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假蒟不同极性部位提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性



全 文 :6期
收稿日期:2014-01-15
基金项目:海南省重点科技项目(01203)
作者简介:刘红芳(1978-),主要从事植物病虫害防治研究工作,E-mail:lhongfang@163.com
假蒟不同极性部位提取物对斜纹夜蛾卵
的生物活性
刘红芳1,邸仕忠2,符悦冠3
(1长江师范学院 生命科学与技术学院,重庆 408100; 2重庆市渝东南农业科学院,重庆 408000;
3中国热带农业科学院 环境与植物保护研究所,海南 儋州 571737)
摘要:【目的】研究假蒟不同极性溶剂提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性,为斜纹夜蛾高效低毒植物保护剂的研制
提供理论依据。【方法】以假蒟为试验材料、斜纹夜蛾卵为试验对象,在室内采用索氏提取法抽提假蒟杀虫活性成分,
测定假蒟不同极性溶剂提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性。【结果】不同溶剂中,以石油醚提取物对斜纹夜蛾卵的触杀
活性较高,其中,假蒟根石油醚提取物的活性最高,其校正卵死亡率为80.04%,其次是茎石油醚提取物,其校正卵死亡
率为79.95%,再次是叶石油醚提取物,其校正卵死亡率为76.36%,3种提取物与对照均达显著差异水平,但三者间差异
不显著。在一定浸渍时间范围(10~30 s)内假蒟石油醚提取物对同一卵龄斜纹夜蛾卵的生物活性不受浸渍时间长短的
影响,但卵龄越小杀卵率越高。假蒟根、茎、叶石油醚提取物对斜纹夜蛾24 h卵龄卵的致死中浓度分别为1.7307%、
1.6844%和1.9787%。【结论】假蒟的石油醚提取物对斜纹夜蛾卵有较高的生物活性,是一种极具开发潜力的杀虫植物。
关键词:假蒟;提取物;斜纹夜蛾;生物活性
中图分类号:S433.4 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2014)06-0995-05
0 引言
【研究意义】斜纹夜蛾(Spodoptera litura)属鳞翅
目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuidae),是一种繁殖能力
强、食性广、世界性分布的农业害虫(姚文辉,2005;陈
斌等,2008)。长期以来对斜纹夜蛾的防治主要依赖化
学农药,使得该虫对多种杀虫剂产生了不同程度的抗
Effects of different extracts from polarity positions of Piper
sarmentosum on biological activity of Spodoptera litura
LIUHong-fang1,DIShi-zhong2,FUYue-guan3
(1Life Science and Technology Institute,Yangtze Normal University,Chongqing 408100,China;2Chongqing Yudongnan
Academy of Agricultural Sciences,Chongqing 408000,China;3Institute of Environment and Plant Protection,Chinese
Academy of Tropical Agricultural Sciences,Danzhou,Hainan 571737,China)
Abstract:【Objective】Effects of different extracts from polarity positions of Piper sarmentosum on biological activity of
Spodoptera litura were studied to provide references for the development of agent with high efficiency and low toxicity of
plant protection of Spodoptera litura. 【Method】With Piper sarmentosum as test material and Spodoptera litura as test object,
insecticidal active ingredients were extracted in laboratory using Soxhlet extraction and the biological activity of Piper
sarmentosum extracts on Spodoptera litura eggs was determined. 【Result】Petroleum ether extract from roots of Piper
sarmentosum showed the highest activity, and the mortality percentage was 80.04%. Petroleum ether extract from stems of
Piper sarmentosum was the second, and the mortality percentage was 79.95%. Petroleum ether extract from leaves of Piper
sarmentosum was the third, and the mortality percentage was 76.36%. There were significant differences between the three
extracts and the control, but the difference was not significant among the three extracts. In a certain range of soaking time
(10-30 s), the bioactivity had nothing to do with the soaking time. But the egg stage was smaller and the bioactivity was
higher. The petroleum ether extracts from the roots, stems and leaves of Piper sarmentosum had high killing-egg rates
against Spodoptera litura, with the LC50 to one-day eggs of 1.7307%, 1.6844% and 1.9787%, respectively. 【Conclusion】
Petroleum ether extracts from Piper sarmentosum showed high biological activity, so Piper sarmentosum is a potential
insecticidal plant.
