全 文 ：假 甲醇提取物的抑制真菌作用
袁宏球1 ,孙丹2 ,张世瑞2 　(1.中国热带农业科学院分析测试中心 ,海南海口 571101;2.海南大学植物保护与环境学院 ,海南儋州 571737)
摘要　[目的]研究假 甲醇提取物对几种植物病原菌的抑制作用。[方法]采用生长速率法测定假 叶甲醇提取物对香蕉炭疽病菌等 9
种植物病原真菌的生物活性。[结果] 假 叶甲醇提取物在 2mg/ml的浓度下 ,对 9种菌有一定的抑制率 ,对香蕉炭疽病菌、番木瓜炭疽
病菌 、香蕉枯萎病菌、西瓜蔓枯病菌的半数有效浓度(EC50)分别为 0.784 9、0.766 3、0.891 3、1.642 5 mg/ml。假 叶甲醇提取物的石油醚 、乙酸乙酯和正丁醇萃取组分对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌的活性表明 ,乙酸乙酯萃取物活性最高 ,抑制率分别为 72.7%和 88.3%。
假 甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌的 EC50分别为 0.569 2、0.544 6mg/ml。[结论]证实假 叶甲醇提
取物中含有具有抑真菌活性的次生物质 ,该物质溶于石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂。
关键词　假 ;真菌;抑真菌活性
中图分类号　S 567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)17-08044-02
Antifungal Activities of the Methanol Extract of Piper sarmentosum
YUANHong-qiu et al　(Analysis and Testing Center, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences , Haikou , Hainan 571101)
Abstract 　[Objective] The inhibition of all methanol extracts from Piper sarmentosum against several plant pathogenwas researched.[Method] The bio-
logical activity of the methanol extract of Piper sarmentosum against 9 kinds of plant pathogens such as banana anthracnose was assayed with growth rate
method.[ Results] The results showed that all methanol extracts at the concentration of 2mg/ml displayed anti-fugal activity against 9 kinds of fungi.The
effective concentration(EC50)of the methanol extract of the leafstalk against C.musae , C.papayae , F.f sp.Cubence and D.bryoniae was 0.784 9
mg/ml , 0.766 3 mg/ml , 0.891 3 mg/ml and 1.642 5mg/ml , respectively.The methanol extract from the extraction method of ethyl acetate showed the
highest anti-fugal activity against C.musae and C.papayae among three treatment methods of petroleum ether, ethyl acetate and n-butanol and its in-
hibitory rate was 72.7% and 88.3%and its EC50was 0.569 2mg/ml and 0.544 6mg/ml , respectively.[ Conclusion] It was confirmed that there was the
secondarymaterial , which had fungicidal activity , in the methanol extract from Piper sarmentosum and the secondary material could be soluble in
petroleum ether , ethyl acetate , butanol and other organic solvents.
Key words　 Piper sarmentosum;Fungi;Fungicidal activity
作者简介　袁宏球(1963-),男 ,江西信丰人 ,副研究员 ,硕士生导师 ,
从事农药残留检测与分析及海洋生物农药研究。
收稿日期　2009-03-17
　　假 (Piper sarmentosum)为胡椒科植物 ,具有广泛的药理
活性 ,国内外学者对其进行了深入的研究。假 在我国主要
分布在福建 、广西 、广东 、云南 、贵州 、西藏。云南和广东民间
常取其茎叶及果穗治腹胀 、腹痛 、肠炎腹泻 、食欲不振 、风湿
痛 、疝气痛 ,外用治外伤出血 、跌打痨伤 、冻疮等。根据《中药
大辞典》 、《广东中草药》 、广州部队《常用中药手册》记载 ,假
根 、叶 、果穗温中暖胃 ,驱风行气 ,化湿消肿;治腹胀腹痛 ,
肠炎腹泻 ,食欲不振 ,胃炎 ,行气通窍 ,消滞化痰 ,风湿性关节
炎等病症。向同寿等对假 挥发油气质联用进行分析 ,从中
分离和鉴定 67种有机化合物。笔者就假 甲醇提取物对几
种植物病原菌的抑制作用报道如下。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　植物材料。假 采自华南热带农业大学儋州校区橡
胶林。
1.1.2　供试菌种。番木瓜炭疽菌(Colletotrichum papayae)、香
蕉炭疽菌(Colletotrichummusae)、西瓜蔓枯菌(Didymella bryoni-
ae)、香蕉黑星菌(Phyllosticta musarum)、茄子枯萎菌(Fusarium
oxysporum f.sp.Melongenae)、辣椒枯萎菌(Fusarium oxysporum f.
sp.vasinfectum)、香蕉 枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.
