全 文 ：艹律草水提液多酚的含量测定与抗氧化性研究
戈群妹 , 王新风＊ , 杨 芳 , 陈珊珊 　(淮阴师范学院资源微生物研究所 ,江苏淮安 223300)
摘要　[目的]对艹律草风干样水提液中多酚类物质含量和体外抗氧化性进行测定,以期对合理开发利用艹律草资源价值 ,提供科学依据。[ 方法]
采用酒石酸铁法测定艹律草中多酚 ,利用改进的水杨酸法和邻苯三酚自氧化法对艹律草各部位的多酚提取液进行抗氧化性测定。[ 结果] 10月份采集的鲜叶中多酚含量最高,达到0.371±0.006mg/ g。提取的多酚抑制超氧阴离子自由基能力最高达到 69.750%,清除羟自由基能力最高达 65.
790%。[ 结论] 艹律草地上部各部位多酚提取液都具有一定的抗氧化作用,其中以叶含量最高,茎含量最低。
关键词　艹律草;多酚;抗氧化性
中图分类号　S567.21+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)09-04118-03
Study on the Content Determination of Polyphenol inWater Extracts from Humulus scanalens (Lour)Merr.and Its Antioxidant Activity
GE Qun-mei et al　(Institute of Resource Microorganism , Huaiyin Teacher s College , Huaian, Jiangsu 22330)
Abstract 　[ Objective] The research aimed to determine the content of polyphenol substance inwater extracts from air-dried samples of Humulus scanalens(Lour)
Merr.and its antioxidant ability in vitro and provide the scientific basis for reasonable exploitation and utilization of H.scanalens resources value.[Method] The
content of polyphenol was determined in H.scanalens by using ferrous tartrate method.The antioxidant abi lity of polyphenol extracts from different parts of H.
scanalens was determined by using salicylic acid methodand pyrogallol autoxidationmethod.[ Result] The content of polyphenol in the fresh leaves collected inOcto-
ber was the highest , reaching 0.371±0.006 mg/ g.The highest inhibition capabi lity of the extracted polyphenol to superoxide anion free radicals reached 69.750%
and the highest scavenging capacity to hydroxyl free radicals reached 65.790%.[ Conclusion] The polyphenol extracts from different overground parts of H.
scanalens had certain anti-oxidation , the content in the leaves was highest and that in the stems was lowest.
Key words　 Humulus scanalens(Lour)Merr.;Polyphenol;Antioxidant activity
