全 文 ：有柄石韦水提物对小鼠皮肤全层切除伤的促愈合作用*
＊
孔祥耀，于世博，黎小梅，唐 毅，倪 稳，陈明翠，张金娟＊＊
(贵州医科大学 化学与生物化学实验室，贵州 贵阳 550004)
［摘 要］目的:研究有柄石韦孢子叶(SPP)水提物对小鼠全层切除伤的影响。方法:对 75 只昆明小鼠做背
中线 100 mm2 的全层皮肤切除制作模型;随机均分成空白组、云南白药组和有柄石韦组，云南白药组和有柄石韦
组分别给予云南白药粉末和有柄石韦提取物敷于伤口，连续给药 5 d;计算造模后第 1 ～ 3 天，第 3 ～ 7 天，第 7 ～
14 天和第 14 ～ 18 天伤口缩小比例;于造模后第 3、7 及 18 天取处死小鼠，取背部皮肤组织行 HE染色，观察 3 组
小鼠伤口皮肤肉芽组织生长情况和再上皮化程度。结果:云南白药组和有柄石韦组在第 1 ～ 3 天、第 3 ～ 7 天、第
7 ～ 14 天和第 14 ～ 18 天时段的伤口缩小比例均大于对照组(P ＜ 0. 05);云南白药组在第 1 ～ 3 天、第 3 ～ 7 天和第
14 ～ 18 天时段的伤口缩小比例高于有柄石韦组(P ＜ 0. 05);造模后第 3 天，云南白药组和有柄石韦组的肉芽组
织较对照组组织规则厚实;第 7 天时，云南白药组和有柄石韦组的肉芽组织厚度增加，较为紧凑，无水肿现象，成
纤维细胞数量明显增高;第 18 天时，3 组小鼠组伤口基本愈合，但云南白药组和有柄石韦组的伤口愈合后组织
较对照组紧致，无水肿现象。结论:有柄石韦能促进小鼠伤口愈合，作用稍弱于云南白药。
［关键词］云南白药;伤口愈合;肉芽组织;小鼠;有柄石韦
［中图分类号］Ｒ285;Ｒ29 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707(2016)05-0555-04
DOI:10． 19367 / j． cnki． 1000-2707． 2016． 05． 015
Effect of Promoting Healing of Pyrrosia petiolosa Water
Extract in Mice＇s Full-thickness Excision Wound
KONG Xiangyao，YU Shibo，LI Xiaomei，TANG Yi，NI Wen，CHEN Mingcui，ZHANG Jinjuan
(Laboratory of Chemistry and Biochemistry，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)
［Abstract］Objective:To observe the effect of water extract of Pyrrosia petiolosa on mice＇s full-thick-
ness excision wound． Methods:75 Kunming mice received adaptive feeding for 3 days，and 100 mm2
full thickness skin resection model was established on mice＇s dorsal midline． Then the mice were ran-
domly divided into blank control group，Yunnan baiyao group and Pyrrosia petiolosa group． In Yunnan
baiyao group，the powder was applied to the wound while in Pyrrosia petiolosa group the water extract
of Pyrrosia petiolosa applied to the wound，and both groups received continuous administration for 5
days，once per day． Wound＇s area and volume reduction ratio was calculated during 1 ～ 3 days，during
3 ～ 7 days，during 7 ～ 14 days and during 14 ～ 18 days，respectively． Mice were sacrificed 3th，7th，
18th day after model establishment，HE dyeing was conducted for dorsal skin tissue． The growth of skin
granulation tissue and the degree of re-epithelialization of wound skin in mice were observed in the
three groups． Ｒesults:Compared with blank control group，the wound＇s area and volume reduction ra-
