全 文 ：好的线性关系(r = 0． 999 9)。
2． 5 精密度试验 在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液和贵
州乌当供试品溶液各 10μl，分别注入高效液相色谱仪，各测定 5
次，对照品和供试品溶液中绿原酸峰面积的 ＲSD 分别为 1． 01%
和 0． 16%，结果表明精密度良好。
2． 6 稳定性试验 在上述色谱条件下，分别于 0，2，4，8，12，24 h，
精密吸取对照品和贵州乌当供试品溶液各 10μl，注入高效液相
色谱仪，测定。对照品和供试品溶液中绿原酸峰面积的 ＲSD 分
别为 1． 78%和 1． 02%。结果表明对照品和供试品溶液至少在 24
h内测定结果稳定。
2． 7 重复性试验 取贵州乌当本品粗粉 0． 5 g，精密称定，共 5
份，按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，以“2． 1”项下色谱条件，
精密吸取 10 μl 注入色谱仪，测定，计算绿原酸含量。结果表明
绿原酸平均含量为 4． 21%，ＲSD = 0． 91%，本方法重复性良好。
2． 8 回收率试验 取已知绿原酸含量的药材粗粉 0． 5g，精密称
定，共称取 9 份，分别置具塞锥形瓶中，各加入一定量的绿原酸对
照品，按供试品制备方法制成供试品溶液，并按含量测定方法进
行测定。结果表明绿原酸平均回收率为 99． 98%，ＲSD = 0． 41%，
该测定方法测定结果准确。
2． 9 样品测定 按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，再按“2． 1”
项下色谱条件测定绿原酸含量，结果见表 1。
表 1 不同产地金银花中绿原酸含量 %
产地 绿原酸含量 平均含量
贵州乌当 4． 21
贵州修文 3． 79
贵州息烽 2． 97 3． 99
贵州绥阳 4． 98
贵州安龙 4． 01
n = 3
3 讨论
在这 5 个产地收集的药材均含有绿原酸，且含量符合要求
(≥1． 5%)。其中，贵州绥阳产金银花中绿原酸的含量最高。
据报道，金银花中绿原酸含量与采收期密切相关，具体的关
系还有待进一步的研究。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典，一部［S］．北京:中国医药
科技出版社，2010:205．
［2］ 刘 琪．金银花化学成分及药理作用分析［J］． 科技创新与应用，
2012，2(4):45．
［3］ 王天志．金银花的研究进展［J］．华西药学杂志，2000，15(4):292．
收稿日期:2013-10-26; 修订日期:2014-05-01
基金项目:国家科技支撑计划( No． 2011BAI13B06) ; 国家自然科学基金( No． 81102894) ;第四次全国中药资源普查项目( No． 20120716 － 540000) ;西藏
自治区科技厅重大专项( No． 2011 － 68 － 20)
作者简介:李连强( 1981-) ，男( 汉族) ，云南弥渡人，西藏大学农牧学院讲师，硕士学位，主要从事生物技术、濒危藏药材人工种植与示范的研究工作．
* 通讯作者简介:兰小中( 1973-) ，男( 汉族) ，四川大竹人，西藏大学农牧学院副教授，硕士学位，主要从事药用植物资源教学与研究工作．
一年生喜马拉雅紫茉莉根的产量
和 boeravinone C的动态变化
李连强1，权 红1，王莉莎1，蔡翠萍1，陈 敏2，兰小中1*
(1．西藏大学农牧学院，西藏 林芝 860000; 2．西南大学药学院，重庆 400715)
摘要:目的 确定一年生喜马拉雅紫茉莉的最佳采收时期。方法 利用 HPLC研究了不同采收期对一年生喜马拉雅紫茉
莉根的产量和 boeravinone C含量的影响。结果 林芝地区一年生喜马拉雅紫茉莉根的最佳采收时期是 9 月 20 日左右。
结论 为喜马拉雅紫茉莉的人工种植与示范提供指导，从源头上保证喜马拉雅紫茉莉药材的质量和产量。
关键词:喜马拉雅紫茉莉; Boeravinone C; HPLC; 动态变化
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 09． 080
中图分类号:S567 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 09-2236-03
Dynamic changes of yield and boeravinone C from root of annual Mirabilis himalaica
