸铝法测定吸光度值,设置自身对照,进行测定。根据标
准曲线计算黄蜀葵中总黄酮的含量,结果得黄蜀葵花中总
黄酮含量为1.577 5%。
2.3 黄蜀葵花中槲皮素和金丝桃苷含量测定[8-9]
2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Kromasil
C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.4%磷酸
水溶液(B);洗脱条件:梯度洗脱:0~40min,体积分数
A10%~15%;40~60min,体积分数 A15%~40%;检测波
长:360nm;柱温:室温;流速:1.0mL/min;进样量:20μL。
理论塔板数应不低于3 000。
2.3.2 混合对照品溶液制备 精密称取金丝桃苷对照
品12.59mg,置于100mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容,作
为对照品储备液Ⅰ;精密称取槲皮素对照品12.76mg,置于
25mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容,作为对照品储备液Ⅱ。
精密吸取对照品储备液Ⅰ1mL、对照品储备液Ⅱ1mL于
5mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,作为混合对照品
溶液,按照上述色谱条件进样测定,结果见图1。
2.3.3 供试品溶液制备 取已经过60目筛的黄蜀葵药
材粉末1g,精密称定,置于250mL锥形瓶中,加入体积分数
70%乙醇约150mL,超声提取30min,放至室温,转移至
—71—
500mL容量瓶中,用体积分数70%乙醇定容,振摇均匀,取
适量溶液离心10min(12 000r/min),取上清液作为供试品
溶液。
2.3.4 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液
0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,依次用甲
醇稀释定容至1.0mL,分别精密吸取20μL溶液,按“2.3.1”
项下色谱条件,测定金丝桃苷和槲皮素峰面积。以对照品
溶液质量浓度X(μg/mL)为横坐标,峰面积积分值Y为纵
坐标,绘制标准曲线,得金丝桃苷回归方程Y=452.66X+
232.46,r=0.999 6;槲皮素回归方程 Y=474.93X+
134.45,r=0.999 8。结果表明金丝桃苷在5.036~50.36
μg/mL,槲皮素在5.104~51.04μg/mL质量浓度范围内与
各自峰面积积分呈良好的线性关系。
图1 混标HPLC色谱
注:1.金丝桃苷;2.槲皮素
2.3.5 加样回收率试验 取已知金丝桃苷和槲皮素含
量的样品6份,分别精密加入一定量的混合对照品溶液,按
照“样品含量测定”项下方法测定,计算加样回收率,测得金
丝桃苷和槲皮素平均回收率分别为101.17%和100.08%,
RSD分别为1.79%和0.59%。表明该测定方法符合要求。
2.3.6 样品中金丝桃苷和槲皮素含量测定 分别按
“供试品溶液制备”方法处理样品各3份,精密吸取供试品
溶液20μL,注入高效液相色谱仪测定,将所得峰面积代入
标准曲线,求得样品中金丝桃苷和槲皮素的含量分别为
1.102%、0.404 1%。见图2。
图2 黄蜀葵花样品HPLC色谱
注:1.金丝桃苷;2.槲皮素
3 讨论
黄蜀葵在我国历代医籍中均有记载,民间使用亦很普
遍。黄蜀葵全身都是宝,其茎皮纤维可替代麻制造人造棉;
种子、根和花可入药,具有清热解毒、凉血、消肿等功效,根
主要含有黏液质、淀粉和糖类等化学成分。现有文献对黄
蜀葵花中化学成分的报道较少,且主要集中在以金丝桃苷
和槲皮素为代表的黄酮类成分上,对其多糖类成分的报道
更少。多糖作为一种具有广泛药理活性的大分子物质,越
来越受到关注,而硫酸-苯酚法是较为理想的多糖含量测
定方法,因此笔者采用该法对黄蜀葵花中的多糖含量进行
了测定。实验结果表明,黄蜀葵中总多糖含量为5.68%。
本试验测定结果表明,黄蜀葵花中总黄酮含量为
1.577 5%,而金丝桃苷和槲皮素含量分别为1.102%、
0.404 1%,两者含量加和略低于总黄酮含量,究其原因可能
与总 黄 酮 测 定 方 法 有 关。有 文 献 报 道 采 用 NaNO2-
Al(NO3)3-NaOH显色法测定总黄酮时,槲皮素-3'-葡萄糖
苷、棉皮素-3'-葡萄糖苷和杨梅素这三种黄酮类化合物不显
色。因此在510nm处测定黄蜀葵花药材中总黄酮含量时,
这3种成分的含量就没有计入总黄酮含量中,且黄蜀葵花
中槲皮素-3'-葡萄糖苷含量较高,因此采用该法测得的总黄
酮含量略低。
综上所述,黄蜀葵中多糖、总黄酮、金丝桃苷、槲皮素等
活性成分含量较高,本研究所选的相应测定方法简便,结果
可靠,可作为其质量控制参考。
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(责任编辑:尹晨茹)
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