全 文 ：广州中医学院学报 189 8年第 5卷 第 4期
猫须草组织培养的研究
中药化学教研室陈佃 周 添浓 叶会呈
提要 : 本文报导了猫须草 〔 C L E R O D E N D R A T H U S S P工C A T U S ( T H u N B ) C . Y . w u . 〕 离体叶
片的愈伤组 织的诱导和培 养以及 化学成分 的初 步鉴定 . 认为 2肠次 氛酸钠溶液作为猫须草离体叶 片的消毒剂
诱导愈伤组织 的形 成效果较好 . 以 不含植物生长素叫味 乙酸和 6一 爷基嗦吟 的 M S培养基为基础 , 添加 2 . 4一
D ( Zm g / L ) 椰子 乳 ( 10 肠W / v ) 和蔗糖 ( 30 9 / L ) 的新培养基 , 调 p H 至 5~ 6 , 并 以琼脂 ( 9 9 / L )
固化在 15 磅 高压下 灭菌2 0分钟 , 然 后在无菌条件下接种 , 并放在 28 ~ 3 0℃ 恒温 箱中培 养, 对愈伤组织的诱
导和培养的效果最 为显著。
关键词 : 猫须草 组织培养/方法
猫须草 〔C l e r od e n dr an t h u s s p i c at u s 加 2 . 4一D Z毫克 /升或 4毫 克 /升 “ ’ 、 椰子乳
( T h nU b ) C
.
Y
.
W u
. 〕 ( 暂 定 ) 为 唇形
科植物 , 是从外地引种进来的一种南药 , 有
清热祛湿 、 利水排石等医疗作用 , 临床上 用
于治疗急慢性肾炎 、 膀胧炎 、 尿路结石 、 风
湿性关节炎等症 ` 5 ’ 。 由于药源缺乏 , 在临床
上很久以来无法供给使用 。 药用植物组织培
养技术在国内外已有不少研究 , 但有关猫须
草的组织培养研究未见报导 。 因此研究猫须
草的组织培养及其临床应用 , 对扩大药源 ,探
索 中药化学成分的生物合成途径都有着重要
而现实的意义 , 现在报告的是关于猫须草愈
伤组织的诱导和培养 。
材料和方法
用于诱导愈伤组织的是猫须草的叶片 ,
试验用的猫须草系我院药圃从湛江 、 福建等
地引种栽培的 。 接种前取猫须草的嫩叶用 自
来水充分冲洗干净 , 用消毒滤纸吸干 ,在无菌
条件下剪成 1厘米 左右的块状 ,先用纯酒精浸
0
.
5 ~ 1分钟 , 然后放 入 2肠次氯酸钠溶液中
消毒 15 ~ 20 分钟 , 最后 用无 菌水反复漂洗 3
~ 5次 , 用消毒的滤纸吸 干 , 在 无菌操作条
件下将已消毒的材料接种于已制备好的培养
基上 “ ’ 。 基本培养基 为M s( ` 、 “ ’ , 其中包含
有引噪乙酸 ( IA A ) 2毫克 /升 , 6一节基嚷
吟 ( B A p ) 2毫克 / 升 , 蔗糖 30 克 /升 , 并以
9克 /升琼脂固化 。 根据不同试脸要求分别放
( C M ) 1 0肠 , 赤霉素 ( G A : ) 2毫克 /升 。 培
养基配 制方法是按照无机盐类 、 微量元素类 、
维生素类 、 铁盐 、 2 . 4一D 、 I A A 、 B A P 、 赤霉
素等先配制成母液贮 藏于冰箱中 ` 7 ’ ” ’ , 临用
时才按需要量混合 , 并调 p H S一 6 。 在 15 磅
高压下灭菌 15 一 20 分钟 , 接种好的材料在 28
℃左右恒温箱中进行培养 ( 不需光照 ) , 光
培养 即是 白天用日光灯照射 10 ~ 1 2小时 。 常
用培养基组成如下 :
①M S ( 不加 IA A 十 B A P ) 十 2 . 4 一 D +
CM
②M S + 2 . 4 一 D
③M S + 2 . 4 一 D + C M ( A , 2 . 4 一 D Z
毫克 /升 ; B , 2 . 4 一 D 4毫克 /升 )
④M S + 2 . 4一 D + G A 3
⑤M S + 2 . 4 一 D + G A : + C M
结果与讨论
猫须草愈伤组 织的 诱 导和 培养结果表
明 :
1
. 不同消毒剂对愈伤组织的诱导频率是