LI Lian-qiang1，QUAN Hong1，WANG Li-sha1，CAI Cui-ping1，CHEN Min2，LAN Xiao-zhong1*
( 1． Agricultural and Animal Husbandry College of Tibet University，Tibet 860000，China; 2． College of Pharma-
ceutical Science，Southwest Universit Chongqing，400715，China)
Abstract: Objective To determine the best harvest time of annual Mirabilis himalaica． Methods To study the influence of dif-
ferent harvesting time on the yield of root of M． himalaica and the content of boeravinone C by HPLC． Ｒesults The best harvest
time of annual M． himalaica in Linzhi region of Tibet is about September 20th． Conclusion To provide guiding for artificial plant-
ing and demonstration of M． himalaica ． To pursue quality and yield at the source of medicinal materials of M． himalaica．
Key words: Mirabilis himalaica; Boeravinone C; HPLC; Dynamic changes
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 9
喜马拉雅紫茉莉系紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉 Mirabilis
himalaica (Edgew．)Heimerl的根［1］，是传统藏药的五根之一［2］。
喜马拉雅紫茉莉是滋补酥油丸、巴桑母酥油丸、石榴日轮丸、二十
五味鬼臼丸等十余个具有国药准字号的藏药产品为主要原料之
一，年需求量约 50 万 kg［3］。本课题组近三年的调查发现，喜马
拉雅紫茉莉基本以杂草的形式零星分布于林芝、昌都、山南地区
和拉萨市的田间地头，随着藏医药事业的迅猛发展，喜玛拉雅紫
茉莉野生资源已经处于极度匮乏状态，被列为我区二级濒危藏药
材植物。本课题组经过近六年的不断摸索，已系统掌握了喜马拉
雅紫茉莉的人工种植关键技术，提高了喜马拉雅紫茉莉的产量，
改善了野生喜马拉雅紫茉莉资源匮乏的现状。
范海霞［4］通过硅胶柱层析、Sephadex LH － 20 和半制备
HPLC 等方法，从喜马拉雅紫茉莉根中分离得到了一种鱼藤酮类
化合物(rotenoids)－ boeravinone C(以下简称 Ｒ1)，并证实 Ｒ1 对
多种癌细胞株都有较强的抑制作用，提示 Ｒ1 可能是喜马拉雅紫
茉莉的主要活性成分之一。药材的主要活性成分的含量是影响
药材质量的首要因素，而主要活性成分往往受到采收期的影
响［5，6］。因此，开展不同采收期对人工种植的喜马拉雅紫茉莉根
产量和 Ｒ1 含量的研究对控制喜马拉雅紫茉莉药材质量就显得
十分重要，但目前尚未有类似报道。本研究拟通过 HPLC对本课
题组人工种植在西藏林芝地区八一镇章麦村藏药材人工种植与
示范基地的一年生喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的动态变化和产量
的研究，了解二者的变化规律，为喜马拉雅紫茉莉的人工种植与
示范提供指导，从源头上保证喜马拉雅紫茉莉药材的质量和产
量。
1 仪器与试药
岛津 LC － 20 高效液相色谱仪(A 泵:LC － 20AD、B 泵:LC －
20AD、DGU － 20A3Ｒ 在线脱气、SIL － 20A 自动进样器、柱温箱、
SPD － 20A紫外检测器)，Mettler toledo PL203 分析天平、Mettler
toledo B － S天平、BUCHI B － 491 旋转蒸发器、KQ5200 型超声波
清洗仪、高速多功能粉碎机 BL － 200 型。
喜马拉雅紫茉莉种子采自西藏大学农牧学院藏药材人工种