Cubence)为中国热带科学院生物所提供;芒果炭疽菌(Col-
letotrichum gloeosporioides Penz)为中国热带科学院植物保护研
究所提供。
1.2　方法
1.2.1　甲醇提取物的制备 。将采集的新鲜假 叶子洗干净 ,
阴干 ,经粉碎机粉碎 ,密封备用。定量称取假 叶干粉 ,用甲
醇在通风橱内浸泡提取 ,滤液用旋转蒸发仪旋转浓缩蒸干 , 4
℃冰箱中保存备用。
1.2.2　假 叶粗提物生物测定。采用生长速率法进行测定
试验[ 1] 。在无菌条件下用丙酮溶解假 叶甲醇提取浓缩物 ,
配制成 0.1 g/ml浓度的供试药剂 ,与培养基按照1∶50的比例
加入 50 ℃左右的培养基中 ,制成浓度为 2.0mg/ml的带毒培
养基 。供试 9种菌种在PDA培养基上培养。接种时 ,用直径
5 mm的打孔器从菌丝边缘打取菌饼 ,用接种针把带菌丝的
一面接到培养基中央 ,以丙酮为对照 ,重复 3次 ,置于 28 ℃下
黑暗培养 4 ～ 5 d ,用十字交叉法测量菌落直径(mm),扣除菌
饼的直径 ,计算抑制率(%)。
菌落直径=测量菌落直径平均值-5
抑菌率(%)
=(对照菌落直径-5)-(处理菌落直径-5)处理菌落直径-5 ×100
1.2.3　假 叶粗提物毒力测定。假 叶甲醇提取物对 9种
植物病原菌的抑菌效果均达到 50%以上 ,将配制好的母液
0.1g/ml逐级稀释加入到培养基中 ,配制成带毒培养基的浓
度分别为 2.0、1.5、1.0、0.5g/ml ,对香蕉炭疽病菌 、香蕉枯萎
病菌 、西瓜蔓枯病菌 、番木瓜炭疽病菌进行抑菌率试验 ,生物
测定方法同“1.2.2” ,利用 SAS软件分析 ,绘制线性回归方程 ,
计算半数有效浓度(EC50)。
1.2.4　假 叶抑菌活性物质的初步分离 。用石油醚 、乙酸乙
酯和正丁醇分别萃取假 叶甲醇提取物 ,合并相应的提取
液 ,旋转蒸发仪旋转至干 。测定不同萃取组分在 2 mg/ml浓
度影响下的香蕉炭疽病菌 、番木瓜炭疽病菌 、香蕉枯萎病菌
和西瓜蔓枯病菌的活性 ,生物测定方法同“1.2.2” 。
1.2.5　数据分析 。假 叶甲醇提取物对 9种植物病原菌的
抑菌率利用 SAS统计软件分析 ,采用反正弦平方根转换Dun-
安徽农业科学, Journal of Anhui Agri.Sci.2009, 37(17):8044-8045　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　张杨林　责任校对　卢瑶
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.17.079
can s法进行数据差异显著性分析 ,显著水平为 0.01。
2　结果与分析
2.1　假 叶粗提物的抑菌效果　由表 1 可知 ,假 叶甲醇
提取物对 9种植物病原菌均有一定的抑菌活性 ,在 2 mg/ml
的浓度下 ,对辣椒枯萎病菌 、香蕉炭疽菌 、香蕉枯萎菌 、香蕉
黑星菌 、芒果炭疽菌 、番木瓜炭疽菌 、橡胶树棒孢菌 、西瓜蔓
枯菌 、茄子枯萎病菌 9 种植物病原菌的平均抑制率分别为
79.5%、79.0%、78.3%、77.2%、76.7%、74.4%、72.6%、
63.9%、63.9%,抑菌率均达到 50%以上 ,且各菌种间差异极
显著。
2.2　假 叶粗提物毒力测定结果　选择香蕉炭疽病菌 、香
蕉枯萎病菌 、西瓜蔓枯病菌 、番木瓜炭疽病菌 4种菌进行毒
力试验 ,结果见表 1。由表 1可知 ,不同浓度假 叶的甲醇提
取物对香蕉炭疽病菌 、香蕉枯萎病菌 、番木瓜炭疽病菌和西
瓜蔓枯病菌有一定的抑菌作用 ,4种菌的抑制率与甲醇提取
物浓度成正相关。假 叶甲醇提取物对香蕉炭疽病菌 、香蕉
枯萎病菌 、番木瓜炭疽病菌和西瓜蔓枯病菌的 EC50分别为
0.784 9 、0.766 3、0.891 3、1.642 5 mg/ml。
表1　假 甲醇提取物对真菌的毒力测定结果
Table 1　The toxicity test results ofmethanol extracts from Piper sarmento-
sum on fungi
供试菌种
Test strains
回归方程
Regression equatation
EC50
mg/ml r
香蕉炭疽病菌 y=5.216 4+2.057 3x 0.784 9 0.971 6
Colletotrichum musae
香蕉枯萎病菌 y=5.225 5+1.950 1x 0.766 3 0.997 1
Fusarium oxysporum f sp.Cubence
番木瓜炭疽病菌 y=5.099 7+1.990 8x 0.891 3 0.990 7
Colletotrichum gloeosporioides Penz
西瓜蔓枯病菌 y=4.249 0+3.485 2x 1.642 5 0.992 8
