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民族药小白薇的抗炎活性成分的初步研究



全 文 :云 南 中 医 中 药 杂 志
* 基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目(NO:09Z0046)
作者简介:陈珠(1989 -)女,河南,研究方向:中药学。
△通信作者:毛晓健,Tel:13888820657
民族药小白薇的抗炎活性成分的初步研究*
陈 珠,陈海丰,杨彩霞,林玉萍,毛晓健△
(云南中医学院,云南 昆明 650500)
摘要:目的 研究小白薇各种提取物对小鼠的炎症模型的影响,以明确小白薇抗炎活性的有效部位。方法 用棉球植入小
鼠体内的方法测肉芽的重量;用二甲苯致耳肿胀的方法测耳廓肿胀率。结果 醋酸泼尼松对照组和 50%醇提物高、低剂量组对
二甲苯所致小鼠耳肿胀有极为显著的抑制作用(P < 0. 01),其余各给药组作用均不显著;各给药组除醋酸泼尼松组、正丁醇高剂
量组外均能显著抑制肉芽组织增生而有显著的抗炎作用;各给药组对小鼠胸腺、脾脏无明显影响,阳性对照组醋酸泼尼松能显著
降低小鼠胸腺指数和脾脏指数,有免疫抑制作用。结论 小白薇提取物对炎症早期,毛细血管通透性增高时的抑制以 50%醇提
物作用显著,小白薇各提取物对炎症晚期肉芽组织增生有显著的抑制作用。
关键词:小白薇;提取物;抗炎;耳廓肿胀;肉芽组织
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1007 - 2349(2015)08 - 0068 - 03
A Preliminary Study of National Anti - Inflammatory Active Ingredients of Tylophora Yunnanensis
CHEN Zhu1,CHEN Hai - feng2,YANG Cai - xia1,2,LIN Yu - ping2,MAO Xiao - jian2,3
(1. School of Postgraduate Students,Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,Yunnan;
2. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,Yunnan)
【Abstract】Objective:To study the effect of various extracts of Tylophora yunnanensis on mouse anti - inflammation model to assure
the effective parts of its anti - inflammatory activity. Methods:Mice were implanted into cotton balls to measure the weight of granulation.
Xylene - induced ear swelling in mice was used to measure the rate of ear swelling. Results:A prednisone control group and high - dose
and low - dose groups of 50% ethanol extract had a significant inhibitive effect (P < 0. 01)on xylene - induced ear swelling in mice. The
rest of medication administration groups had no significant effect. Except the prednisone control group and N - butyl alcohol high dose
group,each medication group could significantly inhibit proliferation of granulation tissue and had significant anti - inflammatory effect. All
the medication groups had no significant effect on the thymus and spleen of the mice. The prednisone of the positive control group could sig-
nificantly reduce the thymus index and spleen index,with immunosuppressive effect. Conclusion:The extracts of Tylophora yunnanensis
has a remarkable effect on early inflammation at 50% alcohol extract when the blood capillary permeability increases,and has obvious inhi-
bition effect on tissue proliferation of advanced stage of inflammation granulation tissue.
【Key words】Tylophora yunnanensis,extract,anti - inflammatory,ear swelling,granulation tissue
小白薇为萝摩科(Asclepiadaceae)植物云南娃儿藤(Tylo-