tio in Pyrrosia petiolosa group and Yunnan Baiyao group during 1 ～ 3 days，3 ～ 7 days，7 ～ 14 days
and 14 ～ 18 days was significantly higher(P ＜ 0． 05)． Compared with Pyrrosia petiolosa group，the
wound＇s area and volume reduction ratio in Yunnan Baiyao group during 1 ～ 3 days，3 ～ 7 days，and 14
～18 days was significantly higher(P ＜ 0． 05)． On the 7th day，the thickness of granulation tissue in-
creased，skin granulation tissue was more compact． Besides，no edema existed in skin granulation tis-
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第 41 卷 第 5 期
2016 年 5 月
贵 阳 医 学 院 学 报
JOUＲNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
Vol． 41 No． 5
2016． 5
* *［基金项目］大学生创新创业基金重点项目(NO． 201410660001)
＊＊通信作者 E-mail:826609585@ qq． com
网络出版时间:2016 － 05 － 13 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /52． 5012． Ｒ． 20160513． 2204． 062． html
sue and the number of fibroblasts was significantly increased． On the 18th day，wound almost healed in
all three groups，but the tissue after wound healing in Pyrrosia petiolosa group and Yunnan Baiyao
group was more compact compared with blank control group． Also，there was no edema in tissue of
Pyrrosia petiolosa group and Yunnan Baiyao group． Conclusion:Pyrrosia petiolosa can promote wound
healing but its effect is poorer thanYunnan Baiyao．
［Key words］Yunnan Baiyao;wound healing;skin granulation tissue;mice;Pyrrosia petiolosa
伤口愈合是一个进化上相对保守、复杂、多细
胞参与的过程，是皮肤屏障的重建过程。这个过程
涉及了角质细胞、成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞
以及血小板等多种细胞的共同作用。这些细胞的
转移、增殖、浸润和分化将会在炎症反应、新组织的
形成以及伤口愈合中达到顶峰［1］。有柄石韦(Pyr-
rosia petiolosa)是水龙骨科石韦属下的蕨类植物，
《苗药》中记载为黛口掌，锐猫棍，多用于治疗肺
癌、膀胱癌、肾炎、膀胱炎、肾结石、血尿、咳血、衄血
以及哮喘。石韦属植物主要成分为黄酮类化合物，
对常见的革兰阳性细菌如金黄色葡萄球菌及革兰
阴性菌如大肠埃希菌等均有一定的抑菌效果［2 － 4］。
贵州民间多把此药用于止血和促进伤口愈合，效果
显著。本文用有柄石韦孢子叶粉碎后粉末的水提
物处理以小鼠皮肤全层切除伤，观察有柄石韦对伤
口愈合的作用。
1 材料与方法
1. 1 试药与试剂
试药为有柄石韦，采摘于贵州当地，并于贵州
医科大学天然产物化学重点实验室鉴定。取其孢
子叶于贵州医科大学药学院天然药物化学实验室
100 目粉碎机粉碎，采用水提法进行有柄石韦水提
物制备;试剂有 95%无水酒精、碘伏、3%戊巴比妥
钠溶液、10%中性甲醛固定液及 HE 染液;ＲM2015
型石蜡切片机(德国莱卡公司)，DSHZ-300 型恒温
水浴箱(江苏太仓)，BX51T-PHD-J11 型显微镜(日
本奥林巴斯)。
1. 2 方法
1. 2. 1 动物分组及造模 健康 SPF级昆明雄性小
鼠 75 只，体质量(20 ± 3)g，由贵州医科大学动物
中心提供，使用许可证号为 SCXK(黔)2014 － 001。
随机均分成对照组、云南白药组和有柄石韦组，每
组又随机均分成第 1、3、7、14 及 18 天 5 个小组。
造模:小鼠适应性饲养 3 d后，3%戊巴比妥钠腹腔
注射麻醉，背部去毛，于每只小鼠背部脊柱正中线
做 100 mm2 大小的全层皮肤切除(不损伤筋膜