Didymella bryoniae
2.3　不同溶剂对假 叶甲醇提取物萃取成分的抑菌活
性　由表 2可知 ,在 2mg/ml 的浓度下 ,石油醚 、乙酸乙酯和
正丁醇对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌有一定的抑制活
性 ,乙酸乙酯萃取物的抑菌活性明显高于其他溶剂萃取物的
抑菌活性 ,而水相萃取物却存在促进生长的活性 ,水相的抑
制率分别为-14.63%和-16.31%。
表 2　不同溶剂对假 叶甲醇提取物萃取成分的抑菌活性
Table 2　The antifungal activity of different solvents on the extraction com-
ponents of methanol extracts from Piper sarmentosum leaves
供试菌种
Test strains
萃取溶剂
Extraction solvent
平均抑制率∥%
Average inhibition rate
香蕉炭疽病菌 石油醚相 　　　　　20.21
Colletotrichum 乙酸乙酯相 72.67
musae 正丁醇相 35.44
水相 -14.63
CK 　　　　　　-
番木瓜炭疽病菌 石油醚相 9.86
Colletotrichum 乙酸乙酯相 88.29
gloeosporioides 正丁醇相 42.90
Penz 水相 -16.31
CK 　　　　　　-
2.4　不同浓度的乙酸乙酯萃取物的抑菌活性　将乙酸乙酯
萃取物配制为 2.0 、1.5、1.0、0.5mg/ml的浓度 ,各浓度抑菌效
果见表 3 ,由表 3可知 ,不同浓度的假 叶甲醇提取物的乙酸
乙酯萃取物均对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌有一定的
抑制作用 ,0.5mg/ml浓度下的抑制率为 48.0%和 55.3% ,而
2mg/ml浓度下的抑制率为 72.7%和 88.3%,抑制率与浓度
成长相关性相关方程分别为 y =5.358 6+1.465 4x 和 y =
5.497 4+1.886 1x ,EC50值分别为 0.569 2 mg/ml 和 0.544 6
mg/ml。
表 3　乙酸乙酯萃取物对病原菌的平均抑制率
Table 3　The average antifungal activity of ethyl acetate extracts on the
pathogen %
浓度∥mg/ml
Concentration
香蕉炭疽病菌
Colletotrichum musae
番木瓜炭疽病菌
Colletotrichum gloeosporioides Penz
2.0 72.7 88.3
1.5 70.7 67.9
1.0 62.3 59.6
0.5 48.0 55.3
CK(丙酮) - -
3　结论与讨论
(1)目前 ,医药界对假 各部分的化学成分均已进行了
研究 ,但这些研究大多是医药界为了明确其药用价值而进行
的[ 2] ,应用于农业上的研究较少。宋艳平等曾对假 生药挥
发油进行了化学成分的鉴定 ,其萜烯类化合物有石竹烯 、蛇
床烯 、杜松烯 、δ- 疮木烯等 30个 ,具有较强的平喘 、抗菌等
作用[ 3] 。
(2)Rukachaisirikul等研究了假 果实正己烷和甲醇提取
物 ,结果表明 ,从假 果实正己烷和甲醇提取物中分离得到
新的化合物 ,具有抗结核菌和抑制原生质的作用[ 4] 。Masuda
等从假 叶中分离到一种新的和 3个已知的化合物 ,对埃希
氏菌属和杆状细菌具有一定的抑制作用[ 5] ,说明该类植物具
有潜在的抗菌价值 ,将假 叶应用于农业植物病害的防治上
将为杀菌剂的发展开辟一条新路。
(3)该研究结果表明 ,假 叶的甲醇提取物对香蕉炭疽
病菌和番木瓜炭疽病菌的 EC50值分别为 0.784 9 mg/ml 和
0.891 3mg/ml 。进一步用乙酸乙酯萃取假 叶甲醇提取物 ,
在 2 mg/ml的浓度下 ,对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌菌
丝生长的抑制率分别为 72.7%和 88.3%,乙酸乙酯萃取物对
香蕉炭疽病菌的 EC50值为 0.569 2mg/ml ,乙酸乙酯萃取物对
番木瓜炭疽病菌的 EC50值为 0.544 6mg/ml。
(4)该试验证实假 叶甲醇提取物中含有具有抑真菌活
性的次生物质 ,进一步研究表明 ,该物质溶于石油醚 、乙酸乙
酯 、正丁醇等有机溶剂 ,对进一步开发利用假 资源具有一
定的意义 ,但其作用方式 、作用机理有待进一步的研究。
参考文献
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804537卷17期　　　　　　　　　　　　　　　袁宏球等　假 甲醇提取物的抑制真菌作用