phora yunnanensis schltr)的根,别名白龙须、白薇、水辣子根、老
妈妈针线包、蛇辣子、白藤、娃儿藤、羊角草、中西林[1]。主产
于云南、贵州和四川,生长于海拔 2000 m以下山坡、向阳旷野
及草地上[2]。根及根茎供药用,有除虚烦、清热散肿、生肌止
痛之效[3],亦为彝族习用药物,彝医常用小白薇单味水煎服,
治疗气虚无力、肾炎,民间常用其治疗尿路感染、肾炎、痢疾、
肝炎等[4]。为明确小白薇抗炎活性的有效部位和有效成分,
小白薇分别以水、95%乙醇、50%乙醇、正丁醇、氯仿将小白薇
提取物分成五个极性段,通过小鼠耳廓肿胀、棉球肉芽肿炎模
型,以筛选抗炎活性,明确抗炎的有效部位,对小白薇抗炎作
用做出初步评价,以期为临床应用和我省民族药资源开发提
供一定的实验依据。本研究来源于云南省教育厅科学研究基
金项目《小白薇的抗炎活性成分的研究》的课题,现报道如下:
1 实验材料
1. 1 药材 小白薇提取物:水提取物、50%乙醇提取物、95%
86 2015 年第 36 卷第 8 期
DOI:10.16254/j.cnki.53-1120/r.2015.08.036
云 南 中 医 中 药 杂 志
乙醇提取物、正丁醇提取物、氯仿提取物。由课题组提供。
1. 2 实验动物 昆明种小白鼠,体重 18 ~ 22 g,雄性。均购
自昆明医学院实验动物中心。实验动物生产许可证号:动物
SCXK(滇 2011 - 0004)SPF级;饲料:SCXK(滇 2011 - 0005)。
1. 3 实验器材及试剂 器材:手术剪刀,镊子,手术针、线,注
射器,小鼠固定板、线,脱脂棉,棉签,手套,口罩等。
试剂:75%乙醇,碘酒,乙醚,二甲苯等均为市售分析纯试
剂;注射用头孢拉定粉针剂(批号:100306)、生理盐水。
阳性药:醋酸泼尼松(批号:101132;浙江仙琚药业有限公
司)。
2 试验方法及结果
2. 1 药液制备及给药方法 将各种提取物放入蒸发皿中在
水浴锅上挥发,将溶剂挥发干,准确称取,放入研钵中研成粉
末,适当的加入可溶性淀粉,再将其配置成混悬液,以备给药。
阳性药:醋酸泼尼松(5 mg /片),临用时取一片药,放入研钵中
研细后配成 20 mL的混悬液,以备给药。
分组给药剂量:实验动物均随机分为 12 组,即每个提取
组分的高、低剂量组,阳性对照组,空白对照组。高、低剂量组
给药剂量按体表面积折算,各极性段溶剂提取物按原生药材
10 g /d,低剂量组为等效剂量,高剂量组为等效剂量的 3 倍。
阳性药对照组选用醋酸泼尼松作为阳性药,给药剂量按体表
面积折算,为人用量等效剂量。空白对照组给予同体积生理
盐水。剂量见表 1。
表 1 小白薇不同提物给药剂量 (g /kg)
剂量组
95%醇
提物
50%醇
提物
水提物
氯仿
提取物
正丁醇
提取物
高剂量组 2. 52 0. 33 1. 35 0. 258 0. 0338
低剂量组 0. 84 0. 11 0. 45 0. 086 0. 011
均灌胃给药,各药均配成 0. 2ml /10 g的混悬液,根据小鼠
的体重,准确计算每只小鼠的给药剂量,每天 1 次,按时、准确
给药,同时密切观察、记录动物的情况。
2. 2 抗炎实验
2. 2. 1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[5] 取雄性昆明
种小白鼠 144 只,体重 18 ~ 22 g,分组及给药剂量如表 1 所示,
随机分为 12 组,每组 12 只,灌胃给药,每天 1 次,连续 10 天。
第 10 天给药半小时后用二甲苯 0. 05 mL /只,涂于小鼠右耳廓
致炎。致炎 30 min 后颈椎脱臼处死小鼠,立即用 7 mm 打孔
器取左右耳片,电子天平称重。计算肿胀率[肿胀率 =(右耳
片重—左耳片重)/左耳片重;× 100%],并各组间进行比较。
经统计比较,见表 2。
表 2 小白薇提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
组别
动物数
(只)
剂量
(g /kg)
肿胀率%
(x ± s)
空白组
醋酸泼尼松组
水提高
水提低
95%醇提高
95%醇提低
50%醇提高
50%醇提低
正丁醇高
正丁醇低
氯仿高
氯仿低
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
等容积 NS
0. 005
1. 35
0. 45
2. 52
0. 84
0. 33
0. 11
0. 34
0. 11
0. 26
0. 086
150. 18 ± 39. 13
76. 63 ± 35. 25**
134. 05 ± 33. 25
129. 86 ± 33. 08
142. 19 ± 32. 35
144. 34 ± 21. 01
95. 83 ± 44. 43**
102. 17 ± 47. 10**
119. 0 ± 55. 54
122. 8 ± 46. 72
117. 87 ± 36. 08
135. 2 ± 44. 77
注:与空白组比较,**P < 0. 05
结果表明:与空白对照组比较,醋酸泼尼松对照组和 50%
醇提高、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有极为显著的抑
制作用(P < 0. 01),其余各给药组作用均不显著。
2. 2. 2 对小鼠肉芽组织增生的影响[6] 雄性小鼠,18 ~ 22 g,
随机分为 12 组,每组 12 只。乙醚麻醉下,左右鼠蹊部消毒后
剪开 1 cm长的小口,一血管钳扩充皮下组织,用镊子将重量
为 10 mg的灭菌棉球植入皮下,然后缝合,必要时可加青、链
霉素 0. 2 mi以防感染,手术次日开始灌胃给药,联系 10 天,第
