全 文 ：第 34卷　第 2期 林　业　科　技 Vol.34　No.2
2 0 0 9年 3月 FORESTRYSCIENCE＆ TECHNOLOGY Mar.　 2 0 0 9
文章编号:1001-9499 (2009)02-0023-03
喜树叶提取物的抗菌活性研究＊
毛胜凤　雷应飞　薛　勇　张立钦
(浙江林学院 , 临安　 311300)
摘要:采用滤纸片法研究喜树叶乙醇提取物和水提物对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)、 大肠杆菌
(Escherichiacoli)、 枯草杆菌 (Bacillussubtilis)、 八叠球菌 (Sarcinaventriculi)、 黑曲霉 (Aspergilusniger)、 木霉
(Trichodermavirid)和青霉 (Peniciliumchrysogenum)的抗菌活性。结果表明 , 喜树叶乙醇提取物和水提物对细
菌有明显的抑制作用 , 浓度越大抑制效果越好;喜树叶乙醇提取物对 3种霉菌都有抑菌效果 , 水提物对霉菌没
有抑制作用。
关键词:喜树叶;提取物;抗菌活性
中图分类号:S789.4, R284　　　　文献标识码:A
　　植物源农药与化学农药相比具有低毒 、 无残
留 、选择性高 , 不易使害虫 、 病菌产生抗药性的
特点 , 是一种与环境有良好相容性的新型环保农
药 [ 1] 。植物源杀菌剂是利用植物内含有的某些抗
菌物质 , 杀死或有效抑制病原菌的生长发育 [ 2] 。
喜树产于江苏南部 、 浙江 、 福建 、 江西 、 湖南 、
湖北 、 四川 、贵州 、 广东 、 广西等省区 , 分部较
广 , 其所含有抗肿瘤作用的生物碱———喜树碱 ,
具有抗癌 、 清热杀虫的功能 [ 3] 。以喜树提取物作
为杀菌剂的研究目前还不是很多 , 本研究主要是
针对喜树叶内含物设计不同的提取方案 , 并对所
得到的不同提取物进行杀菌测试 , 以确定喜树提
取物的杀菌活性 。
1　材料和方法
1.1　材料
喜树叶采自浙江林学院 , 干燥 、 粉碎 , 60目
过筛 , 备用 。供 试菌 种:金黄 色葡 萄球 菌
(Staphyloccocusaureus)、 大 肠杆菌 (Escherichia
coli)、 八叠球菌 (Sarcinaventriculi)、 枯草杆菌
(Bacilussubtilis)、青霉 (Peniciliumchrysogenum)、
黑曲霉 (Aspergilusniger)、 木 霉 (Trichoderma
viride), 以上菌种均由浙江林学院森林保护学科微
生物实验室提供。
1.2　主要仪器
DJ灵巧粉碎机 、生物显微镜 、 旋转蒸发仪 N
-1001、 循环水式多用真空泵 、 LRH-250A生化
培养箱 、 LDZX-40AI型立式全自动高压蒸汽灭菌
锅 、超净工作台 、超声波清洗器。
1.3　抗菌活性测定
1.3.1　供试样品的制备 [ 4]
乙醇超声波提取:取干燥喜树粉样品 100g,
加入 95%乙醇 400mL, 倒入锥形瓶中 , 用超声波
超 40min, 过滤 , 重复 3次 , 合并滤液 , 旋蒸浓
缩 , 得到提取物 。
煮沸法提取:取干燥喜树粉样品 100g, 加入
1000mL水在锅中煮沸 1h, 过滤 , 重复 3次 , 合
并滤液 , 旋蒸浓缩 , 得到提取物。
1.3.2　供试菌种的培养基
马铃薯培养基 (PDA培养基):马铃薯 200g
去皮 , 切成块煮沸 30min, 然后用纱布过滤 , 取
滤液加葡萄糖 20g和琼脂 15 ～ 20g, 溶化补足水至
1000mL, 继续加热待琼脂和葡萄糖溶解后 , 装入
锥形瓶中 , pH自然 , 121℃灭菌 30min。
牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏 5g、 蛋白胨
10g、 NaCl5g、 琼脂 15 ～ 20g, 将它们加入到
1000mL水中 , 加热至固体 , pH调至 7.2 ～ 7.4,
＊ 浙江省科技厅资助项目 (2005C12022);浙江省新苗人才计划 (2007R40G2100021)
林　业　科　技 第 34卷
装入锥形瓶中 , 121℃灭菌 20min。
1.3.3　试验方法 [ 5]
琼脂扩散滤纸片法测定抑菌圈直径大小:在
无菌条件下 , 倒入冷却至 45℃的培养基 , 每皿培
养基量 10 ～ 15mL。在无菌条件下 , 按不同的菌
