全 文 ：收稿日期:2008-10-04;　修订日期:2008-12-24
作者简介:李先辉(1976-),男(汉族),湖北宜昌人 ,现任吉首大学医学院
讲师 ,硕士学位 ,主要从事民族中草药生化机制的研究工作.
野鸦椿提取物抗炎镇痛效应的研究
李先辉 ,李春艳 ,贾　薇 ,吕江明
(吉首大学医学院 ,湖南 吉首　416000)
摘要:目的 研究野鸦椿(EJK)水提取物的抗炎镇痛效应。方法 采用 4种急性炎症模型和两种疼痛模型 , 包括角叉菜胶
及蛋清诱导大鼠足趾肿胀 、二甲苯致小鼠耳片肿胀 、1%冰醋酸致小鼠腹腔渗出模型及扭体 、热板法疼痛模型 , 观察 EJK
水提取物的抗炎镇痛作用。结果 EJK水提取物小 、中 、大(2, 4, 8 g/kg)3个剂量组对二甲苯致小鼠耳片肿胀 , 对角叉菜
胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀 ,对急性炎症导致的皮肤和腹腔毛细血管通透性 ,对冰醋酸导致的慢性炎性疼痛 、热板导
致的疼痛均有不同程度抑制作用 ,其中 EJK水提取物两个剂量(4, 8 g/kg)组与模型组相比有显著性差异(P<0.01)。
结论 EJK水提取物具有较强的抗炎镇痛效应。
关键词:野鸦椿;　抗炎;　镇痛
中图分类号:R962　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)08-2041-02
　　野鸦椿(药材名为鸡眼睛)来源于省沽油科植物野鸦椿 Eus-
caphisjaponecaKantiz, (EJK)的带花或果的枝叶 , 为贵州 、湘西苗
族常用药。味辛 、甘 , 性平 , 具理气止痛 、消肿散结的功效 [ 1] , 已
有文献报道野鸦椿的枝叶有明显的抗炎作用 [ 2] 。 但与野鸦椿
“理气止痛 ,消肿散结”功效密切相关的抗炎镇痛作用系统研究
还不够。本文采用实验性急性炎症动物模型及疼痛模型 , 观察
EJK水提取物抗炎镇痛效果 ,为其临床应用提供理论提供依据。
1　材料与仪器
1.1　动物 昆明种小鼠 , 18 ～ 22 g, 雌雄各半 ,合格证号:001847;
SD大鼠 , 180 ～ 200 g, 雌雄各半 , 合格证号:001847, 由湖南长沙
开福区东创实验动物服务部提供。
1.2　药物及试剂 EJK水提取物由吉首大学药理实验室提供 ,传
统方法水提 、浓缩 , 临用时用蒸馏水稀释成所需浓度(实验所用
剂量均以生药计);吲哚美辛 , 山西临汾奇林药业有限公司生产 ,
批号 201005。二甲苯 ,江苏徐州试剂二厂产品 , 批号 050720;角
叉菜胶 , 青岛海洋所提供 ,用前 1天以无菌生理盐水配制成 10 g/
L, 放置 4℃冰箱过夜备用;甲醇 , 甲酰胺 , 冰醋酸 、氢氧化钾为分
析纯。
1.3　仪器 UV-260可见 -紫外分光光度计(日本岛津公司);
721可见分光光度计(上海亚研电子科技有限公司);FA/JA型电
子天平(上海精密科学仪器有限公司);精度 0.02 mm的游标卡
尺(上海量具刃具厂);SHH.W21.420型电热恒温水箱(天津市
泰斯特仪器有限公司);LXJ-ⅡB型离心机(上海安亭科学仪器
厂)。
2　方法
2.1 　EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响 [ 3, 4]
昆明种小鼠 50只 , 雌雄各半 ,随机分为 5组:模型组(生理盐水),
EJK小 、中 、大(2, 4, 8 g/kg)3个剂量组 , 阳性药组(吲哚美辛 ,
125mg/kg)。每组动物按 0.1 ml/10g连续灌胃给药 5 d, 模型对
照组给予相同体积的生理盐水。末次给药 30 min后 ,于小鼠右
耳前后两面均匀涂抹二甲苯 0.02 ml/只 , 左耳作对照 , 45 min后
脱颈处死小鼠 , 沿耳廓基线剪下两耳 , 用直径为 9 mm的打孔器
沿左右耳片同一部位打下圆耳片 ,电子天平称重 , 计算肿胀度和
抑制率(下式中给药组包括阳性药组和 EJK水提取物组 , 肿胀度
以每鼠左右耳片重量差表示。下同)。抑制率(% )=(模型对
照组肿胀度 -给药组肿胀度)/模型对照组肿胀度 ×100 %。
2.2　EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响 [ 3] 接上实验 ,
于涂抹二甲苯后 , 立即尾静脉注射 0.5%伊文思蓝溶液 0.1 ml/
10 g, 同时腹腔注射 1%冰醋 10 ml/kg, 45 min后脱颈椎处死动
物 , 用 5 ml生理盐水冲洗腹腔 , 吸管收集腹腔液 , 离心取上清液
于 590 nm处可见分光光度计测定吸光度 A值 。按公式计算小
鼠腹腔毛细血管通透性抑制率。腹腔毛细血管通透性抑制率(
%)=(模型对照组腹腔液 A
590
-给药组腹腔液 A