Key words: Piper sarmentosum; extract; Spodoptera litura; bioactivity
DOI:10.3969/j:issn.2095-1191.2014.6.995
南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2014,45(6):995-999
ISSN 2095-1191;CODEN NNXAAB http://www.nfnyxb.cn
南 方 农 业 学 报 45卷
性(Ahmad et al.,2008;Saleem et al.,2008)。因此,寻
找对斜纹夜蛾高效低毒的杀虫物质以满足无公害蔬
菜生产的需要成为一个亟待解决的课题。假蒟
(Piper sarmentosum)属胡椒科(Piperaceae)胡椒属
(Piper),富含胡椒碱、细辛脑、萜烯类等多种活性物
质,是一种药食两用植物,对环境和人畜安全性较高
(宋艳平等,2006)。近年来,假蒟对害虫的生物活性
已经开始受到人们的关注(刘红芳等,2005;张方平
等,2006,2009;覃伟权等,2008;冯岗等,2013)。假蒟
多见于我国南方热带地区阴暗潮湿的山谷或密林树
丛中,资源丰富(陈焕镛,1964),是一种具有较大发展
潜力的杀虫植物资源,对新的植物保护剂的开发具有
重要意义。【前人研究进展】刘红芳等(2005)在室内对
假蒟等50种热带植物乙醇提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫
的拒食活性进行筛选,结果表明,假蒟乙醇提取物对
斜纹夜蛾幼虫表现出很高的拒食活性,其拒食率达
92.50%。张方平等(2006,2009)研究了假蒟对比哈小
爪螨(Oligonychus biharensis)和皮氏叶螨(Tetranychus
piercei)的生物活性,结果显示,假蒟对比哈小爪螨成
螨驱避作用达82.17%,对比哈小爪螨的产卵驱避作用
达97.97%;假蒟提取物对皮氏叶螨卵的孵化、若螨及
成螨触杀、成螨寿命、驱避、抑制产卵等方面均具有良
好活性。覃伟权等(2008)测定了假蒟乙醇提取物对椰
心叶甲(Brontispa longissima)的拒食活性,结果表明,
0.01 g/mL假蒟乙醇提取物对1~5龄幼虫及成虫均有拒
食作用,尤其对1龄幼虫拒食作用最强,达91.52 %。冯
岗等(2013)以螺旋粉虱为供试对象测定了假蒟乙醇
提取物对螺旋粉虱(Aleurodicus disperses)成虫和若
虫的毒杀活性及杀卵作用,结果表明,假蒟乙醇提取
物对螺旋粉虱成虫和若虫均具有很好的杀虫活性。
【本研究切入点】虽然假蒟在农业生产中对害虫的生
物活性已经得到关注,但多数研究仅局限于全株乙醇
粗提物的生物活性研究,鲜有对假蒟不同部位、不同
溶剂提取物对害虫生物活性的报道。【拟解决的关键
问题】以假蒟为试验材料、斜纹夜蛾卵为试验对象,用
石油醚、氯仿、乙酸已酯、乙醇、甲醇等5种不同极性溶
剂对假蒟根、茎、叶进行系列溶剂分步提取,测定假
蒟不同极性溶剂提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性,
以期为斜纹夜蛾高效低毒植物保护剂的研制提供理
论依据。
1 材料与方法
1. 1试验材料
1. 1. 1 供试卵的准备 在华南热带农业大学植保学
院基地的甘蓝地中采集斜纹夜蛾幼虫,在室内饲养至
成虫,配对后放入盒盖打有许多细孔的塑料养虫盒内
(长25 cm、宽15 cm、高8 cm),盒底铺垫产卵纸供其产
卵,并用10%蔗糖水为其补充营养。每12 h收集一次带
卵块的产卵纸。把卵块分别放入培养皿中,立刻用药
液处理;或在温度(24±1)℃、相对湿度(80±10)%、光周
期为L∶D=12 h∶12 h的人工气候箱中发育到所需时间,
即卵龄分别为24、48 h时用药液处理。
1. 1. 2 供试植物 假蒟采自中国热带农业科学院环
境与植物保护研究所试验场。
1. 2试验方法
1. 2. 1 提取物的制备 将采集的新鲜假蒟清洗干
净,并将其叶、茎、根分开,置于避光处自然阴干,用植
物粉碎研磨机粉碎,过30目筛,称取适量干粉,装入
高10 cm、直径5 cm的滤纸圆筒内,上下均封口后放入