层);术后对照组伤口不给于任何措施，云南白药
组给予云南白药粉末，有柄石韦水提组给予有柄石
韦水提物，将药物敷于伤口上，并予清洁纱布包扎，
每天给药 1 次，连续给药 5 d。
1. 2. 2 伤口缩小比例的计算 造模当天设为第 0
天，于造模后第 1、3、7、14 及 18 天在伤口同一水平
放置钢尺以作为伤口实际面积大小的参照物，数码
相机拍摄。计算并记录伤口缩小比例［如:第 n ～
(n + 3)天伤口缩小比例 =(第 n天伤口面积 －第 n
+ 3 天伤口面积)/第 n天伤口面积 × 100%］。
1. 2. 3 病理组织染色 造模后第 3、7 及 18 天时
取小鼠伤口及创缘皮肤组织，于 10%中性甲醛固
定 24 h，常规脱水，二甲苯透明和包埋组织块。
5 μm切片，常规 HE 染色，光学显微镜下观察组织
病理 HE 染色切片，以愈合区域再生表皮完整程
度，肉芽组织紧致程度和出现水肿为指标判断伤口
愈合质量，愈合质量较差为再生表皮不完整，肉芽
组织松散，有水肿;愈合质量一般为再生表皮部分
完整，肉芽组织无明显水肿;愈合质量较好为再生
表皮完整，肉芽组织紧致，无水肿［5］。
1. 3 统计方法
所有实验数据采用 SPSS 17. 0 软件进行统计
学分析。数据以均数 ±标准差(x ± s)表示，并采用
单因素方差分析进行统计学处理，两两比较采用 t
检验，以 P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 伤口缩小比例
云南白药组和有柄石韦组在第 1 ～ 3 天、第 3
～ 7 天、第 7 ～ 14 天和第 14 ～ 18 天时段的伤口缩
小比例均大于对照组，差异有统计学意义(P ＜
0. 05)。而云南白药组在第 1 ～ 3 天、第 3 ～ 7 天和
第 14 ～ 18 天时段的伤口缩小比例高于有柄石韦
组，差异有统计学意义(P ＜ 0. 05)，第 7 ～ 14 天差
异无统计学意义(P ＞ 0. 05)。见表 1。
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贵 阳 医 学 院 学 报 41 卷
表 1 3 组皮肤全层切除伤小鼠伤口缩小比例(x ± s)
Tab． 1 The wound area and volume reduction ratios in three groups
组别 第 1 ～ 3 天 第 3 ～ 7 天 第 7 ～ 14 天 第 14 ～ 18 天
对照组 12. 926 ± 6. 345 15. 794 ± 1. 965 41. 524 ± 3. 457 73. 912 ± 3. 957
云南白药组 25. 170 ± 2. 636(1) 27. 778 ± 2. 959(1) 52. 078 ± 6. 413(2) 95. 734 ± 4. 054(1)
有柄石韦组 20. 702 ± 2. 783(2)(3) 19. 360 ± 1. 154(1)(4) 58. 110 ± 6. 258(1) 86. 896 ± 7. 464(1)(4)
与对照组相比，(1)P ＜ 0. 01，(2)P ＜ 0. 05;与云南白药组相比，(3)P ＜ 0. 01，(4)P ＜ 0. 05
2. 2 炎症细胞数量、肉芽组织松紧程度和上皮化
程度
造模后第 3 天，云南白药组和有柄石韦组的肉
芽组织较规则且厚实(图 1A ～ B)，而对照组的肉
芽组织显得菲薄和不规则(图 1C)。造模后第 7
天，云南白药组和有柄石韦组的肉芽组织继续生
长，相比造模后第 3 天，厚度有所增加，并且较为紧
凑，无水肿现象，并且两组成纤维细胞数量明显增
高(图 1D ～ E)。而对照组相对无明显变化(图
1F)。造模后第 18 天，3 组伤口均基本愈合，与对
照组相比，云南白药组和有柄石韦组的愈合后组织
在镜下显得更为紧致，无水肿现象;且云南白药组
有柄石韦组已出现较多的毛囊和皮脂腺(图 1G ～
H)，而对照组相对较少(图 1I)。
注:A、B、C分别为第 3 天云南白药组、有柄石韦组和对照组(HE，× 200);D、E、F分别为第 7 天云南白药组、
有柄石韦组和对照组(HE，× 400);G、H、I分别为第 18 天云南白药组、有柄石韦组和对照组(HE，× 200)
图 1 3 组皮肤全层切除伤小鼠皮肤肉芽组织
Fig． 1 The HE dyeing of skin granulation tissue in three groups
3 讨论
皮肤创伤是一种常见的健康问题，发生率较
高，如处理不当会引起皮肤感染溃烂，延期愈合，寻
找一种快速促进皮肤伤口愈合的药物，是药物研发
领域最古老，也是最重要的挑战之一。云南白药作
为我国传统促愈良药，可以显著缩短伤口出血时
间、凝血时间及凝血酶原时间，现已被广泛应用于
治疗临床创伤出血、消化道出血等各种出血性疾
病［6］。有柄石韦是水龙骨科石韦属下的蕨类植
物，产于中国东北、华北、西北、西南和长江中下游
各省区，具有重要的药用价值，性甘、苦，微寒，归
肺、膀胱经，有利尿通淋、清热止血的作用。《苗
药》中被叫做黛口掌、锐猫棍，全草被用于治疗肺