不一样的 。 2肠次氯酸钠溶液比 10 肠次氯酸钙
效果较好 。 实验结果表明 : I 组为2肠次氯酸
钠溶液 , I 组为 10 肠次氯酸钙溶液 ,每组各接
种离体叶片数 10 片于 10 支试管培养基中 , I
组接种后 5天 , 形成愈伤组织数 5支 , 诱导率
50 肠 , I 组形成愈伤组织数 2支 , 诱导率 20 肠 ,
接种15 天后 I 组形成愈 伤组织 数为 4支 , 诱
DOI : 10. 13359 /j . cnki . gzxbtcm. 1988. 04. 010
导率 40 肠 , I 组形成 愈伤组 织数为 1支 , 诱
导率 1 0% 。 总之次氯酸钟溶遮作为消毒剂较
好 , 且使用方便 。 而次氯酸钙商品的质量不
保证 , 效果较差 。
以猫须草的幼叶为材料来诱导愈伤组织
用基本培养基M S , 除去IA A 和 B A P而添加
2
.
4一D Z毫克 /升和 10 肠的椰子乳 , 诱导出
愈伤组织并生长良好 。
接种于培养基的猫须草叶片大约一周左
右 , 离体叶片仍保持绿色 , 即开始陆续从叶
片的切口边缘长出白色粒团状的愈伤组织 ,
后转为黄色 , 时间越长 , 愈伤组织的颜色越
深 , 变成淡捺色或棕揭色。 愈伤组织质地疏
松又硬脆 ,常颗粒状堆积成小瘤状物 ,一触即
散 , 生长迅速的在半个月内即可把暴露于培
养基上叶片切段整个地包围起来 , 还未包 围
之前 , 仍可见离体叶 中间是绿色 , 有的叶片
直立 于培养基上 , 生长出愈伤组织包围整个
叶片切段而高 高 地突出 培养 墓的表面 ( 图
1 )
。 愈仿组织的颜 色可 随着培养基颜色形
成而变化 。
2
. 不同培养墓对愈伤组织生长的影响 。
新产生的愈伤组织生长 2 5 ~ 35 天即可分成若
干小块移至同样培养基中继续培养 , 也称为
转代培养 , 以后 30 ~ 5 0天转移一次 , 转移组
织块为 20 ~ 50 毫克 , 在 30 ~ 70 天培养中生长
增加 10 ~ 20 倍 。 . 转化培养基用①②③④⑤种
培养基均能使愈伤组织生长 , 但以不含 IA A
+ B A P的基本培养基 M S添 加 2 . 4 一 D + C M
生长最好 ( 表 1 ) 。 转代培 养的小块愈伤组
织经过导~ 7天培养就开始长出新的细胞 , 10
图 1 、 由叶片诱导产生的愈伤组织
图 2 、 脱离华母体 ” 后 60 天的愈伤组织
表 1 不同培养基对猫须草愈伤组织生长的影响
培养基 培养条件 鲜 重
(毫克 /块 )
_ 干
(毫克 /块
重 功 。 里 、
)
, 二 子 : 人 、
307”20540③种 A
③种 B
③种 A
③种B
①种 ( 试管 )
①种 ( 三角瓶 )
光培养
光培养
暗培养
暗培养
暗培养
暗培养
36 7 0
2 2 30
40 00
2 600
6710
558 0 4 300
广州中医学院学报 1 98 年第 5卷第 4期
天后生长速率明显加快 , 25 ~ 35 天生长速率
达到高峰 , 约 4。 ~ 60 天愈伤组织长满 了整个
培养基的位置 , 愈伤组织可伸进培养基 里生
长 , 使培养基裂开 , 甚至有几支试管的培养
基已被消耗掉为愈伤组织所代替了 ( 图 2 ) ,
6 。天后只要 还有 培养基存在 , 愈伤组织还
能继续再生长 , 因此在愈伤组织团里或多或
少夹杂着因生长时间较长而变成淡棕色或棕
褐色衰老而死亡的愈伤组织 ( 即使转代培养
也不生长 ) 。
3
. 光对猫须草愈伤组织的影响`。 ’ 。 光线
存在 与否对猫须草叶片愈伤组织的生长并无
明显的影响 ,也即是在暗培养或光培养下 , 愈
伤组织同样生长良好 。 ( 表 2 ) 在转代培养
表2 光对描须草愈伤组织生长的影响
理 一 光 光 暗 暗 暗 暗
2 4一 D ( 毫克 / 升 ) 2 ( 试 管 ) 2 ( 三角瓶 )
.68724.5.l87.52
生 长速 “ , ” ” … ` 2 2毫克 /克 /天、 二 ’ 、
{
8
74
.