索氏提取器中,分别用石油醚(沸程60~90 ℃)、氯仿、
乙酸已酯、乙醇、甲醇(在500 mL的平底烧瓶中加入提
取溶剂250 mL)等系列溶剂进行分步提取。
1. 2. 2 提取物溶液配制 分别称取一定量不同溶剂
假蒟提取物,先加3 mL丙酮,并加入一滴吐温80作为
辅助剂,在振荡器上振荡,溶解后再加入清水定溶,配
制成所需质量分数溶液,再在振荡器上振荡均匀。
1. 2. 3 假蒟不同部位、不同溶剂提取物对斜纹夜蛾
卵的生物活性初步测定 将卵块剪成小块,每块约60
粒卵,连同产卵纸在预先配制的5%溶液中浸泡10
min,取出后用吸水纸把粘附于产卵纸和卵块上的多
余溶液吸去,以清水加3 mL丙酮再加一滴吐温80作对
照。将每个卵块分别放到玻璃试管(高5.0 cm、直径
2.5 cm,下同)中,用昆虫针打有细孔的塑料纸将其封
口,置于(24±1)℃、相对湿度(80±10)%、光周期为L∶
D=12∶12的人工气候箱中培养,待卵发育至将要孵化
时,加入直径约3 cm的蓖麻叶片供孵化的幼虫取食;
检查并记录每块卵的孵化和未孵化卵粒数,根据公式
计算卵死亡率和校正死亡率。每处理3次重复。
孵死亡率(%)=未孵化卵粒数
供试总卵粒数
(1)
校正卵死亡率(%)=W2-W1
1-W1
×100 (2)
其中,W1表示对照卵死亡率(%),W2表示处理卵
死亡率(%)。
1. 2. 4 假蒟提取物不同浸泡时间对不同卵龄斜纹夜
蛾卵死亡率的影响 选择杀卵活性较高的假蒟提取
物,配制成质量分数为5%的溶液。将不同卵龄的卵块
剪成约60粒卵/块的卵块,连同产卵纸在配制的5%溶
液中浸泡,浸渍时间分别为10、20、30 min,取出后用
吸水纸把粘附在产卵纸和卵块上的多余溶液吸去。将
卵块分别放到玻璃试管中,用昆虫针打有细孔的塑料
纸将其封口,置于(24±1)℃、相对湿度(80±10)%、光周
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6期 刘红芳等:假蒟不同极性部位提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性
期为L∶D=12∶12的人工气候箱中培养,待卵发育至将
要孵化时,加入直径约3 cm的蓖麻叶片供孵化的幼虫
取食;检查并记录每块卵的孵化和未孵化卵粒数,计
算卵死亡率。以清水加3 mL丙酮再加一滴吐温80作对
照。每处理3次重复。
1. 2. 5 假蒟提取物对斜纹夜蛾卵的毒力测定 选择
杀卵活性较高的假蒟提取物对卵龄为24 h的卵进行
杀卵毒力测定。测定方法:按等比稀释法将药剂稀释
为质量分数分别为 5.00%、2.50%、1.25%、0.60%和
0.30%的溶液,试验方法同1.2.3。
1. 3统计分析
根据公式(1)分别计算提取物不同质量分数下的
死亡率,再将死亡率转化成几率值,质量分数转化成
对数值,利用SAS统计软件计算回归方程、相关系数
(r)、致死中浓度LC50及95%置信区间。
2 结果与分析
2. 1假蒟不同溶剂提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性
从表1可以看出,假蒟不同部位、不同溶剂提取物
对斜纹夜蛾卵的触杀活性不同,以石油醚提取物对斜
纹夜蛾卵的触杀活性较高,其中,假蒟根石油醚提取
物的活性最高,其校正卵死亡率为80.04%,其次是茎
石油醚提取物,其校正卵死亡率为79.95%,叶石油醚
提取物的杀卵活性最低,其校正卵死亡率为76.36%,
三者与对照均达显著差异水平(P<0.05,下同),而三者
间差异不显著(P>0.05,下同)。其他溶剂提取物除了
根氯仿提取物、乙酸已酯提取物和茎氯仿提取物与对
照差异显著外,其他溶剂提取物的杀卵活性均在10%
以下,且与对照差异不显著。因此,以假蒟石油醚提取
物进行后续试验。
2. 2假蒟石油醚提取物不同浸泡时间对斜纹夜蛾不
同卵龄卵的生物活性
从表2可以看出,各处理的卵死亡率在70.00%~
98.00%。经方差分析,各处理平均卵死亡率与对照之
间差异达显著水平;同一卵龄不同浸泡时间各处理间
差异不显著;不同卵龄相同浸泡时间各处理之间,只
有茎石油醚提取物各处理之间不存在显著差异,而根