植与示范基地，经西藏大学农牧学院罗建副研究员鉴定为紫茉莉
科植物喜马拉雅紫茉莉 M． himalaica (Edgew．)Heimerl 的种子，
保存于西藏大学农牧学院分子生物学实验室内。
Boeravinone C对照品由西南大学药学院陈敏教授实验室自
制，HPLC色谱归一法测定纯度 ＞ 98%。甲醇为色谱纯，水为娃
哈哈纯净水，均经 0． 45 μm滤膜滤过。
2 方法
2． 1 栽培管理 在章麦村藏药材人工种植与示范基地内随机选
取一块耕地作为试验地。起垄，打成垄底宽 80 cm，垄顶宽 70 cm
的宽垅，每垄错位种植 2 行，穴距 35 cm 左右。选取黑色饱满的
喜马拉雅紫茉莉种子，5 月 28 日播种，每穴撒播喜马拉雅紫茉莉
种子 3 ～ 4 粒。出苗 3 周后间苗，每穴留二株长势基本一致的幼
苗。
2． 2 采收期设定 2012 年 7 月 10 日开始采样，采样间隔时间 10
d左右，共采收 11 次。采收期见表 1。
2． 3 色谱条件 Kromosil 100 － 5 C18柱(150 mm × 4． 6 mm，5 μm
);流动相为甲醇 －水(70∶ 30);流速 0． 8 ml·min －1;检测波长
294 nm，柱温 25 ℃。
2． 4 对照品及样品溶液的制备
2． 4． 1 对照品溶液的制备 精密称取烘干至恒重的 Ｒ1 对照品
4． 05 mg，用色谱纯甲醇定容至 25 ml，即得浓度为 0． 162 mg /ml
的 Ｒ1 对照品母液。取 Ｒ1 对照品母液 1 ml，用色谱纯甲醇定容至
5 ml，即得浓度为 0． 032 4 mg /ml的 Ｒ1 对照品溶液。
表 1 喜马拉雅紫茉莉根采收期及其编号
编号 采收日期 编号 采收日期 编号 采收日期
1 7 月 10 日 5 8 月 20 日 9 9 月 30 日
2 7 月 20 日 6 8 月 31 日 10 10 月 10 日
3 7 月 31 日 7 9 月 11 日 11 10 月 20 日
4 8 月 10 日 8 9 月 20 日
2． 4． 2 Ｒ1 标准曲线的绘制 取浓度为 0． 032 4 mg /ml的 Ｒ1 对照
品溶液，分别进样 1，3，5，7，9，12，15 μl(n = 3)，测定其峰面积。
2． 4． 3 样品溶液的制备 将每次采收的、烘干至恒重并保存于干
燥器内的喜马拉雅紫茉莉根样品混合后粉碎，过 100 目筛。精密
称取 1． 000 g左右样品，加入 20 ml甲醇浸泡数分钟，超声提取 2
次，每次 30 min，滤过。合并滤液，滤液用旋转蒸发仪蒸干后用
甲醇定容至 2 ml，经 0． 45μm滤膜滤过，滤液作为样品溶液。
2． 5 样品中 Ｒ1 含量测定 取上述样品溶液 5 μl 测定其峰面积。
根据峰面积，由 Ｒ1 的线性回归方程计算其 Ｒ1 的含量。对照品溶
液和样品溶液的 HPLC图见图 1。
A． Ｒ1 对照品 B．喜马拉雅紫茉莉根
图 1 Ｒ1 对照品及喜马拉雅紫茉莉根的 HPLC图
3 结果
3． 1 Ｒ1 标准曲线方程的建立 以 Ｒ1 的含量为横坐标、峰面积为
纵坐标，绘制标准曲线。Ｒ1 的线性回归方程为:Y = 4． 286 × 105X
－ 3． 997 × 103，Ｒ2 = 0． 999 9，线性范围为 0． 032 4 ～ 0． 486 0 μg。
3． 2 不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根干重 按照预先设计好的
采收期采收样品，采收时随机选取 4 株带回实验室冲洗干净，置
于烘箱内 60 ℃烘干至恒重，保存于干燥器内待用。每个采收期
样品的干重如图 2 所示。
3． 3 不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的动态变化 将每次
采收的、烘干至恒重并保存于干燥器内的喜马拉雅紫茉莉根样品
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 9 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 9 期
混合后粉碎后按“2． 4． 3”项下的方法制备样品溶液，进样量 5 μl
测定其峰面积。根据峰面积，由 Ｒ1 的线性回归方程计算其 Ｒ1 的
含量。不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的含量如图 3 所
示。从图中可知，喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的含量在整个生长季