590
)/模型对
照组腹腔液 A590 ×100 %;待 “ 2.1”项实验中耳片称毕 , 将致炎右
耳片浸入 1 ml甲酰胺中 , 38℃水浴 48 h将染料渗出 ,离心取上
清液于 620nm处可见分光光度计测吸光度 A值。按公式计算小
鼠皮肤毛细血管通透性抑制率。皮肤毛细血管通透性抑制率(
%)=(模型对照组液 A620 -给药组液 A620)/模型对照组液
A620 ×100%
2.3　EJK水提取物对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型的影
响 [ 3, 4] 大鼠 50只 , 雄性 , 随机分为 5组:模型组(生理盐水),
EJK水提取物小 、中 、大(0.4, 0.8, 1.6 g/kg)3个剂量组 , 阳性药
组(吲哚美辛 , 25 mg/kg),每组动物按 2 ml/100 g连续灌胃给药
5 d, 模型组给予相同体积的生理盐水。实验当天先用游标卡尺
(精度 0.02 mm)测所有大鼠右后肢足跖厚度作为造模前的正常
值 , 末次给药 1 h后 , 于每鼠右足趾皮下注射 1% 角叉菜胶 0.1
ml致炎 ,以造成急性足跖肿胀模型。分别测定注射角叉菜胶后
0.5, 1, 2 , 3, 4, 5 h大鼠致炎右后足跖的厚度 , 以肿胀度作为检测
指标。肿胀度(mm)=致炎后足跖厚度 -致炎前足跖厚。
2.4　EJK水提取物对蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响 [ 3 , 4]
实验分组 、给药 、足跖厚度测定 、肿胀度计算同 “ 2.3”项 , 每鼠右
足趾皮下注射鸡蛋清 0.1 ml致炎 , 以造成急性足跖肿胀模型。
2.5　EJK水提取物对小鼠扭体反应的影响 [ 3] 昆明种雌性小鼠
50只 , 随机分为 5组(分组 、给药剂量及方法同 “ 2.1”项)。末次
给药 30min后 , 每鼠腹腔注射 0.6%冰醋酸 0.1 ml/10 g, 记录注
射致痛剂后 15 min内各鼠扭体次数 , 按下式计算扭体抑制率(
%)。扭体抑制率(%)=(模型对照组平均扭体次数 -给药
组平均扭体次数)/模型对照组平均扭体次数 ×100%。
2.6　EJK水提取物对小鼠热板试验的影响 [ 3] 取昆明种雌性小
鼠 50只 ,随机分为 5组(分组 、给药剂量及方法同 “ 2.1”)。末次
给药 30min后 ,用秒表记录小鼠自投入恒温水浴的烧杯中 [温度
控制在(55±0.5)℃]至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛阈
值。剔除痛阈值小于 5s、大于 30 s或出现跳跃反应的小鼠。 记
录给药后 0.5, 1, 1.5, 2, 3和 4h时的痛阈值 , 如痛阈超过 60 s, 按
60 s计 ,并比较组间差异。
2.7　数据统计分析 计量资料用 x±s表示 , 多组间差异用 F检
验进行统计分析 ,进一步用 One-WayANOVA检验进行两组间
比较 , 使用 SPSS12.0软件进行统计分析。
3　结果
3.1　EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响 以耳
片肿胀程度 、肿胀抑制率进行评价 , 结果见表 1。二甲苯能明显
诱导小鼠耳肿胀。致炎前连续灌胃给药 5 d, EJK水提取物 3个
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.8 时珍国医国药 2009年第 20卷第 8期
剂量 (2, 4, 8 g/kg)组对二甲苯致小鼠耳片急性炎症有不同程度
抑制作用 , 其中 EJK水提取物中 、大(4, 8 g/kg)两个剂量组与模
型组相比差异有显著性(P<0.05)。
3.2　EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响 以伊文思蓝
染料渗出情况 , 来判断野鸦椿对小鼠毛细血管通透性的影响 ,结
果见表 2。 EJK水提取物 3个剂量(2, 4, 8 g/kg)组对急性炎症
导致的皮肤和腹腔毛细血管通透性均有不同程度抑制作用 ,其中
EJK水提取物(4, 8 g/kg)两个剂量组与模型组相比有显著性差
异(P<0.01)。
表 1　EJK水提取物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响( x±s)
组别 剂量C/g· kg-1 耳片肿胀 m/mg 抑制率(%)
模型对照 - 21.06±6.34 -
EJK水提取物(小) 2 18.24±4.42 13.39
EJK水提取物(中) 4 13.63±5.25★ 35.28
EJK水提取物(大) 8 12.47±5.63★ 40.79
吲哚美辛 0.125 10.41±4.28★★ 50.57