石油醚提取物各处理与叶石油醚提取物各处理之间
差异显著。从图1、2、3中可以看出,卵龄越低假蒟石油
醚提取物对其卵的杀卵率越高。由此可见,假蒟不同
部位石油醚提取物5%溶液对斜纹夜蛾各龄卵均有生
物活性,且在一定浸渍时间范围内(10~30 s)对同一卵
龄的生物活性不受浸渍时间长短的影响;处理时卵龄
越小卵死亡率越高,表明斜纹夜蛾卵龄是影响假蒟提
取物对卵生物活性的一个重要因子。
表 1 假蒟不同部位不同溶剂提取物对斜纹夜蛾卵的生物
活性
Tab.1 Effects of different extracts from polarity positions of
Piper sarmentosum on biological activity of Spodoptera litura
提取部位 提取物 卵死亡率(%) 校正卵死亡率(%)
Tested Extract ±S.E. Corrected
position death rate death rate
根 Root 石油醚提取物 80.38±4.61a 80.04
氯仿提取物 12.74±5.68b 11.21
乙酸已酯提取物 11.77±4.94b 10.22
乙醇提取物 2.78±3.02c 1.08
甲醇提取物 0.60±0.84c -1.15
茎 Stem 石油醚提取物 80.30±5.52a 79.95
氯仿提取物 11.47±4.15b 9.92
乙酸已酯提取物 0.48±0.67c -1.75
乙醇提取物 0.74±1.05bc 5.57
甲醇提取物 0.95±1.35bc 3.46
叶 Leaf 石油醚提取物 76.77±6.72a 76.36
氯仿提取物 0c -
乙酸已酯提取物 0c -
乙醇提取物 0.74±1.05c -1.00
甲醇提取物 0.95±1.35c -0.79
CK 1.72±2.44c
同列数据后不同小写字母表示在0.05水平下差异显著。下同
Different lowercase alphabets in the same column represented significant
difference at 0.05 level. The same was applied in the subsequent tables
表 2 假蒟不同部位石油醚提取物不同浸泡时间对不同卵龄
斜纹夜蛾卵的影响
Tab.2 Effects of petroleum of different soaking times ether ex-
tract from different positions of Piper sarmentosum on Spodoptera
litura egg with different ages
提取部位 卵龄(h)浸泡时间(s) 卵死亡率(%)校正卵死亡率(%)
Tested Egg of Soaking Death Corrected
position age time rate death rate
根 Root 0 10 96.60±2.55ab 96.57
20 96.17±1.23abc 96.17
30 97.80±1.57a 97.78
24 10 80.38±4.61ghi 80.38
20 78.41±6.85ghi 78.14
30 84.48±3.91efgh 84.38
48 10 81.13±1.58fghi 81.13
20 78.78±1.80ghi 78.55
30 80.62±4.91fgdi 80.54
茎 Stem 0 10 85.78±5.56efgh 85.68
20 88.06±1.04defg 88.06
30 87.42±1.96defgh 87.34
24 10 80.30±5.52ghi 80.30
20 80.40±2.18ghi 80.16
30 81.43±4.72fghi 81.30
48 10 79.76±5.37ghi 79.76
20 81.13±3.31fghi 80.93
30 75.91±8.22hi 75.81
叶 Leaf 0 10 91.54±5.46bcde 91.48
20 90.26±4.59cdef 90.26
30 94.53±2.03abcd 94.50
24 10 76.77±6.72ghi 76.77