3
6
。
7
1 33
.
3
7 3
中 , 愈伤组织在三角瓶培养基比在试管培养
基 中生长速 度更快 , 在同等条件下 , 愈伤组
织在三角瓶培养基比在试管培养基中生长速
度以干重计算增长 10 倍以上 。 这提供以三角
瓶 培养基进行培养可获得大量的愈伤组织的
理论根据 , 另外从表 2中也可以看出 2 . 4 一 D
的浓度 , 以 2毫克 /升和 4毫克 /升的处理 , 愈
伤组织均可生长 , 但以 2毫克 /升的浓度生长
较好 。
4
. 将每月转代一次 , 共有二次愈伤组织
获得鲜重 20 0多克 , 在 80 ℃ 烘干 粉碎 , 用中
国医学科学院北京药物所和上海药物所的方
法 ` ’ · 3 ’ , 对化学成分作了初步鉴定 。 目前猫
须草的真正有效成分尚未见报导 , 但经化学
成分的系统预试和层析预试验结果表明 , 含
有有机酸及其钙盐 、 单 糖 、 多糖 类 、 氨 基
酸 、 蛋白质 、 留体 、 酸性成分等 , 与栽培猫
须草基本相同 。 由于愈伤组织数量不足 , 含
量测定尚待进一步分析。
综合所得结果 , 用组织培养方法产生猫
须草的愈伤组织有可能作为药用的来源 , 大
量生产猫须草的愈伤组织可代替栽培的猫须
草制成药用饮料— 肾茶 , 给临床提供方便的剂型 , 并可为提供分化成苗 , 快速繁殖生
产和探索中药化学成分 的生 物合 成研究 打
下基础 。 但进一步再摸索愈伤组织快速生长
及其分化培养条件 、 药用成分含量测定等方
面仍在继继进行研究中。
参考文献
l
、 上 海植物生理研究所细胞室编译 . 植物组 织和细
胞培养 . 上 海科学技术出版社 19 78 : 21~ 28
2
、 中国科学院上海药物研究所 . 中草 药有效成 分 的
提取和分 离 ·第二版 , 上海科学技术出版社 1972 : 9 ~ 19氏
1 41~ 1妞 , 1 65~ 16氏 389 ~ 392
3
、 中国医学科学院药物研究所 . 中草药化 学成分的
研究 ( 第一分册 ) · 人民卫生出版社 1972 , 1 ~ 24 , 159
~ 17 0
.
4
、 四川省生物研 究所一室体 细胞组 . 盾叶薯欲组织
培养研究初报 . 1 978 , 20 ( 3 ) : 2 70~ 280 .
5
、 江苏新医学院 . 中药大 辞典 ( 下 ) · 上海人民出
版社 . 1977
6
、 郑光 植 、 梁峥 .云南萝芙木的组织培养 .植物学报
197 9: 2 1 ( 2 )
:
2 9 5~ 196
7
、 赖来展 . 水稻 的幼胚 . 子 房培养 . 农 业科技情报 资
料 l朋 1: 7、 15一 16
8
、
D e n i l N
,
B u 十e h e r a dn D
a v i d 5
.