基金项目　江苏省高校自然科学基础研究项目(07KJB350011);淮阴师
范学院教授基金项目(2008012)。
作者简介　戈群妹(1987-),女 ,江苏泗洪人 ,从事药用生物研究。 ＊
通讯作者。
收稿日期　2009-01-04
　　艹律草(Humulus scanalens(Lour)Merr.)是桑科艹律草属一年
生缠绕草本植物 ,野生于田间路边[ 1] 。艹律草有很高的经济价
值 ,全草可供药用 ,作清热解毒剂 ,主治肺结核 、下午低烧 、夜
眠出汁及消化不良;煎汤可洗痔疮 、脓胞疮 、脚趾溃疡;捣拦
敷患处对风湿关节炎及关节红肿有效。茎叶可治淤血 、血
痢 、伤寒;果实可健胃 、消疮 、治蛇咬等;秋季雄花吹散出大量
花粉 ,在保健品及药品的开发方面也有价值;艹律草茎皮强韧 ,
含纤维 43.64%;种子含油率 27.9%可作工业原料;全草还可
制农药 ,具杀蚜虫之功效[ 2] 。以艹律草为材料 ,测定不同月份
采集 ,植株地上部不同部位的烘干样水提取物中多酚类物质
的含量和提取液的抗氧化能力 ,以期为今后合理利用艹律草资
源提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料　分别于 2007年 8月和 10月在淮阴师范学院路
边采集新鲜无病斑和虫害的艹律草鲜样 ,经分类后洗净 ,60 ℃
烘干 ,粉碎过 100目筛 ,保存备用。
1.2　主要试剂和仪器　没食子酸丙酯(批号Q/ZTH001-98);
硫酸亚铁;酒石酸钾钠;磷酸氢二钠;磷酸二氢钾;邻苯三酚;
三羟甲基氨基甲烷。以上均为分析纯试剂。
T6新世纪紫外分光光度计(北京普析);TDL-5000B离心
机(海安亭科学医学仪器厂);电子天平 BS210S(北京赛多利
斯天平有限公司)。
1.3　方法
1.3.1　多酚类物质标准曲线的绘制。采用酒石酸铁法[ 3]以
没食子酸丙酯为标准品 ,用分光光度法 ,在 540 nm波长处 ,以
没食子酸丙酯标准液的浓度为横坐标 ,以其吸光度为纵坐标
作标准曲线 。
1.3.2 　艹律草中多酚类物质总量的提取与测定。精确称取艹律
草植株各部位干粉样各 1.000 0 g ,分别置于 200ml三角瓶
中 ,加入 100 ml沸水 ,水浴锅上 95±0.5 ℃恒温水浴提取 30
min ,冷至室温后 ,过滤 ,滤液定容至 100ml 。艹律草中多酚类物
质总量测定采用酒石酸亚铁法[ 3] 。
1.3.3　艹律草水提液对羟自由基清除率的测定[ 4-6] 。对羟自
由基的清除率测定采用水杨酸法。利用H2O2 与Fe2+混合产
生羟自由基(H2O2 +Fe2+※·OH+H2O+Fe3+),再在体系内加
入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质 ,该物质在 510 nm处
有最大吸收峰 ,用该吸光值来表示羟自由基的含量。反应体
系中含 1 ml 8.8mmol/L H2O2 浓度液 , 1ml 9mmol/L FeSO4 , 1
ml 9 mmol/L水杨酸-乙醇 ,待测溶液 1ml ,其中H2O2 是最后
加入并启动整个反应 , 37 ℃反应 0.5 h后 , 12 000 r/min离心 6
min ,然后以双蒸水作参比 ,在 510 nm下测定其吸光度值 。考
虑待测溶液本身的吸光值不同 ,以 1ml 9mmol/L FeSO4 , 1ml 9
mmol/L水杨酸-乙醇 ,待测溶液 1 ml和双蒸水 1ml作为待
测溶液的本底吸收值。每一吸光值平行测 3次 ,取其平均
值 ,结果用 x±sd 表示。清除率计算公式为:
清除率(%)=[ A0-(Ax-Ax0)]/A0 ×100
式中 A0 为空白对照液的吸光度 ,Ax为加入待测溶液后的吸
光度 ,Ax0为待测溶液的本底吸收值 。
1.3.4　艹律草水提取液对超氧阴离子自由基清除率的测
定[ 7-8] 。对超氧阴离子自由基的清除率测定采用邻苯三酚自
氧化法。取 4.5ml 0.05 mol/L pH 8.2的Tris-HCl缓冲液于试
管中 ,置 25 ℃水浴中预热 20 min ,加入 0.1 ml 各供试液 ,0.4
ml 2.5mmol/L邻苯三酚 ,混匀后在 25 ℃水浴中准确反应 4
min ,立即用 0.1ml 8mol/LHCl终止反应 ,并在波长 299 nm处