种 , 用灭过菌的移液管吸取 0.1 mL菌悬液 , 并注
入相应的培养皿中 , 用无菌玻璃推棒推匀 。用无
菌镊子夹取浸泡在不同浓度提取物内的滤纸片 ,
提取物的质量浓度分别为 100、 50、 25、 12.5、
6.25、 3.125、 1.563、 0.781mg/L, 滤去多余的汁
液后放入培养皿中 , 每皿放 3片 , 呈正三角形放
置 。将以上培养皿放入培养箱中培养 , 细菌 37℃
下培养 , 24h;真菌 28℃下培养 , 72h, 测量抑菌
圈大小 。
最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度
(MBC)测定 [ 6] :用二倍稀释法将乙醇提取物 、
水提物分别稀释成 100、 50、 25、 12.5、 6.25、
3.125、 1.563、 0.781mg/L浓度 , 在各个平皿内
分别用 2mL移液管移入不同浓度的提取液 , 每个
浓度重复 3皿 , 然后倒入约 15mL左右已经高温灭
菌的培养基充分混匀 , 冷却凝固后 , 每皿加入
0.1mL菌悬液 , 然后用无菌涂布器涂布均匀 , 培
养 (方法同上)。取出结果观察 , 以 24h不长菌的
提取液浓度为 MIC, 48h不长菌的提取液浓度为
MBC。
2　结果与分析
2.1　喜树叶不同提取方式的提取物对 4种细菌和
3种真菌的抑制作用
从表 1可以看出 , 喜树叶乙醇提取物对金黄
色葡萄球菌有明显的抑菌效果 , 随着浓度的增加 ,
抑菌效果也相应的增加 , 在浓度为 25、 50、
100mg/L时 , 抑 菌圈大小达 到 9.54、 12.61、
15.71cm;对八叠球菌的效果次之 , 在浓度为 25、
50、 100mg/L时 , 抑菌圈大小分别为 9.47、 8.02、
11.66cm;在 25、 50、 100mg/L浓度时 , 对枯草
杆菌的抑菌圈大小达到 5.48、 8.10、 8.28cm;但
对大肠杆菌基本没有抑菌作用 。喜树叶乙醇提取
物对黑曲霉 、木霉和青霉的生长有一定的抑制作
用 。
表 1　喜树叶乙醇提取物的抑菌活性 cm
提取物浓度
/mg· L-1
金黄色
葡萄球菌
枯草
杆菌
八叠
球菌
大肠
杆菌 黑曲霉 木霉 青霉
0.781 - 5.32 5.73 - - 6.18 -
1.562 - 5.81 5.76 - 5.09 8.17 5.73
3.125 5.42 5.30 5.39 - 5.37 6.52 -
6.25 5.82 5.65 - - - - 7.11
12.5 6.37 5.83 6.40 - - 6.55 8.46
25 9.54 5.48 9.47 - 11.98 5.34 6.21
50 12.61 8.10 8.02 - 12.85 5.61 7.54
100 15.77 8.28 11.66 - 14.39 8.11 16.14
　注:-表示无抑菌效果
从表 2可以看出 , 喜树叶水提物对金黄色葡
萄球菌有相当明显的抑菌作用 , 并且在高浓度时
效果更加明显 , 浓度为 25、 50、 100mg/L时 , 抑
菌圈大小达到 10.00、 13.96、 15.25cm。在高浓
度时对八叠球菌有抑菌作用外 , 对枯草杆菌和大
肠杆菌没有什么效果。喜树叶水提物对 3种真菌
没有任何效果。
表 2　喜树叶水提物的抑菌活性
cm
提取物浓度
/mg· L-1
金黄色
葡萄球菌
枯草
杆菌
八叠
球菌
大肠
杆菌 黑曲霉 木霉 青霉
0.781 5.28 5.15 - - - - -
1.562 7.08 - - - - - -
3.125 5.20 - - - - - -
6.25 - - - - - - -
12.5 5.42 - - - - - -
25 10.00 - 5.34 5.25 - - -
50 13.96 5.10 7.38 - - - -
100 15.25 - 6.45 - - - -
　注:-表示无抑菌效果
　　从试验结果看 , 喜树叶乙醇提取物比水提物
具有更好的抑菌 、 抗菌作用。 2种提取物都对金
黄色葡萄球菌有明显的抑菌作用 , 且随着提取物
浓度的增加 , 抑菌效果更好。
2.2　喜树叶提取物的 MIC和 MBC
由表 3可见 , 喜树叶水提物和乙醇提取物对 7
种供试菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度不一致 ,
喜树叶的 2种提取物对细菌有杀菌作用而对霉菌
没有杀菌作用 , 其中乙醇提取物的杀菌效果比水