节内呈双峰曲线，含量最高的第一个高峰出现在第二次采样时，
即 7 月 20 日，Ｒ1 含量达到 1． 35 mg /g 干重。第二个高峰出现在
9 月 20 日，Ｒ1 含量为 0． 71 mg /g 干重。从 7 月 20 日至 7 月 30
日，Ｒ1 含量急剧下降，可能是由于这段时期是幼苗地上部分生长
迅速，Ｒ1 作为一种保护性物质被转运至茎尖等幼嫩的部位所造
成的。从 7 月 30 日至 8 月 30 日，Ｒ1 的含量逐渐降低，但趋势较
为平缓。从 8 月 30 日至 9 月 20 日，Ｒ1 的含量稳步提高，可能是
由于这个时期地上部分生长速度趋缓，根的生长速度加快，地上
部分的 Ｒ1 又被转运回根中。从 9 月 20 日至 10 月 10 日，此阶段
根的生长趋缓，作为保护性物质的 Ｒ1 的含量也就逐渐降低。
图 2 不同采收期喜马拉雅紫茉莉根干重
图 3 不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的含量
3． 4 不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的产量变化 由于喜
马拉雅紫茉莉种植过程中采用起垄(垄宽 80 cm)双行(株距 35
cm)的模式，每穴留 2 株苗，据此估测，每 hm2 大约能种植143 000
株喜马拉雅紫茉莉苗。不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的
产量如表 2 所示。从表 2 可知，9 月 20 日采收的 Ｒ1 产量最高。
根据药用植物适宜采收期的确定原则，在活性成分含量高峰值时
期与经济产量高峰期时期不一致时，以二者成绩达到最大值时期
为适宜采收时期［7］。因此，以 Ｒ1 产量为导向，喜马拉雅紫茉莉
的最佳采收时期是 9 月中旬。
4 讨论
Ｒ1 对多种癌细胞株都有较强的抑制作用，提示 Ｒ1 可能是喜
马拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。本文以一年生喜马拉雅紫
茉莉为材料，研究了不同采收期对喜马拉雅紫茉莉根中 Ｒ1 的含
量和产量的影响，根据药用植物适宜采收期的确定原则，确定林
芝地区一年生喜马拉雅紫茉莉的最佳采收时期是 9 月中旬，其他
地区、不同生长年限的喜马拉雅紫茉莉的适宜采收期有待于进一
步研究。从图 3 和表 2 均可看出，7 月 20 日采收的喜马拉雅紫茉
莉的根中 Ｒ1 含量最高，但由于此时期根的生物量较小，综合含量
和产量两方面的因素，该时期不是最佳采收期。但以活性成分含
量较高的药材为原料提取该成分可以大幅度的降低提取纯化所
需的成本，因此，采用无土栽培的方式大量培育喜马拉雅紫茉莉
幼苗，并以幼根为材料提取 Ｒ1 可能是一个大胆的尝试。
表 2 不同采收期的喜马拉雅紫茉莉根的产量和 Ｒ1 的产量
采收期
根的产量
/kg·hm －2
根中 Ｒ1 含量
/mg·g － 1
Ｒ1 的产量
/ g
7 月 10 日 32． 032 0． 56 17． 938
7 月 20 日 72． 787 1． 35 98． 262
7 月 31 日 108． 823 0． 78 84． 882
8 月 10 日 192． 335 0． 18 36． 620
8 月 20 日 322． 608 0． 12 38． 713
8 月 31 日 524． 953 0． 05 26． 248
9 月 11 日 944． 249 0． 40 385． 7
9 月 20 日 1222． 65 0． 71 868． 082
9 月 30 日 1842． 126 0． 34 626． 323
10 月 10 日 2060． 058 0． 08 164． 805
10 月 20 日 2564． 276 0． 06 153． 857
本次试验由于未对喜马拉雅紫茉莉幼苗做任何施肥处理，喜
马拉雅紫茉莉根的亩产量不足 200 kg，在喜马拉雅紫茉莉生长的
中后期施适量的 P、K肥是否能提高其产量和 Ｒ1 的含量有待进
一步的研究。此外，喜马拉雅紫茉莉的传统药用部位是根，其茎
叶弃之不用，茎叶中是否含 Ｒ1 有待进一步研究。如果茎叶中含
有 Ｒ1，其药源将明显扩大，可以从一定程度上缓解喜马拉雅紫茉
莉根产量的不足。此外，藏药中一般以野生的多年生喜马拉雅紫
茉莉的根入药，生长年限对喜马拉雅紫茉莉根中的 Ｒ1 含量是否
有影响是一个值得深入研究的问题。
参考文献:
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 9