测定吸光度(A)值(以蒸馏水调零),对照组用 0.1 ml蒸馏水
代替供试液 ,同时设立试剂空白。每一吸光值平行测定 3
次 ,取其平均值 ,结果用 x±sd表示。计算方法同上。
2　结果与分析
2.1　多酚标准曲线　以 540 nm波长下吸收度A为纵坐标 ,
多酚质量浓度 C为横坐标绘制标准曲线 ,得回归方程 y =
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2009, 37(9):4118-4120　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　夏静　责任校对　况玲玲
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.09.159
0.017 2 x+0.007 9 ,相关系数 R2 =0.999 3 ,因此多酚标准液
在 5.0 μg/ml～ 50.0 μg/ml范围内吸收度和标准品的质量浓
度呈良好的线性关系 。
2.2　不同月份艹律草各部位多酚类物质总量　按“1.3.2”法
测定不同月份艹律草各部位多酚类物质总量 ,结果见图 1。
图1　不同月份艹律草不同部位中多酚含量
Fig.1　The content of polyphenol in different parts of Humulus
scanalens(Lour)Merr.in different months
从图 1中可以看出 , 8月份艹律草不同部位中总多酚含量:
嫩头>叶>全草>茎 ,嫩头与茎中含量差距最大 ,其比值为
9.83;10月份比较的结果是:叶>嫩头>全草>茎 ,叶与茎中
含量差距最大 ,其比值达到 13.25。10月份叶中总多酚含量
最高 ,达到 0.371±0.006mg/g ,且明显比 8月份要高;茎和嫩
头中的含量与 8月份相比基本持平;但其全草中的含量却下
降了 ,分析原因主要是因为在该月份的全草中茎的质量分数
所占比重较大的缘故 。
2.3　不同月份不同部位的艹律草水提取液对超氧阴离子自由
基的清除率　不同月份不同部位艹律草的水提取液对超氧阴
离子自由基的清除率见图 2 。由图 2可知 , 8月份的艹律草不
同部位提取液抑制O2-·能力在 58%～ 68%之间 ,抑制能力
最强的茎是抑制能力最差叶的 1.16倍;10月份的抑制能力
图 2　艹律草水提液对超氧阴离子自由基的清除率
Fig.2　The scavenging rate of water extracts from H.scanalens to
superoxide anion free radicals
在 60%～ 70%之间 ,此期间的抑制能力比 8月份增加 , 而叶
的抑制能力经统计学分析表明 8月份与 10月份差异不显著
(P=0.308 5)。总体而言 ,8月份和 10月份的艹律草各部位的
水提液抑制O2-·的能力除了叶的抑制能力差异不显著外 ,
其他部位都存在着极显著差异(P<0.01),且 10月份采收的
艹律草水提液对O2-·的抑制能力都高于 8月份。
2.4　不同月份不同部位艹律草的水提液对羟自由基的清除率
　不同月份采集艹律草不同部位的水提液对羟自由基的清除
率见图 3。由图 3可知 , 8月份的艹律草不同部位的水提液清
除·OH能力在 34%～ 56%之间 ,叶清除能力最强 ,茎清除能
力最差 ,叶是茎的 1.57倍;10月份的艹律草提取液清除能力在
57%～ 66%之间 ,此期间的清除能力比 8月份有明显增加 ,不
同月份 4种部位来源的提取物之间清除能力差异都很显著
(P <0.01)。
图 3　艹律草水提液对羟自由基的清除率
Fig.3　The scavenging rate of water extracts from H.scanalens to
hydroxyl free radicals
3　讨论
(1)不同月份采集的艹律草不同部位水提液对超氧阴离子
自由基(O2-·)和羟自由基(·OH)均具有明显的清除能力。
(2)多酚类的抗氧化能力已被公认 ,且在某些药用植物
中抗氧化能力和其所含的多酚类含量呈正比[ 9-12] 。其作用
的原理是通过直接消除自由基 、抑制脂质过氧化反应以及与
生物膜磷脂结合等多种作用方式拮抗活性氧对细胞膜及蛋