20 69.67±4.82i 69.30
30 81.51±3.46fghi 81.38
48 10 76.10±7.32hi 76.10
20 71.98±5.77i 71.68
30 78.77±2.79ghi 78.67
CK 0 10 0.68±0.96j
20 0j
30 0.65±0.92j
24 10 0j
20 1.21±1.71j
30 0.68±0.96j
48 10 0j
20 1.076±0.78j
30 0.44±0.63j
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0.00
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图 1 假蒟根石油迷提取物对不同卵龄斜纹夜蛾卵的影响
Fig.1 Effects of petroleum ether extract from Piper sarmento-
sum root on Spodoptera litura eggs with different ages
图 2 假蒟茎石油迷提取物对不同卵龄斜纹夜蛾卵的影响
Fig.2 Effects of petroleum ether extract from Piper sarmento-
sum stem on Spodoptera litura eggs with different ages
图 3 假蒟叶石油迷提取物对不同卵龄斜纹夜蛾卵的影响
Fig.3 Effects of petroleum ether extract from Piper sarmento-
sum leaf on Spodoptera litura eggs with different ages
2. 3假蒟石油醚提取物对斜纹夜蛾卵的毒力
不同质量分数假蒟根、茎、叶石油醚提取物对卵
龄为24 h的斜纹夜蛾卵的触杀活性结果见表3,根据
表3得到假蒟根、茎、叶石油醚提取物对卵龄为24 h的
斜纹夜蛾卵的回归方程、致死中浓度(表4)。从表4可
以看出,假蒟茎石油醚提取物对斜纹夜蛾卵的致死中
浓度最低,为1.6844%,其对斜纹夜蛾卵的致死效果最
好,其次是假蒟根石油醚提取物,假蒟叶石油醚提取
物的致死中浓度最高。
3 讨论
本研究分别对假蒟根、茎、叶3个部位的活性成分
用石油醚、氯仿、乙酸已酯、乙醇、甲醇等5种不同极性
溶剂进行分步提取,并对假蒟不同部位、不同极性溶
剂提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性进行研究,结果表
明假蒟根、茎、叶石油醚提取物对斜纹夜蛾卵均具有
较高的生物活性,其中假蒟根石油醚提取物生物活性
最高,其次为茎石油醚提取物,再次是叶石油醚提取
物。假蒟根、茎、叶石油醚提取物均对斜纹夜蛾卵有生
物活性,说明活性物质分布于假蒟全株,该结果与有
关学者研究的植物杀虫、杀螨活性物质可能分布于植
物的各个部位一致(刘红芳等,2005);其中假蒟根石
油醚提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性最高,可能是同
一种植物不同部位活性成分含量不同或活性成分存
在差异;假蒟不同部位石油醚提取物对不同龄期斜纹
夜蛾卵均有较高活性,且卵龄越低杀卵率越高,这与
表 3 假蒟不同部位石油醚提取物对斜纹夜蛾卵的活性
Tab.3 Effects of petroleum ether extract from different posi-
tions of Piper sarmentosum on activity of Spodoptera litura egg
提取部位 质量分数(%) 卵死亡率(%) 校正卵死亡率(%)
Tested Concentration ±S.E. Corrected
position death rate death rate
根 Root 5.00 80.38±4.61 80.04
2.50 69.33±8.24 68.99
1.25 30.72±11.88 29.94
0.60 18.15±7.85 17.24
0.30 13.24±6.02 12.28