提物的杀菌效果更好 。
24
第 2期 毛胜凤等:喜树叶提取物的抗菌活性研究
表 3　不同提取物的最小抑菌浓度和杀菌浓度 mg/L
菌种 最小抑菌浓度乙醇提取物 水提取物
最小杀菌浓度
乙醇提取物 水提取物
金黄色葡萄球菌 1.562 0.781 3.125 6.25
枯草杆菌 0.781 - 3.125 -
八叠球菌 0.781 25 3.125 25
大肠杆菌 - - - -
黑曲霉 25 - - -
木霉 0.781 - - -
青霉 1.562 - - -
　注:-表示无杀菌效果
3结　论
3.1　两种不同的喜树叶提取物中 , 乙醇提取物
对金黄色葡萄球菌 、 大肠杆菌 、八叠球菌 、 枯草
杆菌 、 青霉 、 黑曲霉 、 木霉的抑菌活性要比水提
物更好 。通过抑圈直径的比较 , 喜树叶 2种提取
物对细菌的抑制效果都随着提取物浓度的增大而
增强;对于霉菌 , 2种提取物的抑制效果与浓度
不成比例 , 乙醇提取物对不同霉菌都有各自的最
佳抑菌浓度 , 喜树叶水提物对 3种霉菌没有任何
抑制作用。
3.2　喜树是速生树种 , 一直以来都在开发其药用
方面的价值 , 而对植物源农药方面却没做什么研
发 。本次试验只选择部分具有代表性的菌种作为
研究对象 , 继续扩大研究对象 , 以获取比较全面 、
有更高研究价值的杀菌谱 。对于杀菌作用来说 ,
更重要的是其在活体上的抑菌活性 , 本试验只以
培养基上的菌作为研究对象 , 在以后的试验中应
进一步开展测定活体抑菌效果的研究。
参 考文 献
[ 1] 　叶正楚 , 王契.中国农业害虫生物防治及防治概况与进展
[ J].昆虫知识 , 1992, 29 (3):179-182.
[ 2] 　姜瑞平 , 任跃英.植物源农药的研究 [ J] .人参研究 ,
2006 (1):7-9.
[ 3] 　中国树木志编委会.中国主要树种造林技术 [ M] .北京:
中国林业出版社 , 1983.
[ 4] 　毛胜凤 , 张立钦 , 张健 , 等.马尾松叶提取物的抗菌活性
[ J].浙江林学院学报 , 2008, 23 (3):359-362.
[ 5] 　殷舒 , 毛胜凤, 杨琼霞 , 等.山核桃叶片提取物的抑菌作
用 [ J].浙江林学院学报 , 2007, 24 (5):604-607.
[ 6] 　崔艳秋 , 南蓬, 林满红 , 等.园柏和龙柏主要挥发物及其
抑菌和杀菌作用 [ J] .环境与健康杂志 , 2006, 23 (1):
63-65.
　　第 1作者简介:毛胜凤 (1974 -), 女 , 硕士 , 高级
实验师 , 主要从事森林保护和微生物研究。
收稿日期:2009-01-07
AntimicrobialActivityofExtractsofCamptotheciaacuminataLeaves
MAOShengfeng
(ZhejiangForestryColege, Linan　311300)
Abstract　Thediscdifusionassaywasperformedtoevaluatetheantimicrobialactivityofethanolic
extractandaqueousextractofCamptotheciaacuminataleavesagainstfourbacteriaStaphylococcusaureus,
Escherichiacoli, BacilusSubtilis, Sarcinaventriculi, Trichodermaviride, Peniciliumchrysogenumand
Aspergilusniger.Al extractsshoweddiferentresistingefectsonbacteriaaccordingtotheir
concentrations.Thereistanceefectsofdiferentextractsonfungiwasnotsimilartothatofbacteria.
Amongthetwokindofextracts, thehighestresistingefectswasfoundintheethanolicextractandthe
lowestwasfoundintheaqueousextrasct.
Keywords　LeafofCamptotheciaacuminata;Extract;Antimicrobialactivity
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