　　与模型组比较 , ★P<0.05, ★★P<0.01;n=10
表 2　EJK水提取物对小鼠毛细血管通透性的影响( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1
皮肤毛细血管
伊文思蓝吸光度(A620nm) 抑制率(%)
腹腔毛细血管
伊文思蓝吸光度(A620nm) 抑制率(%)
模型对照 - 0.057±0.006 - 1.441±0.141 -
EJK水提取物(小) 2 0.041±0.008 28.07 1.135±0.015 21.23
EJK水提取物(中) 4 0.034±0.005△★ 40.35 1.022±0.025△★ 29.08
EJK水提取物(大) 8 0.031±0.006△★ 45.61 1.010±0.025△★ 29.91
吲哚美辛 0.125 0.029±0.007 49.12 1.006±0.002 30.19
　　与生理盐水组比较 , △P<0.05;与吲哚美辛组比较 , ★ P>0.05;n=10
3.3　EJK水提取物对角叉菜胶和鸡蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模
型的影响 以足跖肿胀程度进行评价。角叉菜胶和鸡蛋清能明显
诱导大鼠足跖肿胀 , 3h达峰值。野鸦椿对角叉菜胶和蛋清引起的
大鼠足跖肿胀的影响随时间的变化关系见图 1 ～ 2。 EJK水提取物
3个剂量(4, 4, 8g/kg)组对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀
均有不同程度抑制作用 , 其中 EJK水提取物水提取物中、大(4, 8
g/kg)两个剂量组与模型组相比有显著性差异(P<0.01)。
图 1　EJK水提取物对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀的影响随时间的变化关系
图 2　EJK水提取物对蛋清引起的大鼠足跖肿胀的影响随时间的变化关系
3.4　EJK水提取物对小鼠扭体反应的影响 以醋酸导致的小鼠
扭体实验来评价 EJK水提取物对慢性持续性炎性疼痛的作用。
结果见表 3, 冰醋酸对不同组别的小鼠均能致痛 ,产生扭体反应。
EJK水提取物 3个剂量(2, 4, 8 g/kg)组均有不同程度提高痛阈
的作用 , 其中 EJK中 、小(4, 8 g/kg)两个剂量组与模型组相比有
显著性差异(P<0.01)。
表 3　EJK水提取物对小鼠扭体反应的影响( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1 扭体次数 扭体抑制率(%)
模型对照 - 33.06±12.34 -
EJK水提取物(小) 2 24.24±10.42 26.68
EJK水提取物(中) 4 20.63±11.25★ 37.60
EJK水提取物(大) 8 21.47±12.63★ 35.05
吲哚美辛 0.125 19.75±8.28 40.26
　　与模型组比较 , ★P< 0.05;n=10
3.5　EJK水提取物对小鼠热板试验的影响 以热板法实验来评
价 EJK水提取物对酷爱疼痛的作用。野鸦椿对热板法引起小鼠
疼痛痛阈的影响随时间变化的关系结果见图 3。EJK水提取物 3
个剂量 (0.4、0.8、1.6 g/kg)组在末次给药 1 ～ 5 h均有不同程度
提高痛阈的作用 , 其中 EJK中 、大 (0.8、 1.6 g/kg)两个剂量组与
模型组相比有显著性差异(P<0.01)。
图 3　EJK水提取物对热板法引起小鼠疼痛痛阈的影响随时间变化的关系
4　讨论
二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型是急
性非特异性炎症模型 , 结果表明 EJK水提取物对急性非特异性
炎症有显著抑制作用 , 并呈剂量依赖效应 , 提示 EJK水提取物
对急性 、早期炎症具有很好的抗炎作用。通过对毛细血管通透
性影响的实验 , 表明 EJK水提取物可以降低毛细血管的通透
性 , 减少急性 、早期炎症的渗出。大鼠蛋清诱导大鼠足肿胀模型
是一种免疫性炎症模型 , 为筛选抗炎与免疫药物的模型之一。
实验表明 EJK水提取物对免疫性炎症也有明显抑制作用。热
板法是一种经典的快痛实验模型 , 本实验结果表明 EJK水提取
物对热板法小鼠产生的快痛具有镇痛效应。扭体实验是一种慢
性持续性炎性疼痛的实验模型 , 实验结果提示 EJK水提取物提
高冰醋酸致疼鼠的阈值 , 表明 EJK水提取物对慢性持续性疼痛
小鼠也有镇痛作用 。综上所述 , EJK水提取物具有明显的抗炎
镇痛作用 ,其机制有待进一步研究 。
参考文献:
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