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5 期 孔祥耀等 有柄石韦水提物对小鼠皮肤全层切除伤的促愈合作用
癌、膀胱癌、肾炎、膀胱炎、肾结石、血尿、咳血、衄血
以及哮喘。石韦属植物主要成分为黄酮类化合物，
如山奈酚槲皮素、异槲皮素、异槲皮苷、芒果苷类
等。在贵州民间，多作为刀口药用于促进伤口愈
合，且效果显著。因此对有柄石韦进行促进皮肤愈
合研究，寻找其有效成分，为寻找皮肤创伤治疗药
物提供了一个有效的研究途径。
本实验采用小鼠皮肤全层切除伤模型研究有
柄石韦水提物对伤口愈合的作用。伤口愈合过程
伴随肉芽组织增生及伤口面积缩小。肉芽组织中
的成纤维细胞产生肌动蛋白，而形成肌成纤维细
胞，这些细胞产生机械拉力，将创缘向中心牵拉，从
而使伤口不断收缩，因此伤口缩小比例反映了伤口
愈合的速度;同一段时间内伤口缩小比例越大，说
明伤口愈合的趋势越明显。本研究结果显示，经云
南白药和有柄石韦治疗的伤口缩小比例均大于同
期的对照伤口，说明有柄石韦在促进伤口愈合上有
积极作用。
上皮细胞、成纤维细胞在伤口修复过程中均有
重要作用［7 － 8］。本研究采用 HE 染色评估创缘肉
芽组织的生长情况，结果发现，云南白药组和有柄
石韦组的肉芽组织较对照的肉茅组织紧致、厚实。
云南白药组和有柄石韦组第 18 天的切片相对对照
的上皮化完整，皮下已有毛囊和皮脂腺。证明有柄
石韦提取物对伤口的愈合较为完全，附件功能恢复
较好，与文献报道一致［9 － 11］。本研究后续将考虑
提取有柄石韦活性物质及进一步探明和阐述。
4 参考文献
［1］ Barrientos，Stojadinovic O，Golinko MS，et al． Growth
factors and cytokines in wound healing［J］． Wound heal-
ing and Ｒegeneration，2008(5):585 － 601．
［2］庞荣，高德民，王萍，等．有柄石韦不同提取物半数抑菌
浓度初探［J］． 中国野生植物资源，2013(32):19 －
20．
［3］陈超君，尹小红，黄敏，等．石韦孢子叶和营养叶中活性
成分含量分析［J］．广西植物，2010(1):133 － 136．
［4］李雁群，黎桦，陈超君，等．石韦醇提物抑菌活性的初步
研究［J］．时珍国医国药，2010(1):142 － 143．
［5］连泽勤，高健，李晓滨，等．白花檵木促大鼠皮肤伤口愈
合物质基础初步研究［J］．中国中药杂志，2013(38):
3566 － 3570．
［6］林焕阳，金大地，陈建民，等．云南白药对颈椎管扩大成
形术出血量影响的研究［J］．中国中医现代远程教育，
2008(6):1171 － 1172．
［7］ Barrientos，Stojadinovic O，Golinko MS，et al． Growth
factors and cytokines in wound healing［J］． Wound heal-
ing and Ｒegeneration，2008(5) :585 － 601．
［8］毛竹君，齐方洲，熊耀康，等．多枝柽柳乙酸乙酯提取物
对小鼠皮肤伤口愈合的影响［J］． 浙江中医药大学学
报，2013(10):1222 － 1225．
［9］张志宏，陈丽萍，王磊，等．苦参碱对皮肤伤口愈合的影
响的研究［J］．按摩与康复医学，2012(36):14 － 15．
［10］孙晓明，张余光． 缓释材料在促进皮肤伤口愈合中的
应用研究及进展［J］． 中国美容整形外科杂志，2013
(2):119 － 121．
［11］杨虎，郑丽君，黄新建，等． 壳聚糖护肤液促进大鼠伤
口愈合的研究［J］． 中华皮肤科杂志，2011(12):891
－ 893．
(2016－01－03 收稿，2016－04－20 修回)
中文编辑:吴昌学;英文编辑:刘
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殺
殺
殺
殺
华
有效数字的确定
有效数字是在测量中所能得到的有实际意义的数字。一个由有效数字构成的数值，只有末位数字是估计数
字，其余各位数字都是准确的。有效数字与测量仪器的灵敏度有关。以天平称重为例，如果天平的灵敏度为
0. 1 mg，那么称重结果 12． 34 mg中，12. 3 mg为准确数字，0. 04 mg为估计数字，两项合在一起组成有效数字。平
均值 ±标准差的位数，除了决定于测量仪器的精密度外，还决定于样本内个体的变异，一般按标准差的三分之一
来确定。例如:(3． 61 ± 0． 42)kg，标准差的三分之一为 0. 14，标准差波动在百克位，即小数点后第 1 位上，故应取
到小数点后第 1 位，即 3． 6 ± 0． 4，过多的位数并无意义。但是在一系列数值并列时，小数点后的位数应一致。例
如在 3． 61 ± 0． 42、5． 86 ± 0． 73、2． 34 ± 0． 15 这样一组数据中，第 3 组数据标准差 0． 15 的三分之一为 0． 05，在小数
点后第 2 位，则这组数据的有效位数可均取到第 2 位。
《贵阳医学院学报》编辑部
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贵 阳 医 学 院 学 报 41 卷