1明 r am
P la爪 T is s t l e C u l t u re E d ,甲a dr A r on l d 1976
9
、
M眼hs ig e T . a dn F . S k o g . A ver i
1, 汉 1 m e d i u m f or ar P id g or 节 rt h b i-o
a 女粗 y s
侧 ht at b鱿义) t is u e cu l扣佗 . ph ys i ol P la nt ,
1962 : 1 5
:
473 ~ 4 97
.
2 18
S A t udy on TIS s ue C ul t ue r
Z h o“ T玄 an儿 O” g
of Ma oX uCa O
C几 en刀 i an Ye Hu班 e hen g
De Pa r t mn e t of P hy tc ohe mi s ty r
A加 r tac t
i h Tsa r ti el e re P r o te d thein d ue e mn e tn a d e ul t ure of thea ell us ti s s ue of i s ola tel eaf
b la d e of皿 a oX uCa o( l Ce r od en ea r ths uS pi ea t us( h T un b) C. Y. W U. ) an d the P rei l min a ry
i d en ti i f ea ti on of i ts e he mi a el e o mPs oi ti on s
.
S oi d umhy Pc ohl ori te s ol utin o( 2% w/
、 ) wa s s ueda s the di sin f ec tan t of Mq oX uCa o
, s
i s o l a t e l e a f b l a d e
,
w h i e h h a d a af i r l y g o o d e脱 e t i n i n d u e i n g e a l l a u s fo r m a t i o n .
T h e m o s t s i g n iif c a n t e爪 c t o n t h e i n d u e e m e n t a n d e u l t u r e o f t h e e a l l u s t i s s u e w a s
fo
u n d t h r o u g h t h e fo l l o w i n g P r o e e s s : t a k e M S e u l t u r e m e d i u m w i t h n o a u x i n i n d o l e
a e e t i e a e id a n d 6一 b e n z y e P u r i n e a s t h e b a s e , a d d t o a n e w e u l t u r e m e d iu ln o f Z 。 4一 d i c h l o r o ·
P h e n o x y a e e t i e a e i d ( 2
.
4一 D ) ( Zm g /l it r e )
, e o e o a n u t m i l k ( 10 孚认w /v 、 a n d s u e r o s e ( 3 0 9 /l i t r e )
a n d a dj
u s t t h e P H v a l u e t o s一 6 , s o li d i fy t h e m e d i u m w i t h a g a r ( 9 9 / l i t r e 、 a n d s t e r i l i z e i t b y
a u t o c l a v i n g a t 15 lb /i n Z fo r 2 0 m i n u t e s
.
T h e n i n o e u l a t e i t u n d e r t h e s t e r il e e i r e u m s t a n e e s
a n d P l a e e i t i n e o n s t a n t t e n 1P e r a t u r e o v e n a t 2 8一 3 0 oC
.
沪 >< . 心 , >< .飞
大` 卜布习 心v
Z丈 卜I L 盖
、 . >< 。 >< 。。 .刀
广东高校学报研 究会第二次代表会议在深 lIJ 举行
19 8 年 1 1月 n 日至 12 日广东省高等学校学报研究会第二次代表会议在深乡}l大学举行 . 会议总结了过去三
年的工作 , 分析了当前的形势 , 并对学报工作如何适应整个改革开放的形势进行了探讨 。 会议认为高校学报在
发展学术 、 促进交流 、 培养人才方面起了不可忽视的作用 , 所以 , 虽然目前教育 、 科研经费都还很困难 , 但
在最困难的时候各级教育部门还是保证了学报的出版 。 会议转达了广东省高等教育局局长周鹤 鸣 同 志 的意
见 : “ 要保证学报在学校内学术上的最高威信 , 将最好的文章在学报上发表 , 不能说过了长江 、 过了黄 河的
文章 ( 指在全国性刊物发表的文章— 编者注 ) 才好。 “ 会议代表就此进行了讨论 , 认为必须进一步健全学报编辑机构 , 开展编辑学研究 , 集中抓好学报编辑工作的规范化和个性问题 , 提高学报质量 , 进 一 步 树立
学报在各校 中的威信 , 使学报成为本校科研成果高水平的反映 , 为改变我国教育 、 科技落后的局面 贡 献 力
量 。 会议最后选举了学报研究会第二届理事会 , 我院赵立诚同志当选为该会理事 .
( 邝幸华 )