11天处死小鼠,打开原切口,将棉球连同周围结缔组织一起取
出,剔除脂肪组织,放烘箱中 60 度 12 h烘干称重,将称得的重
量减去棉球原重量即得肉芽肿的重量。结果见表 3 所示。
表 3 小白薇提取物对小鼠肉芽组织的影响
组别
动物数
(只)
剂量
(g /kg)
肉芽干重
(x ± s)
空白组
醋酸泼尼松组
水提高
水提低
95%醇提高
95%醇提低
50%醇提高
50%醇提低
正丁醇高
正丁醇低
氯仿高
氯仿低
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
等容积 NS
0. 005
1. 35
0. 45
2. 52
0. 84
0. 33
0. 11
0. 34
0. 11
0. 26
0. 086
0. 025 ± 0. 0028
0. 023 ± 0. 0027
0. 013 ± 0. 0011**
0. 012 ± 0. 00059**
0. 014 ± 0. 0019**
0. 013 ± 0. 0017**
0. 014 ± 0. 0025**
0. 020 ± 0. 0063*
0. 022 ± 0. 0043
0. 019 ± 0. 0054**
0. 011 ± 0. 0032**
0. 014 ± 0. 0036**
注:与空白组比较,**P < 0. 01;* P < 0. 05
962015 年第 36 卷第 8 期
云 南 中 医 中 药 杂 志
结果表明:与空白组比较,各给药组除醋酸泼尼松组、正
丁醇高剂量组外均能显著抑制肉芽组织增生而有显著的抗炎
作用。
2. 2. 3 对小鼠胸腺和脾脏的影响[7] 将 2. 2. 1 试验取耳后
的小鼠,迅速剖腹,取出胸腺和脾脏,用电子天平称其鲜重并
计算胸腺指数和脾脏指数[胸腺(脾脏)指数 =胸腺(脾脏)重
量(g)/10(g)体重],经统计比较结果见表 3:
表 4 小白薇提取物对小鼠胸腺、脾脏的影响
组别
动物数
(只)
剂量
(g /kg)
体重(g)
(x ± s)
脾脏指数(g /10 g
体重)(x ± s)
胸腺指数(g /10 g
体重)(x ± s)
空白组
醋酸泼尼松组
水提高
水提低
95%醇提高
95%醇提低
50%醇提高
50%醇提低
正丁醇高
正丁醇低
氯仿高
氯仿低
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
等容积 NS
0. 005
1. 35
0. 45
2. 52
0. 84
0. 33
0. 11
0. 34
0. 11
0. 26
0. 086
31. 45 ±2. 47
29. 26 ±1. 66
30. 39 ±1. 62
31. 24 ±2. 66
31. 26 ±2. 22
30. 42 ±2. 04
32. 5 ±2. 17
32. 03 ±2. 00
30. 57 ±1. 90
31. 1 ±2. 40
32. 61 ±2. 61
31. 79 ±2. 28
0. 11 ±0. 039
0. 077 ±0. 0098**
0. 12 ±0. 029
0. 12 ±0. 024
0. 13 ±0. 021
0. 13 ±0. 048
0. 14 ±0. 067
0. 12 ±0. 013
0. 13 ±0. 022
0. 14 ±0. 044
0. 13 ±0. 028
0. 13 ±0. 030
0. 078 ±0. 019
0. 026 ±0. 0073**
0. 080 ±0. 038
0. 086 ±0. 022
0. 073 ±0. 014
0. 083 ±0. 0097
0. 090 ±0. 018
0. 091 ±0. 016
0. 075 ±0. 025
0. 075 ±0. 017
0. 078 ±0. 016
0. 078 ±0. 017
注:与空白组比较,**P <0. 01
结果表明:与空白组比较,各给药组对小鼠胸腺、脾脏无
明显影响,阳性对照组醋酸泼尼松能显著降低小鼠胸腺指数
和脾脏指数,有免疫抑制作用。
3 结论与讨论:
本次研究初步得到以下结论:小白薇提取物对炎症早期,
毛细血管通透性增高时的抑制以 50%醇提物作用显著,其他
各提取物有一定的抵制趋势,但作用不显著;小白薇提取物除
正丁醇高剂量组外,对炎症晚期肉芽组织增生有显著的抑制
作用。各给药组对小鼠胸腺、脾脏无显著影响。但本次实验
只针对小鼠耳肿胀和肉芽组织增生炎症早期和晚期指标做了
小白薇的抗炎活性成份的初步研究,对于炎症中期如白细胞
游走等指标的影响,有待进一步研究。本次实验中也发现,各
给药组对小鼠胸腺、脾脏无显著影响,即其对小鼠免疫无抑制
作用,与其用于治疗气虚无力的临床应用是相符的。
据报道,娃儿藤生物碱有显著的抗癌活性。从娃儿藤中
提取出的娃儿藤总碱、娃儿藤宁定和娃儿藤宁在组织培养、抗
白细胞指数测定和精原细胞法中均显示有抗肿瘤活性。在亚
急性毒性试验中,发现该药具有明显降低白细胞的作用,因而
推想其可能有抗白血病作用[8];娃儿藤片具有镇咳、祛痰、平
喘作用,可治疗慢性支气管炎,尤其对喘息型慢性支气管炎有
一定的远期疗效[9];王远兴等报道了卵叶娃儿藤总生物碱对
宫颈癌细胞株 HeLa的增殖有强烈的抑制作用,呈现出细胞缩
小、核浓缩、细胞质红染及细胞质内空泡等典型的凋亡现
象[10],具体的作用机理尚需要进一步研究。娃儿藤属我国仅
产 31 种,大多数资源贫乏,而鹅绒藤属为萝藦科种类最多的
属,从鹅绒藤属植物中寻找菲骈吲哚里西啶生物碱为国内今
后开发该类抗癌剂资源的一条重要途径[11]。故对小白薇值
得做更深一步的研究。
参考文献:
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(收稿日期:2015 - 0 - 15
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