茎 Stem 5.00 80.30±5.52 79.95
2.50 65.12±7.20 64.73
1.25 39.77±4.16 39.10
0.60 21.04±5.80 20.17
0.30 10.34±3.66 9.34
叶 Leaf 5.00 76.77±6.72 76.36
2.50 58.71±6.98 58.25
1.25 34.53±4.78 33.80
0.60 18.49±3.46 17.58
0.30 10.39±3.68 9.39
CK 1.09±0.77
根 Root y =1.7868x+1.0007 1.7307 1.5167~1.9748 0.9675
茎 Stem y =1.7937x+1.0065 1.6844 1.4866~1.9086 0.9986
叶 Leaf y =1.6934x+1.1114 1.9787 1.7141~2.2841 0.9956
提取
部位
Tested
position
毒力回归方程
Toxicity
regression
equation
致死中
浓度(%)
Median
lethal
concentration
95%置信
区间
Confidence
interval
of 95%
相关
系数(r)
Correlation
coefficient
表 4 假蒟不同部位石油醚假蒟提取物对斜纹夜蛾卵的毒力
测定结果
Tab.4 Toxicity results of petroleum ether extract from differ-
ent positions of Piper sarmentosum on Spodoptera litura egg





%)
D
e
a
t
h
r
a
t
e
卵龄(h)Egg of age





%)
D
e
a
t
h
r
a
t
e
卵龄(h)Egg of age
浸泡时间Soakingtime10s
浸泡时间Soakingtime20s
浸泡时间Soakingtime30s
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
0 24 48


 
浸泡时间Soakingtime10s
浸泡时间Soakingtime20s
浸泡时间Soakingtime30s
卵龄(h)Egg of age
浸泡时间Soakingtime10s
浸泡时间Soakingtime20s
浸泡时间Soakingtime30s





%)
D
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t
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浸泡时间Soakingtime10s
浸泡时间Soakingtime20s
浸泡时间Soakingtime30s
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6期
张光美和刘树生(1997)对苏云金杆菌对小菜蛾卵的
生物活性研究结果相一致。
本研究虽然对假蒟进行了不同溶剂的提取,但只
采用了索氏提取法,其他提取方法的提取效率、提取
效果是否更好未做比较研究;假蒟不同部位石油醚提
取物均表现出较高的生物活性,其各部位的活性物质
成分是否完全一致,还有待进一步研究;另外,张永强
等(2008)研究发现,植物因为采集时间不同而活性成
分含量有可能不同,因此,还需对相同部位不同季节
假蒟活性成分的提取测定进行深入研究。
假蒟在我国海南、福建、广东、广西、云南、贵州、
西藏等地分布十分广泛,基于其对斜纹夜蛾等重要农
业害虫的生物活性,进一步研究其活性成分、作用机
理,将有可能开发出新的植物保护剂。
4 结论
本研究结果表明,假蒟根、茎、叶不同部位石油醚
提取物对斜纹夜蛾卵均有较高的生物活性,是一种极
具开发潜力的杀虫植物。斜纹夜蛾卵龄是影响假蒟提
取物对卵生物活性的一个重要因子,在今后的开发利
用中,在低卵龄期喷施效果更佳。
参考文献:
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(责任编辑 麻小燕)
刘红芳等:假蒟不同极性部位提取物对斜纹夜蛾卵的生物活性 999· ·