白质的氧化损伤。这样就可避免因细胞膜蛋白的损伤而引
起的GJIC(细胞间隙通讯),改变活性氧所诱发的与生长有关
的基因表达 ,直接影响转录因子活性 ,以消除氧化损伤所带
来的信息通路上的障碍 ,进一步保护植体不因季节的变化而
产生生理上的不良影响[ 13] 。两个不同季节的艹律草各部位总
多酚含量除叶中有明显增加 ,其他含量变化很小。10月份叶
的水提液中多酚含量最高达 3.71 μg/ml ,清除·OH 最高达
65.79%;10月茎的水提取液中多酚含量为 0.28 μg/ml ,抑制
超氧O2-·最高达到 69.75%。在提取的总多酚中茎中的含
量是最高 ,其水提液对O2-·的清除率却只为 60.29%。在试
验的浓度范围内 ,多酚对·OH 和O2 -·自由基的清除能力并
不随着溶液浓度的增加而呈显著的量效关系 。在浓度 0.23
～ 0.28 μg/ml 有较明显的量效关系 ,在浓度为 0.10 ～ 0.37
μg/ml无论是对·OH和O2-·的清除作用都无显著的量效关
系甚至还出现多酚浓度增加其对自由基的抑制能力反而下
降的现象。原因可能是:①艹律草多酚类化合物对·OH和O2 -
·的清除能力与金莹等[ 14]研究的苹果多酚的特性是一致的 ,
对·OH和O2 -·的清除能力在一定的浓度范围内成量效关
系;②试验中采用的 Fenton反应产生·OH自由基的过程中反
应体系中加入了 Fe2+ ,而较高浓度的多酚加入 ,其邻位上酚
羟基在碱性条件下 ,可能与金属离子发生络合反应 ,形成稳
定的多配络合物[ 15] ,从而影响了试验结果。
411937卷 9期　　　　　　　　　　　　　　戈群妹等　艹律草水提液多酚的含量测定与抗氧化性研究
(3)不同月份采集的艹律草不同部位总多酚的含量之间有
一定差异 ,但都具有较好抑制O2-·和清除·OH能力。综合
艹律草水提液对结核杆菌有显著抑制作用 ,对大肠杆菌 、金黄
色葡萄球菌等也有抑制作用[ 16-17] ,以及全草具有的清热解
毒 ,利尿消肿等功效和主治肺结核潮热 、胃肠炎 、痢疾 、感冒
发热 、小便不利 、肾盂肾炎 、急性肾炎 、膀胧炎 、沁尿系统结
石 ,外用治湿疹 、毒蛇咬伤 、跌打损伤等症的药用价值[ 18] ,因
此 ,律草具有极其广阔的开发前景。
参考文献
[ 1] 候宽昭.中国种子植物科属词典[M] .北京:科学出版社 ,1984:238.
[ 2] 葛传玉.速生蔓性地被植物———艹律草[ J] .中国花卉盆景, 2003(8):5.[ 3] 雷桂兰,吴中华 ,刘世旺.苦荆茶中多酚类物质的含量测定[ J] .长江大
学学报, 2005,2(1):37-39.
[ 4] 陈留勇,孟宪军 ,贾薇,等.黄桃水溶性多糖的抗肿瘤作用及清除自由
基提高免疫活性研[ J] .食品科学, 2004 ,25(2):167-170.
[ 5] NICHOLAS SMIRONFF , QUINTON J CUMBES.Hydroxyl radical scavenging
activity of compatible solutes [ J] .Phytochemistry , 1989 ,28(4):1057-1060.
[ 6] 马晓华,连宾.几种常见食用菌清除羟基自由基能力的研究[ J] .食品
与发酵工业 ,2005,31(10):25-29.
[ 7] 刘刚,王辉,张先洲,等.青藤碱清除氧自由基和抗脂质过氧化作用
[ J] .中草药 ,2006, 37(1):85-89.
[ 8] 王巨存 ,邢国胜,胡文铎 ,等.有机锗Ge-132对氧自由基和由羟自由基
诱导的脂质过氧化的影响[ J] .中国药学杂志 ,1994, 29(1):23-25.
[ 9] 郭丽萍 ,卢家炯,仇宏伟.香蕉皮多酚清除自由基作用的初步研究[ J] .
食品科技 ,2007(6):131-134.
[ 10] 陈欣欣,许时婴.黑莓渣提取物中多酚类化合物抗氧化活性的研究
[ J] .食品工业, 2007(3):3-6.[ 11] 张斌贝彬 ,龚钢明,戴妙妙.甘薯多酚粗提液的抗氧化活性研究[ J] .中
国粮油学报, 2007 ,22(5):76-80.
[ 12] 顾宇翔 ,范立强 ,袁勤生.虫草及其发酵制品抗氧化能力研究[ J] .中国
中药杂志 ,2007, 32(11):1028-1031.
[ 13] 赵先英,张涛.天然药物中抗氧化剂的研究进展[ J] .中国医院药学杂
志 ,2006, 26(4):466-467.
[ 14] 金莹,孙爱东,胡晓丹.苹果多酚的超声波提取及抗氧化作用研究[ J] .
北京林业大学学报 ,2007, 29(5):137-141.
[ 15] 张加平,孙长霞,李俊情 ,等.植物多酚的研究现状及发展前景[ J] .林
业科学, 2005, 41(6):157-162.[ 16] 高振华 ,何瑞国 ,李英 ,等.艹律草饲喂獭兔效果研究[ J] .草业科学 ,
2005, 22(3):72-74.
[ 17] 尹海波,王颖 ,郑太坤,等.中国艹律草属植物的研究进展[ J] .辽宁中医学院学报 ,2001, 3(1):60-61.
[ 18] 李俊婕,王晓静.艹律草的研究进展[ J] .齐鲁药事, 2007, 26(16):353-
355.
(上接第 4112页)
算其加样回收率。
2　结果与分析
2.1　不同 pH值条件下穿心莲内酯提取效果　由表 1可
知 , pH 值为 9.5的碱性水溶液提取的浸膏得率和提取物质
量最高 ,随 pH值降低浸膏得率和提取物质量逐渐减小。
表 1　不同 pH值条件下提取浸膏的质量及得率
Table 1　The extract quality and yield under different pH value conditions
pH值
pH value
原料∥g
Raw materials
提取物质量∥g
Extract quality
干浸膏得率∥%
Dry extract yield
9.5 100 6.71 6.71
9.0 100 5.74 5.74
8.5 100 4.57 4.57
8.0 100 3.80 3.80
7.5 100 3.57 3.57
2.2　不同pH值条件下提取浸膏中穿心莲内酯的含量　由
表 2可知 ,pH值为 7.5的碱性水溶液提取的浸膏内酯总量
和穿心莲内酯含量最高 。随 pH 值升高 ,浸膏中内酯总量及
穿心莲内酯含量逐渐降低。
2.3　穿心莲内酯的加样回收率　3次平行试验测得穿心莲
内酯的加样回收率分别为 100.2%、99.8%和 99.9%,平均
回收率 99.9%。
3　结论与讨论
该试验采用碱性水溶液超声波提取法提取穿心莲茎叶
中的穿心莲内酯 ,结果表明 , pH值为 7.5的碱性水溶液提
取的浸膏中内酯总量最高 ,所用 NaOH 和浓盐酸量最少。
pH值为 9.5的碱性水溶液提取的浸膏得率最高 ,但有效成
分含量最低。随提取液 pH值降低 ,提取物得率降低 、有效
成分含量增加 ,这一规律与其他研究结果基本吻合 。
表2　不同 pH值条件下提取浸膏中穿心莲内酯含量
Table 2　The andrographolide content in A.paniculata extracts under
different pH value conditions
pH值
pH
value
取样量
mg
Sampling
amount
吸光度
Absorbency
提取物内酯含量∥mg/ml
Lactone content
in extracts
提取物穿心莲内酯含量∥%
Andrographolide content
in extracts
9.5 2 0.027 0.038 1 0.019 0
9.0 2 0.058 0.104 3 0.521 5
8.5 2 0.068 0.125 7 0.628 5
8.0 2 0.545 1.145 1 6.900 0
7.5 2 0.899 1.901 6 9.500 0
参考文献
[ 1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典:一部[ S] .
北京:化学工业出版社 , 2005.
[ 2] 葛发欢 ,辉国钧,李菁,等.中药现代化与超临界流体萃取的应用[ J] .
天然产物研究与开发, 2000,12(3):88-93.
[ 3] 节海荣 ,鲁静.穿心莲及消炎利胆片中内酯类成分的含量测定[ J] .中成药, 1999,21(1):11-13.
[ 4] 肖树雄 ,王晓钰,郑剑红.穿心莲的成分及其分析方法研究概况[ J] .中
国药师 , 2002, 5(11):693-694.
4120 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年